【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种新型嵌合抗原受体，该嵌合抗原受体包括含有死亡结构域的受体的胞内结构域作为胞内信号传导结构域，还涉及一种表达该嵌合抗原受体的免疫细胞。
技术介绍
1、治疗癌症的方法经历了一个不断发展变化的过程，至今仍在不断利用诸如手术、化疗、放疗等技术。然而，现有的这些治疗癌症的方法存在一个问题，即大多只在癌症未发生转移的早期阶段有效，如果在癌症已经发生转移的阶段进行手术，以后复发的可能性也很大。因此，最近不断有研究开发出利用免疫反应治疗癌症的方法。
2、其中，人们对利用免疫细胞来强化免疫细胞或对免疫细胞进行基因修饰并将其注射回患者体内的细胞治疗方法越来越感兴趣。例如，研究了诸如肿瘤浸润淋巴细胞(til)、嵌合抗原受体(car)和t细胞受体(tcr)等技术。特别是嵌合抗原受体，它是一种旨在向t细胞或自然杀伤细胞(nk细胞)递送抗原特异性的人工受体，该受体由可通过与癌细胞特异性抗原结合来激活免疫细胞并提供特异性免疫的胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域组成。此外，表达这种嵌合抗原受体的t细胞被命名为car-t细胞(kershaw等人，nat.rev.immunol.，5(12)：928-940(2005)；restifo等人，nat.rev.immunol.，12(4)：269-281(2012))，自然杀伤细胞被命名为car-nk细胞。
3、嵌合抗原受体的胞内信号传导结构域主要基于t细胞受体(第一代car)的信号传导亚基cd3ζ的胞内信号传导结构域。此外，它还发展为在嵌合抗原受体中加入促进免疫细胞生
4、然而，car-t等疗法对癌细胞有效，但在某些情况下会对健康组织造成部分非特异性攻击，从而产生副作用。为了克服这一问题，人们继续开展研究，通过提高癌细胞的抗原识别能力，尽量使攻击正常细胞的副作用最小化。然而，仍然存在一个问题，即一旦注射了car-t，即使癌细胞被清除，有毒t细胞仍会继续发挥其功能，从而导致非特异性攻击的副作用，如对正常细胞的细胞毒性。此外，由于癌症复发的原因是癌症中存在的抗原特异性的缺乏，以及抗原的多样性和异质性，因此，为了提高抗癌疗效，防止癌症复发，还需要开发一种“逻辑门控car推进”技术，即设计一种多靶点抗原的car技术，以提高抗癌疗效，并确保正常细胞的安全性。
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的目的是提供一种新型嵌合抗原受体，该嵌合抗原受体在免疫细胞中表达时，可以放大对癌细胞的细胞毒性活性，而不显示对正常细胞的细胞毒性。
3、此外，本专利技术的目的是提供一种表达嵌合抗原受体的多核苷酸和表达载体。
4、此外，本专利技术的目的是提供一种免疫细胞，该免疫细胞在其表面上表达嵌合抗原受体，对癌症具有优异的治疗效果，同时对正常细胞具有安全性，因此该免疫细胞可作为癌症治疗的有用细胞。
5、更进一步地，本专利技术的目的还在于提供一种使用该免疫细胞治疗癌症的药物组合物。
6、技术方案
7、为了实现上述目的，本专利技术的一个方面提供了一种嵌合抗原受体(car)，其包括：含有抗原结合位点的胞外结构域(胞外结合结构域)；跨膜结构域；以及胞内信号传导结构域，其包括含有死亡结构域的受体的胞内结构域。
8、本专利技术的另一方面提供了含有编码嵌合抗原受体的碱基序列的多核苷酸，以及含有该多核苷酸的表达载体。
9、本专利技术的另一方面提供了一种免疫细胞，该免疫细胞在免疫细胞的表面上表达嵌合抗原受体作为第一嵌合抗原受体；并在免疫细胞的表面上表达第二嵌合抗原受体，第二嵌合抗原受体包括：含有抗原结合位点的胞外结构域，该抗原结合位点特异性结合癌细胞中表达的抗原；跨膜结构域；和胞内信号传导结构域。
10、本专利技术的另一方面还提供了一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含免疫细胞。
11、有益效果
12、本专利技术的嵌合抗原受体可通过在正常细胞和癌细胞两者中均表达的抗原传递信号，其中，当单独传递信号时，表达该受体的免疫细胞不显示细胞毒性或显示较少的细胞毒性。此外，如果嵌合抗原受体与抗原的结合时间较长，则可诱导免疫细胞凋亡，因此具有对正常细胞而不是癌症细胞不显示细胞毒性的优点，从而确保了稳定性。
13、同时，当嵌合抗原受体与癌细胞中表达的抗原结合时，通过与另一种能够识别并结合癌细胞特异性抗原的嵌合抗原受体共同作用而发生信号传递，使得嵌合抗原受体具有发挥协同作用的特性，与癌细胞特异性的单一嵌合抗原受体相比，能够表现出更大的细胞毒性，从而可非常有效地用于治疗癌症。
14、然而，本专利技术的效果并不局限于上述效果，本领域技术人员可以通过以下描述清楚地了解本专利技术未提及的其他效果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述含有死亡结构域的受体是选自由Fas、TNFRI、p75NTR、DR3、DR4、DR5、EDAR和DR6组成的组中的任一种。
3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点与癌细胞和正常细胞两者中都表达的抗原特异性结合。
4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点与EGFR特异性结合。
5.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点是抗体的单链可变片段(scFv)。
6.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述胞外结构域进一步包含选自由铰链结构域和间隔结构域组成的组中的至少一个。
7.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体，其中，所述铰链结构域或间隔结构域选自由Myc表位、CD8铰链结构域和Fc组成的组中的至少一个。
8.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述跨膜结构域是选自由T细胞受体(TCR)的α、β或ζ链，CD28，CD3ε，CD45，CD4，CD5，CD8
9.一种多核苷酸，包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合抗原受体的碱基序列。
10.一种表达载体，包含根据权利要求9所述的多核苷酸。
11.一种免疫细胞，在所述免疫细胞的表面上表达根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合抗原受体作为第一嵌合抗原受体；和
12.根据权利要求11所述的免疫细胞，其中，所述免疫细胞是选自由自然杀伤细胞(NK细胞)、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT细胞)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、巨噬细胞和树突状细胞组成的组中的任一种。
13.根据权利要求11所述的免疫细胞，其中，所述免疫细胞在其表面上进一步表达至少一个嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括：胞外结构域，所述胞外结构域含有与不同于第一嵌合抗原受体和第二嵌合抗原受体的抗原特异性结合的抗原结合位点；跨膜结构域；和胞内信号传导结构域。
14.根据权利要求11所述的免疫细胞，其中，所述第二嵌合抗原受体的抗原结合位点特异性结合选自由HER2、EphA2、ErbB3、IL-13Rα2、DLK1、B7H3、PD-L1、GPC3、CEACAM6和CD5组成的组中的任一个。
15.一种用于治疗癌症的药物组合物，包含根据权利要求11所述的免疫细胞。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中，所述癌症选自由肺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、直肠癌、食管癌、皮肤癌、甲状腺癌、肾癌、肝癌、头颈癌、膀胱癌、前列腺癌、血癌、多发性骨髓瘤、急性髓性白血病、恶性淋巴瘤、胸腺癌、骨肉瘤、纤维瘤和脑癌组成的组中的至少一种。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种嵌合抗原受体(car)，包括：
2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述含有死亡结构域的受体是选自由fas、tnfri、p75ntr、dr3、dr4、dr5、edar和dr6组成的组中的任一种。
3.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点与癌细胞和正常细胞两者中都表达的抗原特异性结合。
4.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点与egfr特异性结合。
5.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述抗原结合位点是抗体的单链可变片段(scfv)。
6.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述胞外结构域进一步包含选自由铰链结构域和间隔结构域组成的组中的至少一个。
7.根据权利要求5所述的嵌合抗原受体，其中，所述铰链结构域或间隔结构域选自由myc表位、cd8铰链结构域和fc组成的组中的至少一个。
8.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中，所述跨膜结构域是选自由t细胞受体(tcr)的α、β或ζ链，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137和cd154组成的组中的任一个。
9.一种多核苷酸，包含编码根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合抗原受体的碱基序列。
10.一种表达载体，包含根据权...
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