【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫细胞治疗领域，具体涉及一种联合表达gpx4的嵌合抗原受体及工程化免疫细胞。
技术介绍
1、t细胞是参与细胞免疫的一类重要的淋巴细胞，通过抗原呈递细胞的信号传递，可以特异性地识别并杀伤肿瘤细胞。然而，肿瘤细胞也会通过减少或丢失抗原表位、免疫抑制作用、肿瘤异质性(即同一种恶性肿瘤在不同患者个体间或者同一患者体内不同部位肿瘤细胞间从基因型到表型上存在的差异)等方式阻碍t细胞的特异性识别，从而逃避机体的免疫应答。嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptor t cell,car-t)疗法正是针对该问题应运而生的。具体来说，car分子是一种人为设计和构建的受体分子，由信号肽、胞外抗原结合域、铰链区、跨膜区、共刺激结构域、胞内信号传导结构域等部分组成。因此，car分子具有特异性识别肿瘤表面抗原、激活t细胞杀伤活性和刺激t细胞增殖等功能。通过采集培养肿瘤患者的t细胞并以人工方法转导car分子的基因，使患者自体的t细胞表达car分子。回输至患者体内后，t细胞可以通过car分子特异性且高效识别并杀伤肿瘤细胞，达到癌症治疗的效果。
2、在过去十年中，car-t细胞疗法在血液瘤的疗效方面取得了显著进展。但是car-t细胞疗法在实体肿瘤中却效果不佳。过继转移后缺乏长期持续性是导致car-t细胞在实体肿瘤疗效不佳的一个主要原因。肿瘤微环境非常复杂，严重影响着t细胞的各种生命活动，不利的肿瘤微环境甚至导致t细胞衰竭和死亡。t细胞死亡过程中逐渐失去抗肿瘤功能，无法有效抑制控制癌症的增殖或转移。细胞死亡是
3、因此，本领域迫切需要开发一种具有更强的抗死亡能力的car-t细胞，以延长car-t细胞过继转移后的持续性，实现更优更持续的细胞免疫疗效，尤其是针对实体肿瘤。
技术实现思路
1、本专利技术的目的就是提供一种联合表达gpx4的新一代嵌合抗原受体及其应用。
2、本专利技术的另一目的就是提供一种基于新一代car构建的免疫细胞及其制备方法与应用。
3、在本专利技术的第一方面，提供了一种工程化免疫细胞，所述工程化免疫细胞为自体或异体的t细胞或nk细胞，并且所述的工程化免疫细胞具有以下特征：
4、(a)所述工程化免疫细胞表达嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,car)，其中所述car靶向肿瘤表面标志物；和
5、(b)所述工程化免疫细胞表达外源的gpx4蛋白。
6、在另一优选例中，所述t细胞包括αβt、γδt细胞、nkt细胞、mait细胞，或其组合。
7、在另一优选例中，所述工程化免疫细胞选自下组：
8、(i)嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)；
9、(ii)嵌合抗原受体nk细胞(car-nk细胞)。
10、在另一优选例中，所述gpx4蛋白可以是组成型表达或诱导型表达。
11、在另一优选例中，提供了一种嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)，所述car-t细胞具有选自下组的特征：
12、(a)所述car-t细胞表达嵌合抗原受体car，所述car靶向肿瘤表面标志物；和/或
13、(b)当所述car-t细胞接触肿瘤细胞或诱导剂时，所述car-t细胞诱导表达gpx4蛋白。
14、在另一优选例中，在所述工程化免疫细胞中，car和gpx4蛋白是串联表达的。
15、在另一优选例中，在所述工程化免疫细胞中，car和gpx4蛋白各自独立地表达。
16、在另一优选例中，所述肿瘤表面标志物指肿瘤表面的特异性抗原。
17、在另一优选例中，所述嵌合抗原受体定位于所述工程化免疫细胞的细胞膜。
18、在另一优选例中，所述嵌合抗原受体定位于所述car-t细胞的细胞膜。
19、在另一优选例中，所述gpx4蛋白位于car-t细胞的胞内。
20、在另一优选例中，所述gpx4蛋白来源于人或非人哺乳动物。
21、在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括：啮齿动物(如大鼠、小鼠)、灵长动物(如猴)；优选为灵长动物。
22、在另一优选例中，所述gpx4蛋白是人源的。
23、在另一优选例中，所述gpx4蛋白选自下组：hgpx4(人)、mgpx4(鼠)、macacamulatta gpx4(猕猴)、pan troglodytes gpx4(黑猩猩)、nomascus leucogenys gpx4(白颊长臂猿)、saimiri boliviens gpx4(蜂松鼠猴)、rhinopithecus roxellana gpx4(川金丝猴)、piliocolobus tephrosceles gpx4(红疣猴)、chlorocebus sabaeus gpx4(黑脸绿猴)，或其组合。
24、在另一优选例中，所述gpx4蛋白具有选自下组的序列：
25、(i)如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4所示的序列；
26、(ii)在如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4所示序列的基础上，进行一个或多个(如1-4个)氨基酸残基的替换、缺失、改变或插入，或在其n端或c端添加1至30个氨基酸残基，较佳地1至10个氨基酸残基，更佳地1至5个氨基酸残基，从而获得的氨基酸序列；或
27、(iii)与如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4所示序列具有至少≥65％、至少≥70％、至少≥75％、至少≥80％、至少≥85％、至少≥90％、至少≥95％、至少≥96％、至少≥97％、至少≥98％或至少≥99％的序列同一性的氨基酸序列；
28、并且(ii)或(iii)中的氨基酸序列与(i)所示的序列具有相同或相似的能直接地清除细胞膜上的脂质过氧化的功能。
29、在另一优选例中，所述car具有式ia或ib所示结构：
30、l-abd-h-tm-c-cd3ζ (ia)
31、l-abd1-abd2-h-tm-c-cd3ζ (ib)
32、式中，
33、l为无或信号肽序列；
34、abd(antigen-binding domain)、abd1、abd2为抗原结合域或其活性片段，abd可以来自含有轻链和重链的传统抗体的单链可变区片段(single-chain fragment variable,scfv)，也可以是来自只含有重链的单域抗体的重链可变区片段(variable domain ofheavy chain antibody,vhh)，也可以是免疫细胞表面受体蛋白(如nkg2d蛋白)的胞外域；
35、h为无或铰链区；
36、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种工程化免疫细胞，其特征在于，所述工程化免疫细胞为自体或异体的T细胞或NK细胞，并且所述的工程化免疫细胞具有以下特征：
2.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述CAR具有式Ia或Ib所示结构：
3.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述GPX4蛋白具有选自下组的序列：
4.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述CAR的氨基酸序列如SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:16所示。
5.一种制备如权利要求1所述的工程化免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.一种制剂，其特征在于，所述制剂含有如权利要求1所述的工程化免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.一种如权利要求1所述的工程化免疫细胞的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。
8.一种如权利要求1所述的工程化免疫细胞，或如权利要求6所述的制剂的用途，其特征在于，用于预防和/或治疗癌症或肿瘤。
9.如权利要求7或8所述的用途，其特征在于，所
10.一种用于制备如权利要求1所述的工程化免疫细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有容器，以及位于容器内的：
...【技术特征摘要】
1.一种工程化免疫细胞，其特征在于，所述工程化免疫细胞为自体或异体的t细胞或nk细胞，并且所述的工程化免疫细胞具有以下特征：
2.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述car具有式ia或ib所示结构：
3.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述gpx4蛋白具有选自下组的序列：
4.如权利要求1所述的工程化免疫细胞，其特征在于，所述car的氨基酸序列如seq idno:15、seq id no:16所示。
5.一种制备如权利要求1所述的工程化免疫细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.一种...
【专利技术属性】
技术研发人员：严俊杰，黄智宏，张曦，韩德平，
申请(专利权)人：广州百吉生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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