【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化妆品，尤其涉及一种重组人源弹性蛋白的制备方法及其应用。
技术介绍
1、弹性蛋白是人体内一种重要的细胞外基质蛋白，含量仅次于胶原蛋白。弹性蛋白不仅能赋予组织弹性，还在促进细胞粘附、增殖、分化、趋化和迁移等多种细胞功能的调节中发挥着重要的作用，在医学美容和护肤领域备受关注。
2、弹性蛋白目前主要通过动物组织提取和基因重组来制备。动物组织提取的弹性蛋白容易发生过度降解，破坏了天然弹性蛋白的结构和功能，还存在免疫原性、疾病传播风险等问题。利用基因重组制备弹性蛋白，具有成本低、易于规模化生产等优势，具有广阔的发展前景。
3、为此，本专利技术提出一种重组人源弹性蛋白的制备方法及其在化妆品中的应用实例，所述重组人源弹性蛋白的氨基酸序列完全来自于人弹性蛋白，且具有与天然弹性蛋白相似的二级结构和特性；另一方面通过优化并标准化化妆品原料抗衰、抗皱紧致功效检测的方法及手段，使本专利技术所制备的重组人源弹性蛋白质量稳定、功效确定，在化妆品中添加适量的重组人源弹性蛋白可解决皮肤松弛、皮肤弹性下降和皱纹等问题，达到了抗衰、抗皱紧致的功效，对衰老皮肤有修复作用，使皮肤保持年轻健康状态。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，克服现有技术存在的缺陷，而公开一种重组人源弹性蛋白的制备方法及其应用。即，一种具有抗衰、抗皱紧致功效的重组人源弹性蛋白的制备方法及其在化妆品领域的应用，包括：具抗衰、抗皱紧致功效的重组人源弹性蛋白的制备方法、检测手段选用人成纤维细胞增殖实验、人成纤维
2、本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本专利技术提出的一种重组人源弹性蛋白，所述的重组人源弹性蛋白包括核苷酸序列如seq id no.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域。
3、本专利技术的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。
4、较佳地，所述的重组人源弹性蛋白由如seq id no.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域，以及分泌标签、组氨酸标签、荧光蛋白和蛋白酶切割位点中的一种或多种组成。
5、较佳地，所述的重组人源弹性蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
6、较佳地，所述核苷酸是重组质粒、重组载体或重组细菌。
7、其中所述如seq id no.1所示的核苷酸序列如下：
8、
9、
10、其中所述如seq id no.2所示的重组人源弹性蛋白的氨基酸序列如下：
11、speaqaaaaakaakygaagagvlgglvpgapgavpgvpgtggvpgvgtpaaaaakaaakaaqfglvpgvgvapgvgvapgvgvapgvglapgvgvapgvgvapgvgvapgigpggvaaaaksaakvaakaqlraaaglgagipglgvgvgvpglgvgagvpglgvgagvpgfgagadegvrrslspelregdpsssqhlpstpssprvpgalaaakaakygaavpgvlgglgalggvgipggvvgagpaaaaaaakaaakaaqfglvgaaglgglgvgglgvpgvgglggippaaaakaakygaaglggvlggagqfplggvaarpgfglspifpggaclgkacgrkrk。
12、本专利技术的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种如上所述的重组人源弹性蛋白的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：s1：合成编码所述重组人源弹性蛋白如seq id no.1所示的核苷酸序列；s2：将上述如seq id no.1所示的核苷酸序列插入pet28a质粒，构建重组载体，并导入大肠杆菌bl21中，筛选得到重组工程菌；s3：将所述工程菌转入lb培养基中，扩大培养，加入iptg诱导表达；s4：离心收集菌体沉淀，采用镍离子亲和色谱柱洗脱液分散，高压均质机均质多次，使菌体充分破碎，把破碎液离心后收集上清液；s5：把所得上清液转入镍离子亲和色谱柱中，纯化得到弹性蛋白溶液；s6：用透析法除去溶液中的咪唑，冷冻干燥，即得如seq id no.2所示的重组人源弹性蛋白。
13、较佳地，所述步骤s3的扩大培养的条件是34-45℃扩大培养10-12h；加入iptg的条件是当od600达到0.8-1.2时，加入终浓度为1mm的iptg；诱导表达的条件是25℃诱导表达12h；所述步骤s4的离心收集菌体沉淀的条件是1500-5000rps，0-8℃，15-45min离心收集菌体沉淀；高压均质机均质多次的条件是800bar，4℃，40hz均质2-3次；把破碎液离心的条件是8000rps，4℃，20min；所述步骤s6的透析法是使用0.02m pbs透析。
14、较佳地，所述步骤s3的扩大培养的最佳温度是37℃。
15、较佳地，所述步骤s4的离心收集菌体沉淀的最佳条件是3000rps，4℃，30min。
16、本专利技术的目的及解决其技术问题再采用以下技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种如上所述重组人源弹性蛋白在检测评估该重组人源弹性蛋白的抗衰、抗皱紧致功效的应用。
17、较佳地，所述应用包括但不限于人成纤维细胞增殖实验、人成纤维细胞迁移实验、人成纤维细胞胞外基质(ecm)相关基因表达量等细胞实验的一种或多种联合。
18、本专利技术的目的及解决其技术问题另外再采用以下技术方案来实现。依据本专利技术提出的一种如上所述重组人源弹性蛋白在化妆品中的应用。
19、较佳地，所述在化妆品中的应用是如seq id no.2所示的重组人源弹性蛋白应用于作敷用化妆品抗皱紧致精华液、抗皱紧致乳液、抗皱紧致爽肤水、抗皱紧致面霜、抗皱紧致面膜的添加物的任意一种。
20、此外，通过本专利技术的制备方法可以制作化妆品，所述化妆品的添加物包括如上所述的seq id no.2。
21、本专利技术与现有技术相比具有明显的优点和有益效果。借由上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术至少具有以下优点效果：
22、第一、该具抗衰、抗皱紧致功效的重组人源弹性蛋白的氨基酸序列完全来自于人弹性蛋白，具有与天然弹性蛋白相似的二级结构与特性。
23、第二、该具抗衰、抗皱紧致功效的重组人源弹性蛋白在大肠杆菌中高效表达，易于实现本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域。
2.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白由如SEQ ID NO.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域，以及分泌标签、组氨酸标签、荧光蛋白和蛋白酶切割位点中的一种或多种组成。
3.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述核苷酸是重组质粒、重组载体或重组细菌。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的重组人源弹性蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：
7.一种如权利要求1-4任一项所述的重组人源弹性蛋白在检测评估该重组人源弹性蛋白的抗衰、抗皱紧致功效的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征
9.一种如权利要求1-4任一项所述的重组人源弹性蛋白在化妆品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：如SEQ ID NO.2所示的重组人源弹性蛋白应用于作敷用化妆品抗皱紧致精华液、抗皱紧致乳液、抗皱紧致爽肤水、抗皱紧致面霜、抗皱紧致面膜的添加物的任意一种。
...【技术特征摘要】
1.一种重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白包括核苷酸序列如seq id no.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域。
2.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白由如seq id no.1所示的人全长弹性蛋白氨基酸序列中的一个或多个弹性蛋白结构域，以及分泌标签、组氨酸标签、荧光蛋白和蛋白酶切割位点中的一种或多种组成。
3.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述的重组人源弹性蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.根据权利要求1所述的重组人源弹性蛋白，其特征在于：所述核苷酸是重组质粒、重组载体或重组细菌。
5.一种如权利要求1-4任一项所述的重组人源弹性蛋白的制备...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘忠，方小霞，王炯超，陈雅丽，梁钦智，
申请(专利权)人：百世美生物技术浙江有限公司，
类型：发明
国别省市：
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