【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质工程化技术，特别地，涉及生物相关正交细胞因子/受体对。
技术介绍
1、操纵细胞特别是免疫细胞以分化、开发特化功能并在数目方面扩大令人具有极大的临床兴趣。影响这些活性的许多蛋白质因子是本领域已知的，特别包括细胞因子和趋化因子。然而，这些信号传导分子还对未被靶向操作的细胞具有多效性作用，因此期望选择性活化靶细胞群中的信号传导的方法。特别地，工程化t细胞以进行控制的行为是令人感兴趣的。例如，在过继性免疫疗法中，将t细胞从血液中分离，离体处理并重新输注到患者体内。t细胞经工程化以用于治疗性应用，诸如识别和杀死癌细胞、细胞内病原体和参与自身免疫的细胞。
2、基于细胞的疗法中的关键挑战是将过继转移的细胞工程化成所需行为，诸如活化、扩增等，其被保护免于内源性信号传导途径，不影响非靶向内源性细胞，并且可一旦施用给患者后便加以控制。这因为发育可塑性和环境因素在决定t细胞命运、功能和定位方面所发挥的巨大影响而对于t细胞工程化是特别有意义的。
3、以独立或正交于天然蛋白质或配体的影响的方式操纵蛋白质结合并应答修饰的配体的能力构成蛋白质工程化中的重大挑战。迄今为止，已经创建了许多与类似的天然相互作用正交的合成配体-直向同源物受体对。在用于此项工作的蛋白质中包括核激素受体和g蛋白偶联受体。尽管进行了大量工作来工程化由合成小分子配体活化的受体，但是生物相关蛋白对的工程化仍然是一项重大挑战。
技术实现思路
1、提供了工程化的正交细胞因子受体/配体对及其使用方法。工程化
2、用于工程化正交细胞因子受体对的方法可包括以下步骤：(a)将氨基酸变化工程化到天然受体中以破坏与天然细胞因子的结合；(b)在用于受体结合的接触残基处将氨基酸变化工程化到所述天然细胞因子中，(c)选择结合至直向同源物受体的细胞因子直向同源物；(d)舍弃结合至天然受体的直向同源物细胞因子，或者可替代地至步骤(c)和(d)；(e)选择结合至直向同源物细胞因子的受体直向同源物；(f)舍弃结合至天然细胞因子的直向同源物受体。在优选的实施方案中，细胞因子/受体复合物结构的知识用于选择用于定点或易错诱变的氨基酸位置。便利地，酵母展示系统可用于选择过程，但是其它展示和选择方法也是有用的。
3、在一些实施方案中，提供了工程化的细胞，其中细胞已经通过引入本专利技术的直向同源受体来修饰。任何细胞均可用于此目的。在一些实施方案中，所述细胞为t细胞，包括但不限于初始cd8+t细胞、细胞毒性cd8+t细胞、初始cd4+t细胞、辅助t细胞例如th1、th2、th9、th11、th22、tfh；调控性t细胞例如tr1、天然treg、诱导型treg；记忆t细胞例如中央记忆t细胞、效应记忆t细胞、nkt细胞、γδt细胞等。在其它实施方案中，工程化细胞为干细胞，例如造血干细胞、nk细胞、巨噬细胞或树突细胞。在一些实施方案中，在转移到受试者中之前，将细胞在离体程序中遗传修饰。工程化的细胞可以用于疗法的单位剂量来提供，并且相对于预期的接受者可为同种异体的、自体的等。
4、在一些实施方案中，提供了包含编码正交受体的编码序列的载体，其中编码序列可操作地连接至在所需细胞中有活性的启动子。各种载体为本领域中已知的并可用于此目的，例如病毒载体、质粒载体、微环载体，所述载体可整合到靶细胞基因组中或可以游离基因方式维持。编码受体的载体可在试剂盒中提供，与编码结合至并活化受体的直向同源细胞因子的载体组合。在一些实施方案中，直向同源细胞因子的编码序列可操作地连接至高表达启动子，并且可被优化针以进行生产。在其它实施方案中，提供了试剂盒，在所述试剂盒中编码直向同源受体的载体与直向同源细胞因子的纯化组合物一起，例如以包装用于向患者施用的单位剂量来提供。在另一些实施方案中，提供了试剂盒，在所述试剂盒中编码直向同源受体的载体与编码直向同源细胞因子的载体一起提供，以使得直向同源受体在细胞中表达，并且还表达旨在用于由同一细胞分泌的直向同源细胞因子，以使得能够进行自分泌正交细胞因子受体信号传导。
5、在一些实施方案中，提供了治疗方法，所述方法包括将工程化的细胞群引入到有需要的接受者中，其中所述细胞群已经通过引入编码本专利技术的直向同源受体的序列来修饰。细胞群可被离体工程化，并且通常相对于接受者为自体同源的或同种异体的。在一些实施方案中，在施用工程化细胞后，使引入的细胞群在体内与同源直向同源细胞因子接触。本专利技术的优势为在直向同源细胞因子与天然受体之间缺乏交叉反应性。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种人CD122多肽，其具有在H133D和Y134F位置处的氨基酸取代。
2.一种核酸，其编码如权利要求1所述的多肽。
3.一种表达载体，其包含如权利要求2所述的核酸。
4.如权利要求3所述的载体，其中所述载体为病毒载体。
5.如权利要求4所述的载体，其中所述病毒载体为逆转录酶病毒载体或慢病毒载体，且所述核酸编码权利要求1所述的多肽。
6.一种工程化细胞，其由权利要求3-5中任一项所述的载体来转化。
7.如权利要求6所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞为T细胞，其选自辅助T细胞、调控性T细胞、记忆T细胞、NKT细胞、γδT细胞、初始CD8+T细胞、细胞毒性CD8+T细胞或初始CD4+T细胞。
8.如权利要求6所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞为干细胞、NK细胞、巨噬细胞或树突细胞。
9.如权利要求8所述的工程化细胞，其中所述干细胞为造血干细胞。
10.如权利要求7所述的工程化细胞，其中所述T细胞为初始CD8+T细胞、细胞毒性CD8+T细胞或初始CD4+T细胞。
...【技术特征摘要】
1.一种人cd122多肽，其具有在h133d和y134f位置处的氨基酸取代。
2.一种核酸，其编码如权利要求1所述的多肽。
3.一种表达载体，其包含如权利要求2所述的核酸。
4.如权利要求3所述的载体，其中所述载体为病毒载体。
5.如权利要求4所述的载体，其中所述病毒载体为逆转录酶病毒载体或慢病毒载体，且所述核酸编码权利要求1所述的多肽。
6.一种工程化细胞，其由权利要求3-5中任一项所述的载体来转化。
7.如权利要求6所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞为t细胞，其选自辅助t细胞、调控性t细胞、记忆t细胞、nkt细胞、γδt细胞、初始cd8+t细胞、细胞毒性cd8+t细胞或初始cd4+t细胞。
8.如权利要求6所述的工程化细胞，其中所述工程化细胞为干细胞、nk细胞、巨噬细胞或树突细胞。
9.如权利要求8所述的工程化细胞，其中所述干细胞为造血干细胞。
10.如权利要求7所述的工程化细胞，其中所述t细胞为初始cd8+t细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：凯南·克里斯多夫·加西亚，乔纳森·绍克罗斯克，大卫·贝克，克里斯·金，
申请(专利权)人：小利兰·斯坦福大学托管委员会，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。