三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，包括包被有二碘甲状腺原氨酸－明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体、解离剂、发光底物Ａ液、发光底物Ｂ液及浓缩洗液。本发明专利技术还公开了该试剂盒的制备方法。本发明专利技术的优点在于采用了标记抗体包被抗原类似物的方法，包被了一种激素的化学结构类似物，而该类似物与所测激素具有同等的免疫源性，因此能与该激素的抗体进行特异性结合，但与甲状腺结合蛋白（ＴＨＢＰ）的结合能力却大为降低，在很大程度上减小了结合蛋白对测量系统的影响。本试剂盒的灵敏度、精密性和检测范围大大提高，反应时间大大缩短，提高产品性能的同时又降低了产品成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外免疫检测，尤其是涉及一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒， 本专利技术还涉及该试剂盒的制备方法。
技术介绍
三碘甲状腺原氨酸(3，5，3’_三碘甲状腺原氨酸，T3)是一种分子量为651的碘化 酪氨酸，与甲状腺素(T4) 一样是一种重要的甲状腺激素。碘和酪氨酸是合成甲状腺激素的 主要原料，甲状腺球蛋白是碘化的场所和原料，酪氨酸的碘化和碘化酪氨酸的偶联均在此 进行，水解甲状腺球蛋白时T3、T4被分泌入血，分泌物中90%为14，10%为了3。血液中20% 的Τ3由甲状腺直接合成，另外80%的Τ3是由Τ4脱去1分子碘生成，脱碘位置不同也可形 成反Τ3，但反Τ3没有生物活性。Τ3的半衰期为1.5天，20%在外周组织代谢消除，80%经 脱碘代谢。血清中Τ3的量只约为Τ4的1/60，但其生物活性比Τ4大5倍，因此Τ3的测定对诊 断甲状腺功能紊乱和监测甲状腺技能非常有意义。对甲状腺功能亢进的病人来讲，大多数 患者的总Τ3和总Τ4的水平都是升高的。不过在某些病例中，甲状腺功能亢进仅仅是由于 Τ3的增多引起的(Τ3型甲亢症)，因此对fT4正常的甲亢患者，建议检测T3，尤其对于fT4 和TSH均正常的患者(一般患者常首先检测fT4和TSH)，更应进一步检测Τ3。Τ3水平升高 而Τ4正常还可见于甲状腺功能正常而患有功能自主性甲状腺疾病(Graves眼病)的患者， 也可为亚临床型甲状腺功能衰退者的一种代偿现象，同时伴有TSH分泌增多。大量的实验资料表明，测定血清T3是判断甲状腺功能亢进首选指标之一，特别是 T3毒血症患者，血清T4浓度正常，而T3却明显升高。因此，测定血清T3是临床诊断甲状腺 功能的一项重要指标。一般来讲，甲亢病人血清T3值会明显升高。在多数甲亢病例中，血 清T3的升高和血清T4升高相平行；而T3毒症，亦称T3性甲亢中，血清T4值在正常范围， 而仅T3升高。临床上常见到某些病人在发展成典型的甲状腺毒症前，先经过一个血清T3 水平升高阶段，说明测定血清T3对于诊断甲亢较测定血清T4更有意义。此外在甲亢病人 进行放射性碘或药物治疗过程中，血清T4降至正常，而血清T3仍高于正常，直至临床甲状 腺功能恢复正常，血清T3方降至正常水平；故测定血清T3又可作为判断疗效的可靠指标。从检测原理上来讲，目前临床上常用的检测三碘甲状腺原氨酸的方法主要是竞争 法，包括标记抗原(包被抗体)的检测方法和标记抗体(包被抗原)的检测方法两种，国外 试剂多为标记抗原的方法，国内试剂多为标记抗体的方法。从检测技术上来讲，过去以放免为代表的早期T3、T4测定试剂盒受方法学的限 制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多 的为酶联免疫技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫 技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快 速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。免疫 磁微粒技术是近几年新兴技术，它是利用高分子合成一定粒度大小的磁性固相微粒做载体，载体表面修饰有一定数量的化学功能团，可通过化学偶联等方法包被上具有特异性亲 和力的免疫活性物质(抗原或抗体)，具有分离速度快、效率高、可重复性好、反应均相等诸 多优点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，该试剂盒将酶促 化学发光技术与磁分离技术相结合，成本低廉，简便快速，结果准确；本专利技术的另一目的还 在于提供该试剂盒的制备方法。为实现上述目的，本专利技术可采取下述技术方案本专利技术所述的三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，包括包被有二碘甲状腺原氨 酸_明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲 状腺原氨酸抗体、解离剂、发光底物A液、发光底物B液及浓缩洗液。所述包被有二碘甲状腺原氨酸-明胶的磁微粒混悬液中，所采用的磁微粒粒径为 0. 8-1. 5um，表面含有浓度为20-30ueq/g的羧基活性基团。所述三碘甲状腺原氨酸系列校准品采用去激素血清为基质，加入三碘甲状腺原氨 酸纯品配制而成。所述辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体，是将辣根过氧化物酶与鼠抗 三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体相连接。所述解离剂为含有1-苯胺基-8-萘磺酸(ANS)的Tris-NaCl缓冲液(三(羟甲 基)氨基甲烷-盐酸缓冲液)。所述发光底物A液由酶促化学发光底物、增强剂和氨基酸组成；发光底物B液由氨 基酸氧化酶和稳定剂组成。所述浓缩洗液为加有稳定剂和表面活性剂的磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)。本专利技术三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒的制备方法，包括下述步骤第一步，包被有二碘甲状腺原氨酸_明胶的磁微粒混悬液的制备根据使用量取羧基磁微粒，用1-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺(EDC) 和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)在酸性条件下(PH4. 5-PH5. 5)进行活化，活化完成后，加磁 场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用PH7. 6的0. OlM的PBS缓冲液洗去多余活化 剂；加入适量的二碘甲状腺原氨酸-明胶，使其浓度为0. 5ul/mg磁微粒，在弱碱性条件下 (PH7. 4-PH8. 4)震荡反应；反应结束后加磁场，静置使磁微粒与液体分开，弃去上清，用含 有牛血清白蛋白的0. OlM的PBS缓冲液进行封闭，封闭结束后，加入封闭液以保存磁微 粒，使磁微粒的最终浓度为0. 5mg/ml ；该磁微粒混悬液置于2_8度保存，以备使用；第二步，三碘甲状腺原氨酸系列校准品的制备用含有0.2%NaN3(防腐剂)和0. 15%-0. 25%PC300(防腐剂)的去激 素血清将三碘甲状腺原氨酸纯品配制成标示浓度为0ng/ml、0. 5ng/ml、lng/ml、2. 5ng/ml、 5ng/ml、10ng/ml的一系列校准品；第三步，辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体的制备用活化剂EDC(1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺)将辣根过氧化物酶上的 氨基活化，然后加入鼠抗三碘甲状腺原氨酸单克隆抗体，使抗体上的羧基与活化过的氨基缩合为酰胺化合物，透析后既得三碘甲状腺原氨酸酶标抗体；在标记好的溶液中，等比加入 甘油-20度保存备用；第四步，解离剂的配制取纯化水、Tris, NaCl, Proclin300、ANS按照下述比例配制成解离剂纯化水 1000ml、Tri s 6. 05g、NaCl 8. 5g、Procl in3002ml、ANS l_3g ；第五步，发光底物A液和发光底物B液的配制发光底物A 液取 0. 2M Tris-Hcl、0. 15mM Luminol (鲁米诺)、0. 59mM 羟基香豆 素、0. 59mM没食子酸配制而成；发光底物B液取0. 2M乙酸-乙酸盐缓冲、0. 85mM氨基酸氧化酶、0. 008tween20、 0. 5mM DTPA(二乙烯三胺五乙酸)、0. 12mM维生素C配制而成。第六步，浓缩洗液的配制取NaH2P04 · 2H20、Na2HP04 · 12H20、NaCl, Tween20、蒸馏水按照下述比例配制而 成NaH2P04 · 2H20 4. 6g、Na2HP04 · 12H20 62. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种三碘甲状腺原氨酸定量检测试剂盒，其特征在于：它包括包被有二碘甲状腺原氨酸－－明胶的磁微粒混悬液、三碘甲状腺原氨酸系列校准品、辣根过氧化物酶标记的三碘甲状腺原氨酸抗体、解离剂、发光底物Ａ液、发光底物Ｂ液及浓缩洗液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高晓丹，陈晓玲，刘保鑫，付光宇，渠海，马建军，项立红，吴学炜，苗拥军，
申请(专利权)人：郑州安图绿科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]