【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及液态细胞悬液制备，具体涉及一种高分散性液态细胞悬液的制备方法及应用。
技术介绍
1、免疫组化、原位杂交等原位切片染色技术应用十分广泛，但在实际工作中必须设置阴性对照片与阳性对照片，其中阳性对照片一般为人体病变组织所制成的切片，在实验过程中使用和待测切片完全一致的操作流程与试剂，用以监控实验本身的可靠性。
2、目前，使用人体病变组织制成的切片做为阳性对照有3大缺陷。第一：这种人体病变组织个体存在差异性，且来源不稳定。如在er项目检测中，从某一乳腺癌患者乳腺组织取材检测后为较为典型的er阳性，该组织可做为其他病理切片检测的阳性对照片，但是该阳性对照片是有限的，用尽后需要找其他患者er阳性的组织，但是由于肿瘤的异质性，从其他患者收集到的组织检测结果很难获得和之前阳性对照片完全一致的检测结果，组织癌变类型也不尽相同，很难保证对照切片的一致性。第二：由于组织蜡块是来源于患者人体组织，其归属权归于患者，严格来说病理科使用患者的蜡块用于制作阳性对照片存在伦理以及法律归属权上的风险，更不可能将患者的蜡块用于商业化开发。第三：由于每片待测切片都需要一张阳性对照进行监控，大大增加了病理科的实验工作量和阅片工作量。
3、为了解决上述问题，现有的做法是使用培养的野生或改造的肿瘤细胞系，进行固定、脱水后，对细胞进行透明后浸蜡进行细胞蜡块的包埋，制备成细胞蜡块。细胞蜡块进行切片后，将所有切片收集至离心管中，使用脱蜡液进行脱蜡，随后使用无水乙醇洗细胞2次，用相应浓度的乙醇溶液重悬至一定体积。
4、但是使用上述
5、因此，提高液态细胞的分散性以及在不同细胞间的分散稳定性是亟需解决的问题。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中液态细胞悬液存在的分散性差，易出现细胞堆叠、成团的问题中的至少一个，本专利技术提供了一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，改善了细胞分散性，解决细胞堆叠、成团问题，并将采用该方法制备得到的液体细胞悬液进行相应的应用，以提高液态细胞质控品的质量。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、本专利技术的第一方面提供了一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，液态细胞悬液由细胞样本经细胞固定、梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片、溶解、重悬而来，所述方法包括在细胞固定之前，向收集的细胞样本溶液中添加细胞介质溶液，轻轻吹打混合均匀，制备成细胞块/半固态细胞凝胶后再进行细胞固定；所述细胞介质溶液由对细胞有支持作用的物质配制而成。
4、在本专利技术的一些实施方案中，所述细胞介质溶液为琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液、聚乙烯亚胺溶液中的一种。优选地，细胞介质溶液为琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液中的一种。
5、琼脂糖、聚乙二醇(peg)、聚乙烯亚胺(pei)等物质对细胞有支持作用，添加这些物质之后，可将细胞分散填充在这些物质中间达到细胞间的间隙变大，从而使制作出来的细胞蜡块分散性改善，在制备细胞悬液后使细胞更加分散。
6、在本专利技术的一些实施方案中，所述琼脂糖溶液按照质量体积比，浓度为1％-2％。优选地，琼脂糖溶液的浓度为1％。
7、在本专利技术的一些实施方案中，所述聚乙二醇溶液按照质量体积比，浓度为2％-5％。优选地，聚乙二醇溶液为聚乙二醇20000溶液。
8、在本专利技术的一些实施方案中，所述聚乙烯亚胺溶液按照质量体积比，浓度为1％-3％。
9、在本专利技术的一些实施方案中，所述琼脂糖溶液的配制方法为：按照质量体积比终浓度为1％-2％称取琼脂糖，加入到pbs溶液中，加热使琼脂糖完全溶解，温度降至40-60℃备用。较佳地，琼脂糖溶液作为细胞介质溶液添加到细胞样本溶液中时为液态，温度控制在50℃左右。在一些实施方案中，琼脂糖溶液添加到装有活细胞的离心管中，轻轻吹打均匀后，转移至冰盒中，使琼脂糖凝固，形成细胞块。
10、在本专利技术的一些实施方案中，所述聚乙二醇溶液、聚乙烯亚胺溶液均采用双蒸水配制。使用时，对应的聚乙二醇溶液或聚乙烯亚胺溶液加入到装有活细胞的离心管中，并轻轻地吹打均匀，形成半固态细胞凝胶。
11、在本专利技术的一些实施方案中，所述细胞固定方法为：将细胞块/半固态细胞凝胶置于包埋盒中浸泡于固定液中固定，固定液体积为细胞块/半固态细胞凝胶体积的10-15倍，固定时间为15-20h，固定完毕后用流水冲洗。
12、本专利技术的第二方面提供了一种本专利技术第一方面所述的方法制备得到的液态细胞悬液。
13、本专利技术的第三方面提供了一种第二方面所述的液态细胞悬液在制备用于组织细胞原位检测或分析方法中对照品的应用。
14、在本专利技术的一些实施方案中，所述组织细胞原位检测或分析方法选自免疫组化、原位杂交中的一种。
15、本专利技术的有益效果
16、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果为：本专利技术采用在细胞制备蜡块过程中，在细胞固定之前添加细胞介质溶液：1％-2％的琼脂糖溶液、2％-5％的聚乙二醇溶液、1％-3％的聚乙烯亚胺溶液，制作细胞蜡块后得到的细胞悬液更加分散，解决了细胞堆叠、细胞成团的问题，更为分散的细胞悬液在免疫组化染色中，更容易对亚细胞进行精准定位和判断，同时，也能得到更为分散的视觉效果。
17、采用该细胞悬液进行染色后作为液态细胞质控品，其染色结果符合要求，可用于常规免疫组化染色实验对照，也可用于原位杂交染色对照。
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1.一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，液态细胞悬液由细胞样本经细胞固定、梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片、溶解、重悬而来，其特征在于，所述方法包括在细胞固定之前，向收集的细胞样本溶液中添加细胞介质溶液，轻轻吹打混合均匀，制备成细胞块/半固态细胞凝胶后再进行细胞固定；所述细胞介质溶液由对细胞有支持作用的物质配制而成。
2.根据权利要求1所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述细胞介质溶液包括琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液、聚乙烯亚胺溶液中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述细胞介质溶液为琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述琼脂糖溶液按照质量体积比，浓度为1％-2％。
5.根据权利要求2所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇溶液按照质量体积比，浓度为2％-5％。
6.根据权利要求2所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述聚乙烯亚胺溶液按照质
7.根据权利要求1所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述细胞固定方法为：将细胞块/半固态细胞凝胶置于包埋盒中浸泡于固定液中固定，固定液体积为细胞块/半固态细胞凝胶体积的10-15倍，固定时间为15-20h，固定完毕后用流水冲洗。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法制备得到的液态细胞悬液。
9.根据权利要求8所述的液态细胞悬液在制备用于组织细胞原位检测或分析方法中对照品的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述组织细胞原位检测或分析方法选自免疫组化、原位杂交中的一种。
...【技术特征摘要】
1.一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，液态细胞悬液由细胞样本经细胞固定、梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片、溶解、重悬而来，其特征在于，所述方法包括在细胞固定之前，向收集的细胞样本溶液中添加细胞介质溶液，轻轻吹打混合均匀，制备成细胞块/半固态细胞凝胶后再进行细胞固定；所述细胞介质溶液由对细胞有支持作用的物质配制而成。
2.根据权利要求1所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述细胞介质溶液包括琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液、聚乙烯亚胺溶液中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述细胞介质溶液为琼脂糖溶液、聚乙二醇溶液中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种高分散性液态细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述琼脂糖溶液按照质量体积比，浓度为1％-2％。
5.根据权利要求2所述的一种高...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘丽，李明振，李坤灿，方齐凤，蔡宁，
申请(专利权)人：杭州百凌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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