【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种t细胞的活化方法及其应用。
技术介绍
1、近年来肿瘤的免疫治疗获得突破进展，而t细胞则是主要效应细胞。以pd 1抗体为代表的t细胞免疫调节抗体快速进入临床，广谱用于肿瘤治疗，但有效人群比例较低，在最大适应症肺癌有效率约为18％。联合免疫治疗是提高疗效的发展方向，包括pd-1抗体联合化疗、放疗、抗血管生成药物和联合治疗策略，此对于扩大收益人群，延长病人存活、甚至治愈肿瘤具有现实意义，也是国际公认的研究方向。
2、car-t和tcr-t疗法是目前过继性免疫细胞疗法的研究热点，无论是car-t还是tcr-t细胞的体外培养，t细胞都需要被激活后才能进行后续操作步骤，因此寻找一种t细胞高效的活化激活方法是十分重要的。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：
2、本专利技术第一方面提供了一种t细胞的活化方法，所述活化方法包括如下步骤：
3、1)样本添加淋巴分离液，离心，分离得到pbmc；
4、2)步骤1)中pbmc加生理盐水，离心，收集pbmc；取少量pbmc，测cd3+t细胞比例；
5、3)取磁珠，涡旋，加等体积dpbs混匀，磁力架上1min，弃上清；
6、4)根据步骤2)中测量结果，调节cd3+t细胞浓度，步骤3)磁珠加入细胞悬液，混匀，室温孵育，使用dpbs稀释，将稀释后磁珠和细胞混合物放置于磁力架2min，弃上清；
7、5)用t细胞
8、如本文所用，术语“t细胞”或“t淋巴细胞”是本领域公认的，并且旨在包括胸腺细胞、初始t淋巴细胞、未成熟t淋巴细胞、成熟t淋巴细胞、静息t淋巴细胞或激活的t淋巴细胞。t细胞可以是t辅助(th)细胞，例如t辅助1(th1)或t辅助2(th2)细胞。t细胞可以是辅助t细胞(htl；cd4+t细胞)、细胞毒性t细胞(ctl；cd8+t细胞)、肿瘤浸润性细胞毒性t细胞(til；cd8+t细胞)、cd4+cd8+t细胞、cd4-cd8-t细胞、表达t细胞受体(tcr)的α和β链的αβt细胞和表达tcrγ和δ链的γδt细胞，或t细胞的任何其他子集。适用于特定实施方案的其他说明性t细胞群包括记忆t细胞，合适地为早期记忆t细胞。术语“t细胞”在其范围内包括天然t细胞(例如，从生物体分离的，所述生物体例如为哺乳动物，例如，人，例如，受试者)、离体生长的t细胞和遗传工程化的t细胞。术语t细胞还包括包含t细胞受体(例如，天然tcr，或重组tcr)的t细胞和包含人工t细胞受体的t细胞(例如，car-t细胞)。
9、进一步，步骤1)中分离pbmc使用离心机升速9降速0分离得pbmc的方法。
10、进一步，所述步骤1)中样本来自哺乳动物。
11、进一步，所述步骤1)中样本来自人或其他非人哺乳动物。
12、进一步，所述样本包括血液样本。
13、术语“样本”来自于任何可携带t细胞的细胞悬液，包括但不限于血液、组织液、淋巴液等。在广义上认为，术语“样本”与“生物样本”同义，是指从如本文所述的感兴趣的生物来源(例如，组织或生物体或细胞培养物)获得或衍生的样本。在一些实施方案中，感兴趣的来源包括生物体，诸如动物或人。在一些实施方案中，生物样本为或包含生物组织或流体。在一些实施方案中，生物样本可为或包含骨髓；血液；血细胞；腹水；组织或细针活检样本；含细胞体液；自由浮动的核酸；痰液；唾液；尿；脑脊液、腹膜液；胸膜液；粪便；淋巴；妇科液体；皮肤拭子；阴道拭子；口腔拭子；鼻拭子；冲洗液或灌洗液，诸如导管灌洗液或支气管肺泡灌洗液；抽吸物；刮擦物；骨髓样本；组织活检样本；手术样本；粪便、其它体液、分泌物和/或排泄物；和/或来自它们的细胞等。在一些实施方案中，生物样本为或包含从个体获得的细胞。在一些实施方案中，获得的细胞为或包括来自获得样本的个体的细胞。在一些实施方案中，样本为通过任何适当的方式直接从感兴趣的来源获得的“初级样本”。例如，在一些实施方案中，初级生物样本通过选自由以下组成的组的方法获得：活检(例如，细针抽吸或组织活检)、手术、体液(例如，血液、淋巴、粪便等)收集等。在一些实施方案中，如从上下文将清楚，术语“样本”是指通过处理初级样本(例如，通过除去初级样本的一种或多种组分和/或通过向初级样本中添加一种或多种剂)获得的制剂。
14、进一步，所述步骤1)所述的离心力为2000rpm，离心时间为25min。
15、进一步，所述步骤2)中所述的离心力为1800rpm，离心时间为8min。
16、进一步，所述步骤3)中涡旋时间为30s。
17、进一步，所述步骤3)中磁珠为cd3分选磁珠。
18、进一步，所述步骤3)中磁珠为cd3/cd28分选磁珠。
19、进一步，所述步骤4)中调节cd3+t细胞浓度为1×107个/ml。
20、进一步，所述步骤4)中磁珠与细胞数量的比例包括1-2:1。
21、在一些实施方案中，所述步骤4)中磁珠与细胞数量的比例包括1:1、1.1:1、1.2:1、1.3:1、1.4:1、1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2.0：1。
22、进一步，所述步骤4)中室温孵育时间为30min。
23、进一步，所述步骤5)中t细胞扩增培养基为含有100-500iu/ml il-2的x-vivotm15培养基。
24、在一些实施方案中，所述步骤5)中t细胞扩增培养基为含有100iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、150iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、200iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、250iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、300iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、350iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、400iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、450iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基、500iu/ml il-2的x-vivotm 15培养基。
25、进一步，所述步骤5)中调整细胞密度为1×106个/ml-5×106个/ml。
26、在一些实施方案中，所述步骤5)中调整细胞密度为1×106个/ml、1.5×106个/ml、2×106个/ml、2.5×106个/ml、3×106个/ml、3.5×106个/ml、4×106个/ml、4.5×106个/ml、5×106个/ml。
27、进一步，所述步骤5)中去除磁珠的时间包括细胞培养第2-9天去除。
28、在一些实施方案中，所述步骤5)中去除磁珠的时间包括细胞培养的第2天去除，细胞培养的第3天去本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种T细胞的活化方法，其特征在于，所述活化方法包括如下步骤：
2.根据权利要求2所述的活化方法，其特征在于，所述步骤1)中样本来自哺乳动物；
3.一种权利要求1或2所述活化方法制备得到的活化的T细胞；
4.权利要求1或2所述的活化方法在制备高活化T细胞产品中的应用；
5.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1或2所述的活化方法中使用的试剂。
6.权利要求1或2所述的活化方法在提高T细胞激活效率、提高T细胞存活率、降低T细胞耗竭程度中的应用。
7.权利要求1或2所述的活化方法在计算机模型或装置中的应用。
8.一种装置，其特征在于，所述装置包括：单个或多个处理器，和存储器，所述存储器用于存储单个或多个计算机程序，当所述单个或多个计算机程序被所述单个或多个处理器执行时实施权利要求1或2所述的活化方法的步骤；
9.权利要求3所述的活化的T细胞在CAR-T细胞或TCR-T细胞制备中的应用。
10.权利要求1或2所述的活化方法、权利要求3所述的活化的T细胞、权利要求5所述
...【技术特征摘要】
1.一种t细胞的活化方法，其特征在于，所述活化方法包括如下步骤：
2.根据权利要求2所述的活化方法，其特征在于，所述步骤1)中样本来自哺乳动物；
3.一种权利要求1或2所述活化方法制备得到的活化的t细胞；
4.权利要求1或2所述的活化方法在制备高活化t细胞产品中的应用；
5.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求1或2所述的活化方法中使用的试剂。
6.权利要求1或2所述的活化方法在提高t细胞激活效率、提高t细胞存活率、降低t细胞耗竭程度中的应用。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：刘文斌，徐榕，王志荣，贾立昆，金威，
申请(专利权)人：北京同立海源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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