【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术的方面通常涉及毛细管电泳领域，具体涉及微芯片毛细管电泳。
技术介绍
1、稳健、可再现、使用者友好技术的具体实施对于满足如今质量控制(qc)实验室中生物产品的测试需求而言是至关重要的。技术升级是促进产量增加所必需的，同时继续生成质量分析数据且试图使无效测试结果和仪器相关调查的数量最小化。虽然电泳历史上已用于qc中以进行产品纯度和碎片分析，但该方法已从基于凝胶转变为基于毛细管，且最近转变为微芯片。微芯片毛细管电泳(mce)允许显著减少样品分析时间，同时维持qc分析所需的性能和可再现标准(ouimet,c.等人,expert opin drug discov.,12(2):213-224(2017))。
2、尽管mce已成为逐渐用于表征生物医药、质量控制以及用于药物发现的医药行业的有前景的技术，其易于测定干扰。
3、因此，本专利技术的一个目的为提供减少测定干扰的改善的mce测定和组合物。
4、本专利技术的另一个目的为提供用于改善蛋白质药物产品中的杂质的检测的mce测定和组合物。
技术实现思路
1、提供了用以评定蛋白质药物产品样品中的纯度并且识别蛋白质药物产品样品中的杂质的mce测定和试剂。提供了用于分析蛋白质药物样品中的分析物的方法。优选的蛋白质药物包括但不限于重组蛋白，诸如抗体及其抗原结合片段，以及融合蛋白。该测定采用mce技术来分离、识别并且量化蛋白质产品以及蛋白质产品中的杂质。杂质包括但不限于蛋白质聚集体、蛋白质片段、蛋白质多聚体以及测
2、一个实施例提供一种非还原水性电泳样品缓冲液，其含有烷化剂，诸如2-碘乙酰胺(iam)、碘乙酸(iaa)或n-乙基顺丁烯二酰亚胺(nem)。在一个实施例中，非还原水性电泳样品缓冲液含有烷化剂，155mm至175mm 2-碘乙酰胺；0.50％至1.5％十二烷基硫酸锂；以及65mm至95mm磷酸钠，其中该水性电泳样品缓冲液具有小于7的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为6。在另一个实施例中，水性缓冲液含有166mm 2-碘乙酰胺、0.81％十二烷基硫酸锂以及81mm磷酸钠。
3、在另一个实施例中，非还原水性电泳样品缓冲液含有烷化剂，例如50mm至250mm或155mm至200mm或155mm至250mm 2-碘乙酰胺；0.50％至1.5％十二烷基硫酸锂；以及40mm至80mm或50mm至70mm磷酸钠，其中该水性电泳样品缓冲液具有小于或等于8的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为8。在又一个实施例中，水性缓冲液含有200mm 2-碘乙酰胺、1.2％十二烷基硫酸锂以及60mm磷酸钠。
4、在另一个实施例中，非还原水性电泳样品缓冲液含有烷化剂，例如155mm至200mm2-碘乙酰胺；0.50％至1.5％十二烷基硫酸锂；以及50mm至70mm磷酸钠，其中该水性电泳样品缓冲液具有8或更小的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为6。在又一个实施例中，水性缓冲液含有200mm 2-碘乙酰胺、1.2％十二烷基硫酸锂以及60mm磷酸钠。
5、还提供了一种还原缓冲液。在一个实施例中，还原缓冲液为水性电泳样品缓冲液，其含有0.5％至1.5％十二烷基硫酸锂、55mm至85mm磷酸钠以及还原剂，其中该水性电泳样品缓冲液具有大于8的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为9。在一个实施例中，还原缓冲液含有135mm至155mm二硫苏糖醇。再一个实施例提供一种还原缓冲液，其含有0.69％十二烷基硫酸锂、69mm磷酸钠以及142mm二硫苏糖醇。
6、在另一个实施例中，还原缓冲液为水性电泳样品缓冲液，其含有0.5％至1.5％十二烷基硫酸锂、45mm至85mm磷酸钠以及还原剂，其中该水性电泳样品缓冲液具有8或更大的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为8。在一个实施例中，还原缓冲液含有80mm至155mm二硫苏糖醇。再一个实施例提供一种还原缓冲液，其含有1.2％十二烷基硫酸锂、60mm磷酸钠以及80mm二硫苏糖醇。
7、基于hepes的缓冲液还可与所公开的方法一起使用。一个实施例提供一种基于hepes的非还原水性电泳样品缓冲液，其含有烷化剂，例如55mm至75mm 2-碘乙酰胺；0.1％至1.0％十二烷基硫酸锂；5mm至85mm hepes以及5mm至115mm氯化钠，其中该水性电泳样品缓冲液具有小于9的ph。在另一个实施例中，缓冲液的ph为8。在再一个实施例中，水性缓冲液含有66.4mm 2-碘乙酰胺、0.32％十二烷基硫酸锂、16.2mm hepes及48.6mm氯化钠。
8、另一个实施例提供一种基于hepes的还原水性电泳样品缓冲液，其含有0.05％至0.75％十二烷基硫酸锂、5mm至115mm氯化钠、5mm至115mm hepes以及还原剂，其中该水性电泳样品缓冲液具有大于7的ph。在一个实施例中，缓冲液的ph为8。在一个实施例中，还原缓冲液含有35mm至50mm二硫苏糖醇。再一个实施例提供一种还原缓冲液，其含有0.28％十二烷基硫酸锂、41.5mm氯化钠、13.8mm hepes以及42.5mm二硫苏糖醇。
9、一个实施例提供一种用于识别蛋白质药物样品中的污染物或杂质的非还原mce方法，其包括以下步骤：将蛋白质样品添加至上文所讨论的非还原缓冲液中以形成经缓冲蛋白质药物样品。将经缓冲蛋白质药物样品加热至65℃至85℃之间持续5至15分钟以形成变性的经缓冲蛋白质药物样品。在一个实施例中，将经缓冲蛋白质药物样品加热至70℃持续10分钟。
10、在另一个实施例中，用于识别蛋白质药物样品中的污染物或杂质的非还原mce方法包括以下步骤：将蛋白质样品添加至上文所讨论的非还原缓冲液中以形成经缓冲蛋白质药物样品。将经缓冲蛋白质药物样品加热至50℃至72℃之间持续5至15分钟以形成变性的经缓冲蛋白质药物样品。替代性地，将经缓冲蛋白质药物样品加热至45℃至75℃之间持续5至15分钟以形成变性的经缓冲蛋白质药物样品。在一个实施例中，将经缓冲蛋白质药物样品加热至60℃至65℃持续10分钟。在另一个实施例中，将经缓冲蛋白质药物样品加热至63℃持续10分钟。在另一个实施例中，将经缓冲蛋白质药物样品加热至60℃持续10分钟。
11、在一些实施例中，将蛋白质药物样品与可检测标记混合并且在30℃至40℃加热20至40分钟或10至40分钟以形成变性的经标记蛋白质药物样品。在其他实施例中，将蛋白质药物样品与可检测标记混合并且在30℃至40℃加热15分钟以形成变性的经标记蛋白质药物样品。可检测标记包括但不限于dyomics dy-631 nhs酯。在一些实施例中，将标记通过milliq纯化的水稀释，并且在其他实施例中，将标记稀释在磷酸钠缓冲液中。在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
2.根据权利要求1所述的水性缓冲液，其中所述pH为6。
3.根据权利要求1所述水性缓冲液，其包含200mM 2-碘乙酰胺、1.2％十二烷基硫酸锂以及60mM磷酸钠。
4.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
5.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
6.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
7.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
8.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其中所述pH为8。
9.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其中所述pH为9。
10.根据权利要求8所述的水性缓冲液，其包含80mM二硫苏糖醇。
11.根据权利要求8所述的水性缓冲液，其包含142mM二硫苏糖醇。
12.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其进一步包含1.2％十二烷基硫酸锂和60mM磷酸钠。
13.一种水性电泳样品缓冲液，其由以下组成：
14.一种水性电泳样品缓冲液，其由以下组成：
15.一种用于识别蛋白质药物样品中的污染
16.根据权利要求15所述的方法，其中将所述经缓冲蛋白质药物样品在60℃加热10分钟。
17.根据权利要求15所述的方法，其中将所述经标记蛋白质药物样品在35℃加热15分钟。
18.根据权利要求15所述的方法，其中所述经稀释蛋白质药物样品为3.6μg/ml。
19.一种用于识别蛋白质药物样品中的污染物或杂质的方法，所述方法包括以下步骤：
20.根据权利要求19所述的方法，其中将所述经缓冲蛋白质药物样品在60℃加热10分钟。
21.根据权利要求19所述的方法，其中将所述样品在35℃加热15分钟。
22.根据权利要求19所述的方法，其中所述经稀释蛋白质药物样品为3.6μg/ml。
23.根据权利要求19所述的方法，其中所述可检测标记为DY-631N-羟基琥珀酰亚胺酯。
24.根据权利要求22所述的方法，其中所述可检测标记用二甲基亚砜(DMSO)复原，随后经200mM磷酸钠pH 7.2缓冲液稀释。
25.一种试剂盒，其包含根据权利要求1所述的缓冲液，以及
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
2.根据权利要求1所述的水性缓冲液，其中所述ph为6。
3.根据权利要求1所述水性缓冲液，其包含200mm 2-碘乙酰胺、1.2％十二烷基硫酸锂以及60mm磷酸钠。
4.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
5.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
6.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
7.一种水性电泳样品缓冲液，其包含：
8.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其中所述ph为8。
9.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其中所述ph为9。
10.根据权利要求8所述的水性缓冲液，其包含80mm二硫苏糖醇。
11.根据权利要求8所述的水性缓冲液，其包含142mm二硫苏糖醇。
12.根据权利要求7所述的水性缓冲液，其进一步包含1.2％十二烷基硫酸锂和60mm磷酸钠。
13.一种水性电泳样品缓冲液，其由以下组成：
14.一种水性电泳样品缓冲液，其由以下组成：
15.一种用于识别蛋白质药物样品中的污染物或杂质的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·里艾尔曼，G·卡劳，J·施内德赫泽，N·M·纳尔，
申请(专利权)人：里珍纳龙药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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