【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，尤其涉及一种靶向乳腺癌的乳源外泌体药物递送系统及其制备方法和应用。
技术介绍
1、乳腺癌(bc)占女性所有新癌症病例的25～30％，是全球女性死亡的主要原因。临床常用治疗肿瘤药物的缺点明显，通常表现出低水溶性、非特异性肿瘤靶向、体内快速消除和严重副作用。传统载药靶向制剂易与体内其他生物分子相互作用，导致三个不同问题：毒性、免疫原性、单核吞噬细胞系统快速清除。因此，迫切需要开发具有稳定、高靶向特异性和低肿瘤毒性的新的药物递送系统，以解决乳腺癌患者面临的未满足的医疗需求。
2、外泌体是细胞因环境刺激或自我激活而分泌的纳米级(直径30～200nm)天然囊泡，膜具有脂质双层结构。研究发现，外泌体被认为是细胞间通讯的重要媒介，细胞吸收和分泌外泌体的过程是相互关联的。外泌体作为生物体内细胞通讯的“信使”，被多种不同的机制吸收和分泌，并对不同的细胞产生特异性作用。此外，外泌体的膜结构可以保护货物(例如核酸、蛋白质和药物)免受环境影响，从而延长半衰期并提高递送材料的体内稳定性。同时由于良好的安全性、生物相容性、低免疫原性，外泌体成为一种很有前途的药物递送载体，能够以最小的毒性将药物运送到细胞质中。
3、外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题，获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。传统外泌体大多从细胞和植物中提取而且多进行工程化修饰，产量很低并且成本高昂，难以达到大规模生产的要求。并且外泌体的质量均一性极度依赖其来源和提取方法。目前外泌体缺少稳定可靠的来源和标准化的提取方法，需要开发出更低廉、简洁
技术实现思路
1、为解决现有乳腺癌靶向制剂靶向性差，高细胞毒性和副作用严重等问题，本专利技术提供一种靶向乳腺癌的乳源外泌体药物递送系统及其制备方法和应用，本专利技术选择外泌体作为药物递送载体，相较于现有乳腺癌靶向制剂，外泌体可以更加高效、稳定的将药物递送到乳腺肿瘤组织，同时具备更高的生物安全性。为了克服传统外泌体产量低，来源不稳定，难以大规模生产的问题，本专利技术选择乳汁作为外泌体的来源，利用乳源外泌体上天然成份靶向乳腺癌。
2、本专利技术提供如下技术方案：
3、一种靶向乳腺癌的乳源外泌体药物递送系统的制备方法，包括如下步骤：
4、(1)将新鲜动物乳在1～5℃条件下，以2500～5000g离心5～30min，取乳清；
5、(2)取等体积的乳清与柠檬酸钠溶液混合，冰浴震摇1～10h，在1～5℃条件下，9000～12000g离心30～60min，取乳清；
6、(3)步骤(2)所得的乳清在1～5℃条件下，以40000～70000g超速离心40～90min，得到的沉淀即为乳源外泌体药物递送系统。
7、进一步地，步骤(2)中所述柠檬酸钠溶液的质量浓度为2％～10％，冰浴震摇2～6h。
8、本专利技术提供上述制备方法制得的乳源外泌体药物递送系统。
9、进一步地，所述的乳源外泌体药物递送系统对乳腺癌细胞有天然靶向性。
10、进一步地，所述的乳源外泌体药物递送系统未经修饰，靶向配体为乳源外泌体膜上天然成份，包括蛋白质，脂肪，多糖。
11、本专利技术提供一种载药乳源外泌体药物递送系统，通过采用超声法向乳源外泌体药物递送系统中装载药物或含药颗粒得到。
12、进一步地，超声法的具体过程为：将乳源外泌体药物递送系统与药物或含药颗粒在pbs缓冲液中混合，冰水浴条件下超声，超声功率为70～90w，超声30s后置于冰水浴放置30～60s，重复超声操作5～7个循环后，得到载药乳源外泌体药物递送系统。
13、进一步地，所述的药物包括小分子化合物药物、肽类药物、蛋白药物和基因药物。
14、进一步地，所述的小分子化合物药物包括紫杉醇和阿霉素。
15、本专利技术提供一种载药乳源外泌体冻干制剂的制备方法，包括如下步骤：
16、1)将冻干保护剂与载药乳源外泌体药物递送系统混合均匀，冻干保护剂与载药乳源外泌体药物递送系统的质量比为0.5～30:1；
17、2)经冷冻干燥后获得载药乳源外泌体冻干制剂。
18、进一步地，步骤1)所述冻干保护剂由2～4％海藻糖、2～4％甘露醇和ph7.4 pbs缓冲液构成。
19、进一步地，步骤2)的冷冻干燥程序为：
20、预冻：1h，结束温度-80℃，1h，结束温度-40℃；
21、升华：1h，结束温度-30℃，1h，结束温度-20℃，1h，结束温度-10℃；
22、解析干燥：6h，结束温度0℃。
23、本专利技术还提供上述的制备方法制得的载药乳源外泌体冻干制剂。
24、本专利技术还提供上述的乳源外泌体药物递送系统在制备乳腺癌靶向药物中的应用。
25、进一步地，所述药物特异性靶向乳腺癌细胞，包括luminal a型、ki67低表达、luminal b型、her-2+型和三阴性乳腺癌细胞。
26、本专利技术相对于现有技术具有的有益效果如下：
27、本专利技术提供了一种全新的乳腺癌靶向药物递送系统的制备和应用，本专利技术采用乳源外泌体作为药物递送载体，乳源外泌体可以对小分子化合物、核酸、蛋白等药物实现高效装载和稳定递送。乳源外泌体具有稳固的双分子磷脂结构,内部空腔有助于负载大量的水溶性物质,而双分子磷脂中间的疏水区微相则能包裹疏水性物质，这种特殊结构能保护其内容物在恶劣的胞外环境中长期存在而不被降解或稀释,也能避免被网状内皮系统捕获和清除,实现靶向效应。同时,乳源外泌体表面具有天然、特殊的脂质结构与蛋白,有利于与乳腺癌细胞靶向融合,将内容物或药物释放入靶细胞内部,对乳腺癌实现特异性靶向干预，从而提高治疗效果并降低毒性，成功弥补了传统靶向制剂易清除、靶向效果差、副作用严重等缺点。此外利用乳源外泌体作为药物载体具有良好的生物相容性与非免疫原性，能提高有效利用率、生物利用度，减少药物清除率。并且相较于传统外泌体，乳源外泌体的来源广泛、结构稳定、产量充足。本专利技术成功开发出价格低廉，可以大规模工业化生产的外泌体靶向药物递送系统，可以有效增强药物对乳腺癌治疗效果的同时降低了药物的副作用，具备良好的经济、市场前景和临床应用价值。
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1.一种靶向乳腺癌的乳源外泌体药物递送系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述柠檬酸钠溶液的质量浓度为2％～10％，冰浴震摇2～6h。
3.权利要求1或2所述的制备方法制得的乳源外泌体药物递送系统。
4.一种载药乳源外泌体药物递送系统，通过采用超声法向权利要求3所述的乳源外泌体药物递送系统中装载药物或含药颗粒得到。
5.根据权利要求4所述的载药乳源外泌体药物递送系统，其特征在于，超声法的具体过程为：将乳源外泌体药物递送系统与药物或含药颗粒在PBS缓冲液中混合，冰水浴条件下超声，超声功率为70～90W，超声30s后置于冰水浴放置30～60s，重复超声操作5～7个循环后，得到载药乳源外泌体药物递送系统。
6.根据权利要求4所述的载药乳源外泌体药物递送系统，其特征在于，所述的药物包括小分子化合物药物、肽类药物、蛋白药物和基因药物；所述的小分子化合物药物包括紫杉醇和阿霉素。
7.一种载药乳源外泌体冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
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1.一种靶向乳腺癌的乳源外泌体药物递送系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述柠檬酸钠溶液的质量浓度为2％～10％，冰浴震摇2～6h。
3.权利要求1或2所述的制备方法制得的乳源外泌体药物递送系统。
4.一种载药乳源外泌体药物递送系统，通过采用超声法向权利要求3所述的乳源外泌体药物递送系统中装载药物或含药颗粒得到。
5.根据权利要求4所述的载药乳源外泌体药物递送系统，其特征在于，超声法的具体过程为：将乳源外泌体药物递送系统与药物或含药颗粒在pbs缓冲液中混合，冰水浴条件下超声，超声功率为70～90w，超声30s后置于冰水浴放置30...
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