【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗细菌感染药物制备，涉及一种抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂及其制备方法和应用。
技术介绍
1、鲍曼不动杆菌为非发酵革兰阴性杆菌，广泛存在于自然界，是定植于人体呼吸道及皮肤表面等部位的条件致病菌，在宿主免疫力低下等情况下易引起多种感染性疾病，如呼吸道感染、泌尿生殖道感染、伤口感染和败血症等。近年来，广谱抗菌药物尤其碳青霉烯类药物广泛用于治疗细菌感染性疾病以及各种侵入性操作的不断开展，耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌感染率呈逐年上升，现如今已经涨至74％，从而给临床抗感染治疗带来巨大挑战。icu的免疫力低下老年患者并发耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的发生率逐年增高，其引发的相关感染致死率为40％～70％。世界卫生组织公布的新型抗菌药物研发重点病原体清单中，耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌居革兰阴性菌之首，其感染不仅可造成较高的病死率、提高医疗保健和治疗费用负担，还给遏制微生物耐药性和耐药菌传播、临床感染防控等方面带来了严峻挑战。目前临床尚无明确针对耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染的“标准抗菌药物方案”,美国传染病学会专家小组建议尽可能使用至少2种活性抗菌药物联合治疗中重度耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染，但抗生素使用的种类越多，出现耐药的可能性越大。同时，一种新型抗菌剂的研发速度远远慢于抗生素产生耐药性的速度，新型抗菌剂的研发是值得重点关注的临床卫生问题。
2、金属-β-内酰胺酶通过水解抗生素的β-内酰胺环导致抗生素失活进而诱导细菌对抗生素产生抗药性，其几乎可以水解所有β-内酰胺类抗生素，其不仅可以在细菌间横向传播，而且可以在质粒中进行纵向传
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的是提供一种新型抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂的制备方法，该制剂具有三重治疗功效，巧妙结合级联反应和靶向编辑耐药基因放大协同作用来发挥抗耐药菌活性。
2、本专利技术自主构建具有胞苷碱基编辑功能的crispr-cas9靶向blandm进行c和t碱基互换，终止密码子提早形成而终止生成金属-β-内酰胺酶，恢复耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌对耐药抗生素的敏感性；其次，基于zno-sio2与亚胺培南的高效协同抗菌活性以及crispr-cas9对亚胺培南敏感性的恢复，新型耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂放大了其协同抗菌作用；再次，该制剂触发细菌产生大量活性氧而诱导细菌死亡的同时，l-精氨酸利用高活性氧优势诱发级联反应生成一氧化氮，其不仅发挥抗菌作用而且促进感染组织的愈合修复；而且该抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂生物相容性好，无毒副作用，不会引起排异反应，其ph酸响应控释特性，进一步增强了抗耐药菌效果。该抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂为治疗耐药菌感染的公共卫生问题提供了一种新型策略。
3、一种抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
4、(1)合成cooh-peg@zno-sio2纳米材料；
5、(2)合成l-精氨酸@zno-sio2纳米材料；
6、(3)合成亚胺培南/l-精氨酸@zno-sio2纳米材料；
7、(4)靶向耐药基因的crispr/cas9/sgrna系统与亚胺培南/l-精氨酸@zno-sio2纳米材料复合成为sgrna-i/l@zs体系。
8、步骤(1)具体包括：将cooh-peg-nhs溶于dmso中，得到cooh-peg-nhs溶液；将zno-sio2溶液和cooh-peg-nhs溶液混合，zno-sio2和cooh-peg-nhs的质量比：50-100:1，冰浴下调节ph至7.4，反应过夜，离心洗涤(用去离子水)，4℃保存，所得到的材料即为cooh-peg@zno-sio2。
9、cooh-peg@zno-sio2纳米颗粒中zno-sio2的制备包括：介孔sio2的制备；aptes修饰介孔sio2，制备介孔sio2-nh2；氧化锌、aptes和介孔sio2-nh2三者混合制备zno-sio2。
10、进一步地，步骤(1)：将50mg cooh-peg-nhs溶于1ml dmso中(cooh-peg-nhs直接购买于上海源叶生物有限公司，浓度：50mg/ml)，得到cooh-peg-nhs溶液。将zno-sio2溶液和cooh-peg-nhs溶液(溶液中两者的质量比：50-100:1)混合后，冰浴下调节ph至7.4，反应过夜，离心洗涤，分散在水中，4℃保存，所得到的材料即为cooh-peg@zno-sio2，最后真空干燥得到cooh-peg@zno-sio2粉末，长期4℃干燥保存。
11、sio2的制备采用包括但不限于以下的常规方法，例如：
12、将5.23g ctatos(名称：十六烷基三甲基对甲基苯磺酸铵盐；一种阳离子表面活性剂)、0.76g teah3(中文：三乙醇胺)和272ml去离子水h2o三者依次混合(该混合物的摩尔组成可以为ctatos：teah3:去离子水＝0.2-0.6∶0.001-8.0∶20-1000)，然后加热至60-90℃，搅拌1-4h至完全溶解后，快速加入41.21g teos(中文全称：正硅酸乙酯；)，60-90℃反应2-6h，停止，继续降温，12000rpm离心10min后收集沉淀，用去离子h2o和乙醇交替洗2-3次，重分散于乙醇中备用；再加入到乙醇/盐酸(10:1)的混合溶液中，60-80℃过夜反应；反应完成后，12000rpm离心10min后收集沉淀，用去离子h2o和乙醇交替洗2-3次，最后用甲苯洗2-3次，重分散于甲苯中，得到介孔sio2；
13、介孔sio2修饰aptes，采用包括但不限于以下的常规方法，例如：
14、10-20mg合成的介孔sio2分散于甲苯中，在超声中滴加2-6mlaptes乙醇溶液(中文全称：3-氨丙基三乙氧基，该混合物的体积比为aptes:乙醇：去离子水＝2:95:3)；然后，在n2的保护下，升温至60-90℃，反应过夜；反应完成后，停止加热，降温至室温，12000rpm离心10min后收集沉淀，用乙醇洗数次，再用去离子h2o洗数次，重分散于h2o中，得到介孔sio2-nh2，介孔sio2-nh2的最终浓度为5mg/ml。
15、aptes作为硅源加入到体系中，是aptes中携带了可以质子化的氨基。aptes在提供硅源的同时，也因其有机链上含有-nh2基团，氮元素上面含有孤对电子，有利于发生亲核取代反应。同时，由于亲核的作用以及溶液成分中存在的水，可以得到催化硅源中水解本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，
9.权利要求1-8任一项所述的制备方法得到的抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂。
10.权利要求9所述的抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂在制备抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌感染药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种抗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂新民，李希盛，桂嵘，桂淑敏，李建，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：
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