【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及用于双链互补dna(ds-cdna)制备的改进的组合物和方法。这些组合物可以允许用等温方法从rna制备cdna。本公开还涉及用于制备ds-cdna和ds-cdna片段的文库的组合物和方法。
技术介绍
1、rna是一种重要的生物分子，因为它的研究有助于细胞内的功能生物过程的理解(即，转录物组或转录物组学的研究)以及调控元件(诸如长非编码rna(lncrna)或微rna(mirna))的理解。rna的分析还可以用于检测传染原(诸如rna病毒)。rna研究的先决条件通常是将rna转化为dna拷贝，因为dna具有增强其化学稳定性并使其适合于使用常见分子生物学工具和试剂进行操纵的性质。此外，对于很多类型的测序文库制备，双链dna是连接酶(用于衔接子连接)或转座体(用于通过标签化进行的衔接子添加)必须的。因此，在文库制备之前，单链rna通常必须转化为双链互补dna(ds-cdna)，这会显著增加rna工作流程中的周转时间和操作时间。
2、此外，将rna转化为ds-cdna需要在可编程热循环仪上进行协调温度调节，如图1所示。在常规方法中，将rna转化为dna通过逆转录合成第一链cdna的过程来完成，其中rna分子被逆转录酶直接复制。第二链cdna通过直接替换原始rna分子来形成。在大多数实施方案中，这通过类似于gubler和hoffman gene 25:263-269(1983)开发的程序来完成。很多文库制备方案(诸如illumina rna-seq文库制备)已经使用与gubler和hoffman类似的方法来产生适合于
3、gubler和hoffman程序专为高效全转录长度双链cdna而设计，该cdna具有钝端，易于连接至克隆载体中，以便能够使用20世纪80年代可用的方法进行进一步研究。然而，很多下一代测序(ngs)文库制备(诸如illumina rna-seq文库制备)的目标是不同的，并且需要rna分子的片段呈现(而不是单个长cdna)才能实现高效测序。此外，较新的文库构建方法诸如标签化(诸如illumina dna flex pcr-free(仅供研究使用，ruo)(illumina)技术，此前称为illumina的nextera技术，以及使用tn5转座体的相关产品)不需要末端修复分子来进行衔接子添加。因此，节省时间和简化工作流程的新ds-cdna合成程序对于rna文库制备方案非常有价值。
4、因此，将rna更快地转化为与文库制备相容的形式受到高度关注。最近发表的文章di等人,proc.natl.acad.sci.u.s.a.117:2886-2893(2020)表明，rna:dna杂交体(约40分钟第一链cdna合成的产物)可以通过tn5转座体来标签化并快速转化为rna测序文库，但是使用rna:dna杂交体可能导致文库产率较低。
5、本文所述的方法加速了单链rna样品至双链cdna的转化。该方法可以用包含酶的混合物的组合物来进行，所述酶的混合物包括(1)逆转录酶，它制备cdna的第一链和产生dna:rna双链体，以及(2)rna切口酶(诸如rna酶h)，它可以使dna:rna双链体的rna链形成“切口”，以允许rna片段作为启动cdna的第二链的合成的引物。
6、这些本专利技术的方法可以消除对计算机控制的可编程热循环仪的需要，以减少操作步骤、改善总周转时间并简化从rna样品进行的文库制备的自动化。此外，这些简化的方法可以允许等温cdna制备，并且包含酶的嗜常温和热稳定组合物已有所描述。本文所述的一些方法允许在单一温度处进行的单个10分钟反应中进行cdna制备(即，通过等温反应)。此外，本文所述的方法允许以更短的温育时间和更简单的工作流程从rna样品进行文库制备。
7、在一些情况下，本专利技术的cdna制备方法使用随机引物(即，随机寡核苷酸)并且省略类似pcr的扩增步骤，以避免引入其他方法(诸如ep1929045)中可能出现的序列特异性偏差。此外，已知某些rna切口酶(诸如rna酶h)会使dna:rna双链体中的rna链随机形成切口，因此使rna形成切口的步骤也不会引入序列特异性偏差。
8、本专利技术的ds-cdna和文库制备方法的应用包括疾病监测和用于rna分子的快速定量鉴定的其他测定法，其中简化的工作流程和易于自动化的程序是非常期望的。例如，通过此程序可以简化应用的工作流程(诸如富集所关注的病毒或病原体的宏基因组rna)，使病原体监测更容易进行。
技术实现思路
1、根据说明书，本文描述了用于制备双链互补dna(cdna)的组合物和方法。在一些实施方案中，这些组合物和方法可以允许从样品中包含的rna进行cdna的等温制备。在一些实施方案中，组合物和方法允许从样品中包含的rna制备双链dna片段的文库。
2、实施方案1.一种用于通过等温反应从rna制备双链cdna的组合物，所述组合物包含：
3、a.逆转录酶；
4、b.rna切口酶；
5、c.具有链置换活性或5'-3'核酸外切酶活性的dna聚合酶；和
6、d.dntp。
7、实施方案2.根据实施方案1所述的组合物，其中所述逆转录酶的活性大于所述rna切口酶的活性。
8、实施方案3.根据实施方案1或2所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述rna切口酶被包含在单一酶中。
9、实施方案4.根据实施方案1至3中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述dna聚合酶被包含在具有rna依赖性和dna依赖性聚合酶活性二者的单一酶中。
10、实施方案5.根据实施方案4所述的组合物，其中所述单一酶减少所述逆转录酶和所述dna聚合酶之间的竞争。
11、实施方案6.根据实施方案1至5中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有链置换活性。
12、实施方案7.根据实施方案1至6中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有5'-3'核酸外切酶活性。
13、实施方案8.根据实施方案1至7中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶是具有rna依赖性dna聚合酶活性的聚合酶，任选地其中所述逆转录酶是莫洛尼(moloney)鼠白血病病毒(mmlv)逆转录酶、来源于逆转录转座子的逆转录酶或ii组内含子逆转录酶。
14、实施方案9.根据实施方案1至8中任一项所述的组合物，其中所述rna切口酶是rna酶h。
15、实施方案10.根据实施方案1至9中任一项所述的组合物，其中所述rna酶来自嗜热栖热菌(thermus thermophilus)。
16、实施方案11.根据实施方案1至10中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶是大肠杆菌(e.coli)dna聚合酶i或bst dna聚合酶。
17、实施方案12.根据实施方案1至11中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶是嗜常本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于通过等温反应从RNA制备双链cDNA的组合物，所述组合物包含：
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述逆转录酶的活性大于所述RNA切口酶的活性。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述RNA切口酶被包含在单一酶中。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述DNA聚合酶被包含在具有RNA依赖性和DNA依赖性聚合酶活性二者的单一酶中。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述单一酶减少所述逆转录酶和所述DNA聚合酶之间的竞争。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述DNA聚合酶具有链置换活性。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述DNA聚合酶具有5'-3'核酸外切酶活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶是具有RNA依赖性DNA聚合酶活性的聚合酶，任选地其中所述逆转录酶是莫洛尼鼠白血病病毒(MMLV)逆转录酶、来源于逆转录转座子的逆转录酶或II组内含子逆转录酶。
9
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述RNA酶来自嗜热栖热菌。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述DNA聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I或Bst DNA聚合酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述RNA切口酶和/或所述DNA聚合酶是嗜常温酶。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃至49℃处具有活性。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃处具有活性。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温逆转录酶是MMLV逆转录酶。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温RNA切口酶是大肠杆菌RNA酶H。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温聚合酶是大肠杆菌DNA聚合酶I。
18.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述RNA切口酶和/或所述DNA聚合酶是热稳定酶。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃至72℃处具有活性。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃处具有活性。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的组合物，其中所述热稳定逆转录酶是MMLV逆转录酶的热稳定变体或者来源于逆转录转座子或II组内含子逆转录酶的热稳定逆转录酶。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的组合物，其中所述热稳定RNA切口酶是来自嗜热栖热菌的RNA酶H。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的组合物，其中所述热稳定DNA聚合酶是BstDNA聚合酶。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，其中所述RNA在制备所述双链cDNA之前结合至引物。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种添加剂，所述一种或多种添加剂选自DTT、BSA、TrispH 7.5、KCl和/或MgCl2。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的组合物，其中与所述逆转录酶和/或所述DNA聚合酶的单位/微升相比，所述组合物具有较低的单位/微升的所述RNA切口酶。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含RNA切口酶抑制剂。
28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述RNA切口酶抑制剂使所述RNA切口酶的活性降低。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述RNA切口酶和所述DNA聚合酶的单位/微升重叠。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述DNA聚合酶的活性是所述组合物中的所述RNA切口酶的活性的2倍至100倍。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述逆转录酶的活性是所述组合物中的所述RNA切口酶的活性的10倍至1,000倍。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述逆转录酶活性为0.32U/μl至4.8U/μl。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于通过等温反应从rna制备双链cdna的组合物，所述组合物包含：
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述逆转录酶的活性大于所述rna切口酶的活性。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述rna切口酶被包含在单一酶中。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述dna聚合酶被包含在具有rna依赖性和dna依赖性聚合酶活性二者的单一酶中。
5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述单一酶减少所述逆转录酶和所述dna聚合酶之间的竞争。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有链置换活性。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有5'-3'核酸外切酶活性。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶是具有rna依赖性dna聚合酶活性的聚合酶，任选地其中所述逆转录酶是莫洛尼鼠白血病病毒(mmlv)逆转录酶、来源于逆转录转座子的逆转录酶或ii组内含子逆转录酶。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的组合物，其中所述rna切口酶是rna酶h。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的组合物，其中所述rna酶来自嗜热栖热菌。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶是大肠杆菌dna聚合酶i或bst dna聚合酶。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶是嗜常温酶。
13.根据权利要求12所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃至49℃处具有活性。
14.根据权利要求13所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃处具有活性。
15.根据权利要求12至14中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温逆转录酶是mmlv逆转录酶。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温rna切口酶是大肠杆菌rna酶h。
17.根据权利要求12至16中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温聚合酶是大肠杆菌dna聚合酶i。
18.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶是热稳定酶。
19.根据权利要求18所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃至72℃处具有活性。
20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃处具有活性。
21.根据权利要求18至20中任一项所述的组合物，其中所述热稳定逆转录酶是mmlv逆转录酶的热稳定变体或者来源于逆转录转座子或ii组内含子逆转录酶的热稳定逆转录酶。
22.根据权利要求18至21中任一项所述的组合物，其中所述热稳定rna切口酶是来自嗜热栖热菌的rna酶h。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的组合物，其中所述热稳定dna聚合酶是bstdna聚合酶。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的组合物，其中所述rna在制备所述双链cdna之前结合至引物。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种添加剂，所述一种或多种添加剂选自dtt、bsa、trisph 7.5、kcl和/或mgcl2。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的组合物，其中与所述逆转录酶和/或所述dna聚合酶的单位/微升相比，所述组合物具有较低的单位/微升的所述rna切口酶。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含rna切口酶抑制剂。
28.根据权利要求27所述的组合物，其中所述rna切口酶抑制剂使所述rna切口酶的活性降低。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述rna切口酶和所述dna聚合酶的单位/微升重叠。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述dna聚合酶的活性是所述组合物中的所述rna切口酶的活性的2倍至100倍。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述逆转录酶的活性是所述组合物中的所述rna切口酶的活性的10倍至1,000倍。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述逆转录酶活性为0.32u/μl至4.8u/μl。
33.根据权利要求1至32中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述dna聚合酶活性为0.04u/μl至0.37u/μl。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述rna切口酶活性为0.004u/μl至0.04u/μl。
35.根据权利要求1至33中任一项所述的组合物，其中所述组合物中的所述rna切口酶活性大于0.04u/μl。
36.根据权利要求35所述的组合物，其中所述组合物中的所述rna切口酶活性为0.05u/μl至0.3u/μl。
37.一种制备双链cdna的方法，所述方法包括：
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述引物包括随机寡核苷酸引物。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述引物包括特异性结合至所述rna中包含的序列的引物。
40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，其中所述引物包括六聚体引物。
41.根据权利要求37至40中任一项所述的方法，其中所述引物包括包含经化学修饰的核苷酸的引物。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述包含经化学修饰的核苷酸的引物使所述引物结合的所述rna耐受所述rna切口酶的切割。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述rna切口酶是rna酶h，并且所述引物结合的所述rna对rna酶h的切割具有耐受性。
44.根据权利要求41至43中任一项所述的方法，其中所述经化学修饰的核苷酸包含甲基膦酸酯残基。
45.根据权利要求37至44所述的方法，其中所述逆转录酶产生cdna的第一链。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述逆转录酶产生包含cdna的第一链和rna链的dna:rna双链体。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述rna酶h使所述dna:rna双链体中的所述rna链形成切口以产生rna片段。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述dna聚合酶通过从所述rna片段引发来使dna的第二链延伸。
49.根据权利要求47或权利要求48所述的方法，其中所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶的5'-3'活性去除所述rna片段和3'rna突出端。
50.根据权利要求37至49中任一项所述的方法，其中所述dna聚合酶具有5'-3'核酸外切酶活性和/或3'-5'核酸外切酶活性，其中这种活性产生钝端双链cdna。
51.根据权利要求37至50中任一项所述的方法，其中所述dntp由所述逆转录酶和所述dna聚合酶二者使用。
52.根据权利要求37至51中任一项所述的方法，其中所述等温反应是在从30℃至49℃的温度处。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述等温反应是在37℃的温度处。
54.根据权利要求37至51中任一项所述的方法，其中所述等温反应是在从50℃至72℃的温度处。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述等温反应是在50℃的温度处。
56.根据权利要求54或权利要求55所述的方法，其中所述rna表现出通常在低于50℃的温度处抑制第一链合成的二级结构。
57.根据权利要求37至56中任一项所述的方法，其中通过所述逆转录酶产生所述cdna的第一链的速率大于通过所述rna切口酶使所述rna形成切口的速率。
58.根据权利要求57所述的方法，其中所述逆转录酶的活性超过所述rna切口酶的活性。
59.根据权利要求37至58中任一项所述的方法，其中所述等温反应温育60分钟或更短、45分钟或更短、30分钟或更短、20分钟或更短、15分钟或更短或者10分钟或更短。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述等温反应温育15分钟或更短。
61.根据权利要求37至60中任一项所述的方法，其中至少10分钟、至少20分钟、至少30分钟、至少45分钟或至少60分钟的温育产生用于文库制备的双链cdna。
62.根据权利要求37至61中任一项所述的方法，所述方法还包括在使引物与包含rna的样品组合之前对所述包含rna的样品进行脱靶rna剔除或mrna富集。
63.根据权利要求62所述的方法，其中所述脱靶rna是核糖体rna。
64.根据权利要求62或权利要求63所述的方法，其中所述mrna富集包括使用多聚-t引物进行扩增或使mrna与捕获小珠结合。
65.根据权利要求64所述的方法，其中所述捕获小珠包括具有捕获寡核苷酸的表面，所述捕获寡核苷酸包含多聚-t序列。
66.一种用于从rna制备双链dna片段的文库的组合物，所述组合物包含：
67.根据权利要求66所述的组合物，其中所述组合物还包含mg2+。
68.根据权利要求67所述的组合物，其中所述mg2+浓度为1mm至50mm，任选地其中所述mg2+浓度为5mm至20mm，另外任选地其中所述mg2+浓度为8mm。
69.根据权利要求66至68中任一项所述的组合物，其中所述文库通过等温反应来制备。
70.根据权利要求66至69中任一项所述的组合物，其中所述rna在制备所述文库之前结合至引物。
71.根据权利要求66至70中任一项所述的组合物，其中所述转座体复合物固定到固体载体。
72.根据权利要求71所述的组合物，其中所述固体载体是小珠。
73.根据权利要求71或权利要求72所述的组合物，其中所述第一转座子包含亲和力元件。
74.根据权利要求73所述的组合物，其中所述亲和力元件附接到所述第一转座子的5'端。
75.根据权利要求71或72所述的组合物，其中所述第一转座子包含接头。
76.根据权利要求75所述的组合物，其中所述接头具有附接到所述第一转座子的5'端的第一端和附接到亲和力元件的第二端。
77.根据权利要求71或72所述的组合物，其中所述第二转座子包含亲和力元件。
78.根据权利要求77所述的组合物，其中所述亲和力元件附接到所述第二转座子的3'端。
79.根据权利要求71或72所述的组合物，其中所述第二转座子包含接头。
80.根据权利要求79所述的组合物，其中所述接头具有附接到所述第二转座子的3'端的第一端和附接到亲和力元件的第二端。
81.根据权利要求73至74、76至78或80中任一项所述的组合物，其中所述亲和力元件是生物素或双重生物素。
82.根据权利要求66至81中任一项所述的组合物，其中所述转座体复合物以至少103、104、105或106个复合物/mm2的密度存在于固体载体上。
83.根据权利要求66至82所述的组合物，其中所述第一转座子还包含一个或多个衔接子序列。
84.根据权利要求83所述的组合物，其中所述第一转座子包含3’转座子末端序列和5’衔接子序列。
85.根据权利要求66至84中任一项所述的组合物，其中所述转座酶是tn5转座酶。
86.根据权利要求85所述的组合物，其中所述tn5转座酶是超高活性tn5转座酶。
87.根据权利要求66至86中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶的活性大于所述rna切口酶的活性。
88.根据权利要求66至87中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述rna切口酶被包含在单一酶中。
89.根据权利要求66至88中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶和所述dna聚合酶被包含在具有rna依赖性和dna依赖性聚合酶活性二者的单一酶中。
90.根据权利要求89所述的组合物，其中所述单一酶减少所述逆转录酶和所述dna聚合酶之间的竞争。
91.根据权利要求66至90中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有链置换活性。
92.根据权利要求66至91中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶具有5'-3'核酸外切酶活性。
93.根据权利要求66至92中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶是具有rna依赖性dna聚合酶活性的聚合酶，任选地其中所述逆转录酶是mmlv逆转录酶、来源于逆转录转座子的逆转录酶或ii组内含子逆转录酶。
94.根据权利要求66至93中任一项所述的组合物，其中所述rna切口酶是rna酶h。
95.根据权利要求66至94中任一项所述的组合物，其中所述dna聚合酶是大肠杆菌dna聚合酶i。
96.根据权利要求66至95中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶是嗜常温酶。
97.根据权利要求96所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃至49℃处具有活性。
98.根据权利要求97所述的组合物，其中所述嗜常温酶在37℃处具有活性。
99.根据权利要求96至98中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温逆转录酶是mmlv逆转录酶。
100.根据权利要求96至99中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温rna切口酶是大肠杆菌rna酶h。
101.根据权利要求96至100中任一项所述的组合物，其中所述嗜常温聚合酶是大肠杆菌dna聚合酶i。
102.根据权利要求66至95中任一项所述的组合物，其中所述逆转录酶、所述rna切口酶和/或所述dna聚合酶是热稳定酶。
103.根据权利要求102所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃至72℃处具有活性。
104.根据权利要求103所述的组合物，其中所述热稳定酶在50℃处具有活性。
105.根据权利要求102至104中任一项所述的组合物，其中所述热稳定逆转录酶是mmlv逆转录酶的热稳定变体或者来源于逆转录转座子或ii组内含子逆转录酶的热稳定逆转录酶。
106.根据权利要求102...
【专利技术属性】
技术研发人员：艾莉森·容汉斯，安吉丽卡·玛丽·巴尔·沙勒梅比尔，凯拉·布斯比，史蒂芬·M·格罗斯，罗伯特·斯科特·库尔斯滕，弗雷德里克·W·海德，
申请(专利权)人：ILLUMINA公司，
类型：发明
国别省市：
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