【技术实现步骤摘要】
本申请涉及分子生物学检测领域，特别是涉及一种brca1和2基因的拷贝数变异检测用的引物和探针。
技术介绍
1、brca1和brca2基因(brca1/2基因)是两种具有抑制恶性肿瘤发生的优良基因，在损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用。brca1/2基因是家族遗传性乳腺癌和卵巢癌最主要的易感基因；有brca1基因突变者，患乳腺癌和卵巢癌的风险分别是50％-85％和15％-45％，有brca2基因突变者，患乳腺癌和卵巢癌的风险分别是50％-85％和10％-20％。
2、brca1/2基因的致病性突变形式有两种，一种表现为单个或数个碱基改变引起的移码突变、无义突变和错义突变。另一种致病性突变形式涉及数百个至数百万个碱基对的改变，往往是一个或以上的外显子的改变，包括碱基缺失、重复、插入、倒位、异位等，称为大片段重排(large genomic rearrangements，lgrs)。乳腺癌患者brca1/2基因lgrs发生频率为2.2％，占brca1/2全部致病性基因突变的10.8％。尽管发生频率相对较低，但是lgrs可导致突变的肽链结构及蛋白功能异常，一旦发生lgrs通常都是致病性的，并且brca1/2胚系lgrs会在家系中代代相传，导致家系中不断出现乳腺癌卵巢癌患者，危害极大。因此对于有乳腺癌卵巢癌家族史的家系来说，通过基因检测明确家系中brca1/2的突变状态，对于家系中肿瘤患者的治疗及健康携带者的肿瘤预防和筛查至关重要。
3、基因大片段缺失和重复又称为基因拷贝数变异(cnvs)，目前针对brca1/
4、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本申请的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种brca1和2基因的拷贝数变异检测用的引物和探针，以解决现有技术中针对brca1和brca2基因的cnvs检测存在的各种问题，并提供一种快速、全面、准确且低成本的brca1和2基因拷贝数变异检测技术。
2、为实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
3、一种brca1和2基因的拷贝数变异检测用的引物和探针，所述探针包括：
4、覆盖位于brca1基因的23个外显子上共43个目标位点的43个探针组，其中，所述brca1基因的1号、2号、11号、17号、23号外显子上各有1个目标位点，brca1基因的10号外显子上有4个目标位点，其余每个外显子上有2个目标位点；
5、覆盖位于brca2基因的27个外显子上共55个目标位点的55个探针组，其中，所述brca2基因的6号、18号外显子上各有1个目标位点，brca2基因的11号外显子上有5个目标位点，其余每个外显子上有2个目标位点；
6、其中，每一所述探针组包括分别与目标位点的5’端和3’端至少部分互补的5’端探针和3’端探针，每一所述5’端探针包括依次排列的第一通用引物结合位点和第一连接序列，每一所述3’端探针包括依次排列的第二连接序列和第二通用引物结合位点，所述第一连接序列和所述第二连接序列分别与目标位点的5’端和3’端至少部分互补，针对brca1基因外显子的43个探针组的第一连接序列如seq id no.1～43所示，第二连接序列如seq idno.44～86所示；针对brca2基因外显子的55个探针组的第一连接序列如seq id no.87～141所示，第二连接序列如seq id no.142～196所示；
7、所述引物包括：
8、针对所述第一通用引物结合位点的第一通用引物组，包括至少一个第一通用引物，每一所述第一通用引物至少与一个所述5’端探针的所述第一通用引物结合位点至少部分互补；
9、针对所述第二通用引物结合位点的第二通用引物组，包括至少一个第二通用引物，每一所述第二通用引物至少与一个所述3’端探针的所述第二通用引物结合位点至少部分互补。
10、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
11、覆盖位于brca1基因上游8kp处的2个目标位点以及位于brca1基因上游200bp处的1个目标位点的3个探针组，针对brca1基因上游的3个探针组的第一连接序列如seq idno.197～199所示，第二连接序列如seq id no.200～202所示；
12、覆盖分别位于brca2基因上游10kb、8kb、5kb、3kb、500bp处的5个目标位点的5个探针组，针对brca2基因上游的5个探针组的第一连接序列如seq id no.203～207所示，第二连接序列如seq id no.208～212所示。
13、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
14、覆盖位于brca1基因5’端非翻译区的1个目标位点的1个探针组，针对brca1基因5’端非翻译区的1个探针组的第一连接序列如seq id no.213所示，第二连接序列如seq idno.214所示；
15、覆盖位于brca1基因3’端非翻译区的4个目标位点的4个探针组，针对brca1基因3’端非翻译区的4个探针组的第一连接序列如seq id no.215～218所示，第二连接序列如seqid no.219～222所示；
16、覆盖位于brca2基因3’端非翻译区的3个目标位点的3个探针组，针对brca2基因3’端非翻译区的3个探针组的第一连接序列如seq id no.223～225所示，第二连接序列如seqid no.226～228所示。
17、在一个或多个实施方式中，所述探针还包括：
18、覆盖位于brca1基因2号、10号、12号、16号和22号内含子上共6个目标位点的6个探针组，其中，brca1基因的12号内含子上有2个目标位点，2号、10号、16号和22号内含子上有1个目标位点，针对brca1基因内含子的6个探针组的第一连接序列如seq id no.229～234所示，第二连接序列如seq id no.235～240所示；
19、覆盖位于x染色体的1个目标位点的1个探针组，针对x染色本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种BRCA1和2基因的拷贝数变异检测用的引物和探针，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
4.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
5.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
6.根据权利要求1至5任一所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括用不同荧光基团标记的多个第一通用引物，所述第二通用引物组包括连接有不同长度的填充序列的多个第二通用引物。
7.根据权利要求6所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括四个第一通用引物，序列如SEQ ID NO.303～306所示，所述四个第一通用引物的5’端分别被不同荧光基团标记；所述第二通用引物组包括两个第二通用引物，序列如SEQ ID NO.307～308所示；
8.一种BRCA1和2基因的拷贝数变异检测用的试剂盒，其特征在于，包括：
9.一种如权利要求8所述的试剂
10.根据权利要求9所述的使用方法，其特征在于，所述探针包括若干探针group，每一所述探针group包括多个探针组，所述多个探针组包括至少一个针对BRCA1或BRCA2基因的检测探针组以及至少一个针对参照基因的参照探针组，且每一所述探针group的所述多个探针组对应于相同的正向引物和反向引物；
...【技术特征摘要】
1.一种brca1和2基因的拷贝数变异检测用的引物和探针，其特征在于，
2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
3.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
4.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
5.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述探针还包括：
6.根据权利要求1至5任一所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括用不同荧光基团标记的多个第一通用引物，所述第二通用引物组包括连接有不同长度的填充序列的多个第二通用引物。
7.根据权利要求6所述的引物和探针，其特征在于，所述第一通用引物组包括四个第...
【专利技术属性】
技术研发人员：李文明，余锋，姜正文，
申请(专利权)人：苏州天昊医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：
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