【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别涉及一种猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、猪圆环病毒3型（pcv3）是近年来新发现的一种病毒，感染后会导致猪呼吸、消化等多系统炎症和免疫、繁殖系统障碍，引起混合感染、继发感染等。目前pcv3在国内外已逐渐呈现流行趋势，给生猪养殖产业造成相当大的经济损失，pcv3疫苗产品的研发具有重要意义。pcv3病毒粒子呈二十面体，无囊膜，直径13～25 nm，衣壳蛋白由60个蛋白质亚基组成，属于共价闭合环状单链dna基因组结构，基因组全长约为2,000nt，主要包括3个开放性阅读框（opening reading frame，orf），其中orf2是变异最大的区域，编码唯一的结构蛋白（cap蛋白），与病毒的感染和免疫有较强的相关性。cap蛋白为pcv3病毒的主要保护性抗原表位，是制备pcv3疫苗的理想靶抗原。
2、pcv3 cap蛋白含量是影响疫苗免疫效果的最主要因素。目前抗原定量检测方法多用酶联免疫吸附实验法(enzyme linked immunosorbent assay，elisa)。elisa定量方法将已知的抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，然后进行抗原的定量，检测结果准确且稳定。然而现有定量方法的最低检出限仍较高，当检测样本中猪圆环病毒3型的浓度较低时，难以准确检测猪圆环病毒3型的含量。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒及其应用，旨
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，包括检测板、抗原标准品、兔多抗及抗兔酶标二抗；
3、其中，所述检测板包被有抗pcv3 cap蛋白的单克隆抗体；
4、所述兔多抗为抗pcv3 cap蛋白的兔多克隆抗体；
5、所述抗原标准品为pcv3 cap标准品。
6、可选地，所述检测板上开有多个检测孔，所述抗pcv3 cap蛋白的单克隆抗体包被于多个检测孔内；和/或，
7、所述抗pcv3 cap蛋白的单克隆抗体的含量为0.05~0.1μg/孔。
8、可选地，所述抗原标准品为pcv3 cap标准品，所述pcv3 cap标准品的质量浓度为3~5μg/ml。
9、可选地，所述兔多抗为抗pcv3 cap蛋白的兔多克隆抗体，所述抗pcv3 cap蛋白的兔多克隆抗体的质量浓度为0.5~1.5μg/ml。
10、可选地，所述抗兔酶标二抗包括羊抗兔酶标二抗溶液，其中，所述羊抗兔酶标二抗的质量浓度为0.5~1ug/ml。
11、可选地，所述猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒还包括洗涤液、显色液及终止液。
12、可选地，所述浓缩洗涤液包括磷酸盐溶液，所述磷酸盐溶液的ph为7.0~7.4；和/或，
13、所述显色液包括3,3’-5,5’-四甲基联苯胺溶液、双氧水及乙酸钠；和/或，
14、所述终止液包括硫酸溶液。
15、本专利技术还提出一种如上所述的猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒的应用方法，用于检测待测样品中猪圆环病毒3型抗原的含量，所述应用方法包括以下步骤：
16、s10、将待测样品稀释后，加入检测孔，得待测样品组；
17、s20、按浓度梯度稀释标准品，加入检测孔中，得阳性对照组，将稀释液加入检测孔中，得阴性对照组；
18、s30、将待测样品组、阳性对照组及阴性对照组36~38℃下恒温孵育后洗涤干燥，再加入兔多抗，36~38℃下恒温孵育后洗涤干燥，再加入抗兔酶标二抗36~38℃下恒温孵育后洗涤干燥；
19、s40、向待测样品组、阳性对照组及阴性对照组的检测孔内分别加入显色液，避光静置8~12分钟后加入终止液，测定待测样品组、阳性对照组及阴性对照组在450nm波长下的光吸收值；
20、s50、根据光吸收值计算并判定检测结果。
21、可选地，步骤s10及步骤s20中采用磷酸盐溶液进行稀释；和/或，
22、步骤s40中，所述显色液包括3,3’-5,5’-四甲基联苯胺、双氧水及乙酸钠，所述终止液包括硫酸溶液。
23、可选地，步骤s50中：
24、检测结果包括定性检测和定量检测；
25、进行定性检测时，co值=阴性对照组的光吸收值od0×2.1，样品值=待测样品组的光吸收值odx/co值，样品值＞1时待测样品为阳性，样品值≤1时待测样品为阴性；
26、进行定量检测时，以各阳性对照组的光吸收值为x轴，以各阳性对照组的光吸收值为y轴，绘制拟合曲线，得到拟合曲线方程，将待测样品组的光吸收值带入拟合曲线方程计算出待测样品的浓度。
27、在本专利技术的技术方案中，通过联用抗pcv3 cap蛋白的单克隆抗体和抗pcv3 cap蛋白的兔多克隆抗体，以使得在检测过程中，样本中的pcv3 cap蛋白抗原能同时结合单克隆抗体和多克隆抗体，以提高单位抗原结合抗体的数量，从而提高单位抗原结合酶标二抗的数量，进而提高信号强度，使得抗原浓度偏低时信号强度高于空白对照组的信号强度，降低定性检测时的最低检出限，提高检测灵敏度；通过对猪圆环病毒3型蛋白抗原的定量，大大促进了抗原生产在线监测、疫苗工艺优化、疫苗质量评估和疫苗效力检验；本猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒包被抗pcv3 cap蛋白单克隆抗体制备检测板，加入抗原反应后再加入抗pcv3 cap蛋白，配以抗兔酶标记二抗，从而实现了对双抗夹心法elisa方法的优化，放大了反应信号，不仅具有elisa检测方法敏感、特异、操作简单、省时省力、稳定性好和适合于批量检测的优点，还使得检测灵敏性更好。
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1.一种猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，包括检测板、抗原标准品、兔多抗及抗兔酶标二抗；
2.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，所述检测板上开有多个检测孔，所述抗PCV3 cap蛋白的单克隆抗体包被于多个检测孔内；和/或，
3.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，所述PCV3cap标准品的质量浓度为3~5μg/ml。
4.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗PCV3cap蛋白的兔多克隆抗体的质量浓度为0.5~1.5μg/ml。
5.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗兔酶标二抗包括羊抗兔酶标二抗溶液，其中，所述羊抗兔酶标二抗的质量浓度为0.5~1ug/mL。
6.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒，其特征在于，所述猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒还包括洗涤液、显色液及终止液。
7.如权利要求6所述的猪圆环病毒3型EL
8.一种如权利要求1至7任意一项所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒的应用方法，用于检测待测样品中猪圆环病毒3型抗原的含量，其特征在于，包括以下步骤：
9.如权利要求8所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤S10及步骤S20中采用磷酸盐溶液进行稀释；和/或，
10.如权利要求8所述的猪圆环病毒3型ELISA抗原检测试剂盒的应用方法，其特征在于，步骤S50中：
...【技术特征摘要】
1.一种猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，其特征在于，包括检测板、抗原标准品、兔多抗及抗兔酶标二抗；
2.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，其特征在于，所述检测板上开有多个检测孔，所述抗pcv3 cap蛋白的单克隆抗体包被于多个检测孔内；和/或，
3.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，其特征在于，所述pcv3cap标准品的质量浓度为3~5μg/ml。
4.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗pcv3cap蛋白的兔多克隆抗体的质量浓度为0.5~1.5μg/ml。
5.如权利要求1所述的猪圆环病毒3型elisa抗原检测试剂盒，其特征在于，所述抗兔酶标二抗包括羊抗兔酶标二抗溶液，其中，所述羊抗兔酶标二抗的质量浓度为0.5~1u...
【专利技术属性】
技术研发人员：李文静，李建，孙文，吕亚洁，冯钊，薛霜，刘项羽，郑良益，张敏，李会，郑成，谢红玲，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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