一种用于早期肺癌诊断的血清miRNA标志物组合及试剂盒制造技术

技术编号：40596964 阅读：8 留言：0更新日期：2024-03-12 21:59

本发明专利技术提供了一种用于早期肺癌诊断的血清miRNA标志物组合及试剂盒，血清miRNA标志物组合包括：hsa‑miR‑20a‑5p、hsa‑miR‑145‑5p、hsa‑miR‑152‑3p、hsa‑miR‑25‑3p、hsa‑miR‑148a‑3p、hsa‑miR‑182‑5p、hsa‑miR‑22‑3p、hsa‑miR‑221‑3p、hsa‑miR‑1290、hsa‑miR‑141‑3p、hsa‑miR‑17‑5p等22个miRNA位点，将其应用于早期肺癌血清miRNA检测试剂盒，可以实现区分早期肺癌患者和健康对照人群，从而进行临床辅助诊断，具有较高的临床应用价值。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肺癌诊断，涉及一种用于早期肺癌诊断的血清mirna标志物组合及试剂盒。

技术介绍

1、肺癌是全世界范围内肿瘤死亡的首要原因，也是我国30年来发生率增长最快的恶性肿瘤。在我国21世纪开展的第三次死因回顾调查则显示肺癌已居癌症死亡原因首位。中国肿瘤登记中心数据显示，2015年我国新发肺癌病例78.7万例，预计至2025年，中国每年新发的肺癌患者将达100万。由于肺癌早期(ⅰ-ⅱ期)症状不明显75％的肺癌患者就诊时已是肺癌晚期(ⅲ-ⅳ期)，术后5年生存期约为5％。而低剂量螺旋ct(ldct)年度筛查能发现85％的ⅰ期肺癌，术后10年预期生存率可达92％。因此早发现、早诊断和早治疗是延长肺癌患者生存期的唯一有效方法。

2、对肺癌和肺结节的评估方法通常包括临床资料、影像学、肿瘤标志物、功能显像、非手术和手术活检。年龄、职业、吸烟史、慢性肺部疾病史、个人和家族肿瘤史、治疗经过及转归等临床信息，可为肺癌和肺结节良恶性鉴别提供重要参考意见。作为早期肺癌的发现，ldct是比较经典的筛查手段，可以大大提高早期肺癌的检出率，但假阳性率高达96.4％，导致患者的过度治疗。同时辐射是这项检查的另一个弊端，因此急需要一个灵敏度和特异性均高的检测方法。

3、微小核糖核酸(microrna，mirna)是一种小的非编码单链rna，通常长度为18-25个核苷酸，可与靶基因3’utr区域结合从而对其表达进行负调控。研究表明，mirna参与调控多种生命活动，同时参与许多疾病(如：肿瘤、自身免疫性疾病等)的发生、发展及转归，因此m

4、目前，尽管已经有许多研究报道了mirna在肺癌中的异常表达，并发现了许多非常有前景的肺癌早期诊断血清mirna，但这些结果并不一致，并且不能相互验证。原因在于，(1)样本类型(如：组织、血清、血浆等)、采集及保存的过程不同；(2)不同方法分离、储存及提取外周血中生物标志物的含量不同；(3)检测方法的不同，如测序法、扩增法、杂交法等；(4)个体之间的体液环境、遗传因素、生活环境等非癌因素都会影响mirna的表达，需要大量的人群样本及规范全面的入组标准来消除这种影响；(5)mirna序列较短导致引物探针设计较困难，且没有针对性的软件可以直接使用；(6)目前暂时没有标准化的内参作为参照，因此引物探针、反应体系、内参体系均需筛选及优化过程。

技术实现思路

1、基于以上，本专利技术的目的在于提供一种用于早期肺癌诊断的血清mirna标志物组合及试剂盒，能够将早期肺癌患者血清与健康人血清进行区分，从而快速、便捷、准确、无创地检测肺癌。

2、本专利技术为实现技术目的采用的技术方案为：

3、一种用于早期肺癌诊断的血清mirna标志物组合，包括：hsa-mir-20a-5p、hsa-mir-145-5p、hsa-mir-152-3p、hsa-mir-25-3p、hsa-mir-148a-3p、hsa-mir-182-5p、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-221-3p、hsa-mir-1290、hsa-mir-141-3p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-191-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-181a-5p、hsa-mir-340-3p、hsa-mir-424-3p、hsa-mir-210-3p、hsa-mir-486-5p、hsa-mir-320a-3p、hsa-mir-125b-5p、hsa-mir-9-3p、hsa-mir-381-3p。

4、一种用于早期肺癌诊断的试剂盒，包括上述血清mirna标志物组合。

5、优选地，所述试剂盒通过logit回归方程计算风险评估值，logit回归方程为：

6、logit＝-39.2077-3.9314*δcthsa-mir-20a-5p+6.9035*δcthsa-mir-145-5p+2.2237*δcthsa-mir-152-3p-2.6988*δcthsa-mir-25-3p+1.336*δcthsa-mir-148a-3p+0.8011*δcthsa-mir-182-5p+6.8527*δcthsa-mir-22-3p-1.2653*δcthsa-mir-221-3p-1.9309*δcthsa-mir-1290-0.4832*δcthsa-mir-141-3p+2.9818*δcthsa-mir-17-5p+5.548*δcthsa-mir-191-5p-3.7906*δcthsa-mir-30d-5p-0.923*δcthsa-mir-181a-5p+4.0693*δcthsa-mir-340-3p+0.5375*δcthsa-mir-424-3p-1.5022*δcthsa-mir-210-3p+1.4206*δcthsa-mir-486-5p-2.5031*δcthsa-mir-320a-3p-2.1942*δcthsa-mir-125b-5p-1.8443*δcthsa-mir-9-3p-1.6145*δcthsa-mir-381-3p

7、根据靶点和内参(u6)的ct值，将22个靶点的ct值分别减去内参(u6)的ct值，求得22个靶点相对内参的δct，然后代入以上公式，计算出logit值。

8、更优选地，22个靶点若noct，应将ct值赋值为40(最大循环数)后，再进行计算。

9、更优选地，当样本logit＜0.28时，则该样本为阴性，当样本logit≥0.28时，则该样本为阳性。

10、本专利技术的有益效果在于：

11、本专利技术选择hsa-mir-20a-5p、hsa-mir-145-5p、hsa-mir-152-3p、hsa-mir-25-3p、hsa-mir-148a-3p、hsa-mir-182-5p、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-221-3p、hsa-mir-1290、hsa-mir-141-3p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-191-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-181a-5p、hsa-mir-340-3p、hsa-mir-424-3p、hsa-mir-210-3p、hsa-mir-486-5p、hsa-mir-320a-3p、hsa-mir-125b-5p、hsa-mir-9-3p、hsa-mir-381-3p作为组合分子标记物，经过临床样本验证实验，在早期肺癌诊断具有优本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于早期肺癌诊断的血清miRNA标志物组合，包括：hsa-miR-20a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-152-3p、hsa-miR-25-3p、hsa-miR-148a-3p、hsa-miR-182-5p、hsa-miR-22-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-1290、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-17-5p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-181a-5p、hsa-miR-340-3p、hsa-miR-424-3p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-320a-3p、hsa-miR-125b-5p、hsa-miR-9-3p、hsa-miR-381-3p。

2.一种用于早期肺癌诊断的试剂盒，包括权利要求1所述的血清miRNA标志物组合。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒通过Logit回归方程计算风险评估值，Logit回归方程为：

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，2

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于，当样本Logit＜0.28时，则该样本为阴性，当样本Logit≥0.28时，则该样本为阳性。

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【技术特征摘要】

1.一种用于早期肺癌诊断的血清mirna标志物组合，包括：hsa-mir-20a-5p、hsa-mir-145-5p、hsa-mir-152-3p、hsa-mir-25-3p、hsa-mir-148a-3p、hsa-mir-182-5p、hsa-mir-22-3p、hsa-mir-221-3p、hsa-mir-1290、hsa-mir-141-3p、hsa-mir-17-5p、hsa-mir-191-5p、hsa-mir-30d-5p、hsa-mir-181a-5p、hsa-mir-340-3p、hsa-mir-424-3p、hsa-mir-210-3p、hsa-mir-486-5p、hsa-m...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹梦景，曹渊，苏畅，苏柏文，
申请(专利权)人：苏州麦锐克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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