【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫磁珠领域，特别是一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球及其制备方法、应用和血液处理装置。
技术介绍
1、在临床检查中的血液样本检查需要按照检测项目的需求将患者血液样本进行血清或者血浆分离来适应检测需求，其主要原因是红细胞存在会干扰免疫学检测方法的抗体捕获抗原，且红细胞破裂导致胞内大量血红蛋白，酶，离子等细胞内容物释放引起强烈干扰，大大降低标本质量和检测的准确性。临床检验中全血分离红细胞获得血清或血浆的方法主要为离心法。离心法操作除了需要离心设备还可能造成血细胞的破裂会降低样本质量且离心时间约为5min(枸橼酸钠抗凝剂全血样本，3000rpm)。对于许多急性病症检测项目如炎症，心肌梗塞等，快速准确地进行血液样本处理和检测，有利于为患者争取治疗时间窗口。
2、随着临床检测技术的发展，免疫学检测逐渐成为临床医生判断病情的手段，其核心在于满足临床治疗或家用监护的快速诊断需求，及时获得准确的检测结果。免疫磁珠技术(immunomagnetic bead，imb)通过在磁珠表面偶联包被抗体进行抗原抗体反应，与抗原表面结合形成免疫复合物，在强磁作用下使抗原-抗体-磁珠免疫复合物分离，实现抗原筛选或者去除标记的抗原。通过使用免疫磁珠技术快速分离红细胞获得血浆，应用于免疫学检测，能更好的服务与临床诊断。
3、现有专利技术中，中国专利申请号cn200710305363.6公开了使用包被了凝集素或抗红细胞抗体的磁性微球分离全血中的红细胞的方法，但是分离时间需要10min。中国专利申请号cn20081024450
4、中国专利申请号cn202010490280.4公开了一种用于分离红细胞的免疫磁珠及其制备方法和应用，涉及免疫磁珠制备
该免疫磁珠的制备方法包括：步骤s1、用活化剂对磁珠进行活化，所述磁珠与活化剂的重量比例为1:0.1-5；所述活化的时间为 5-30min；步骤s2、将抗红细胞抗体加入步骤s1得到的活化产物中，进行超声处理；步骤s3、将封闭剂加入步骤s2得到的产物中进行封闭，强磁分离，得到用于分离红细胞的免疫磁珠；所述步骤s3还包括：将得到的用于分离红细胞的免疫磁珠进行清洗，加入保存液中，分散均匀后，按照所需的量分成小份，进行真空干燥，所述保存液为50mm 的三羟甲基氨基甲烷和0.5wt％的牛血清白蛋白，所述保存液的ph值为7.8。其中活化剂包括1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺、n-羟基琥珀酰亚胺、戊二醛、过碘酸盐和氯胺-t中的至少一种。步骤s3中，所述封闭剂选自1-5wt％牛血清白蛋白溶液、0.1-5wt％酪蛋白溶液和10-50mm甘氨酸中的至少一种。所述的磁珠为包裹有四氧化三铁的聚苯乙烯微球。所述的磁珠的粒径为1-5μm。步骤s2中，所述的抗红细胞抗体与磁珠的质量比为：1：10-1000。该专利使用真空干燥的方式制备冻干品免疫磁珠制备方法，500ul 全血样本在中红细胞吸附分离时间为2min，但该方法将全血样本直接加于盛有冻干试剂的西林瓶中，所能分离的全血样本体积受到限制，不能灵活调节。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球及其制备方法、应用和血液处理装置，缩短全血样本中红细胞吸附分离时间，更短的处理时间大大提高检测效率，延长置于常温和高温环境的保存时间。同时，本专利技术通过制备定量的冻干试剂，可以根据全血样本的体积进行试剂的使用量调节，能快速分离全血样本获得血浆。进一步，为了推广本专利技术的应用，开发出一种含有分离红细胞的免疫磁珠冻干微球的血液处理装置，能更好的适应临床免疫检测中快速分离全血中红细胞获得血浆样本的要求，简化血液样本处理流程，提高检测效率。
2、为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：
3、一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球，包括磁珠以及与所述磁珠偶联的抗红细胞抗体，所述免疫磁珠冻干微球的直径小于1μm，优选地，所述免疫磁珠冻干微球的直径为0.1～0.4μm；
4、所述免疫磁珠冻干微球中抗红细胞抗体与磁珠的偶联比例为1:20～95，优选地，所述免疫磁珠冻干微球中抗红细胞抗体与磁珠的偶联比例为1:20～50。
5、在本专利技术的一个优选的实施例中，所述磁珠冻干试剂微球的直径为0.1～0.3μm。
6、本专利技术采用化学偶联的方式将抗红细胞抗体与直径小于1μm的磁珠偶联制备了吸附和分离效率更高的免疫磁珠，实现了对100ul全血样本的红细胞吸附分离时间明显缩短。本专利技术所使用的化学偶联工艺优化了抗体与磁珠的偶联比例，提高了磁珠的抗体载量，提高了所制备的免疫磁珠的红细胞吸附和分离效率。
7、常规认为更小粒径的磁珠，由于分散性更好，在沉降吸附时间更长，如在中国专利申请号202010490280.4中指出，磁珠粒径大于5μm不利于抗体偶联，磁珠粒径小于1μm不利于强磁分离。本专利技术在优化的抗体和磁珠偶联比例下，小粒径的磁珠(＜ 1μm)由于具有更大的比表面积，具有更多的抗体载量，分散性更好，表现出更优异的吸附红细胞和强磁分离效率，反而缩短了分离时间。
8、在本专利技术的一个优选的实施例中，所述免疫磁珠冻干微球中包括1～4wt％牛血清白蛋白。1～4wt％牛血清白蛋白为pbs缓冲液中主要成分，所述免疫磁珠冻干微球中包括牛血清白蛋白可促进免疫磁珠冻干微球的溶解。
9、所述免疫磁珠冻干微球通过液氮冷冻真空干燥制得。本专利技术采用液氮冷冻真空干燥，可控制制得的免疫磁珠冻干微球的具体质量，便于直接定量添加。每颗免疫磁珠冻干微球具有固定的质量，可根据处理的全血样本的体积，来控制加入的免疫磁珠冻干微球的质量，达到快速分离不同体积全血样本的目的。本专利技术制备的免疫磁珠冻干微球，可在高温下储存30天，常温保存2年。
10、本专利技术还公开了一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球的制备方法，包括以下步骤：
11、s1、在磁珠溶液中加入抗红细胞抗体、偶联剂发生偶联反应，抗红细胞抗体与磁珠的质量比为1:20～95；
12、s2、将封闭剂加入s1得到的产物中进行封闭，强磁分离，并加入缓冲液，混合均匀得到免疫磁珠混合液；
13、s3、将s2得到的免疫磁珠混合液进行液氮冷冻真空干燥，制得免疫磁珠冻干微球，所述免疫磁珠冻干微球的直径为0.1～0.4μm。
14、液氮冷冻即将试剂液滴滴入液氮(-196℃)中进行急速冷冻，使液滴快速冷本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球，包括磁珠以及与所述磁珠偶联的抗红细胞抗体，其特征在于，所述免疫磁珠冻干微球的直径小于1μm，优选地，所述免疫磁珠冻干微球的直径为0.1～0.4μm；
2.根据权利要求1所述的免疫磁珠冻干微球，其特征在于，所述免疫磁珠冻干微球中包括1～4wt％牛血清白蛋白。
3.一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，S3中液氮冷冻真空干燥的步骤为将免疫磁珠混合液滴加于液氮中，液滴体积为20～100uL，制备液氮冷冻微球，真空度为1～10Pa，温度为-50～-30℃。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，S1中磁珠溶液的制备方法为先于磁珠中加入去离子水制成磁珠浓度为5-15mg/mL的磁珠悬浮液，再加入缓冲液，缓冲液的重量为磁珠悬浮液的2～8wt％。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，S2中所述免疫磁珠混合液中所述免疫磁珠的浓度为1～50mg/mL。
7.根据权利要求3所述的制备方法，
8.一种权利要求1所述的磁珠冻干微球在分离血浆中的红细胞的应用，其特征在于，每100uL全血样本中添加25～50mg免疫磁珠冻干微球。
9.一种用于分离红细胞免疫的血液处理装置，其特征在于，包括权利要求1中的免疫磁珠冻干微球。
10.根据权利要求9所述的血液处理装置，其特征在于，所述血液处理装置为采血试管，包括试管(1)和权利要求1中的免疫磁珠冻干微球(2)，所述免疫磁珠冻干微球(2)内置于所述试管(1)中。
...【技术特征摘要】
1.一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球，包括磁珠以及与所述磁珠偶联的抗红细胞抗体，其特征在于，所述免疫磁珠冻干微球的直径小于1μm，优选地，所述免疫磁珠冻干微球的直径为0.1～0.4μm；
2.根据权利要求1所述的免疫磁珠冻干微球，其特征在于，所述免疫磁珠冻干微球中包括1～4wt％牛血清白蛋白。
3.一种用于分离红细胞的免疫磁珠冻干微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，s3中液氮冷冻真空干燥的步骤为将免疫磁珠混合液滴加于液氮中，液滴体积为20～100ul，制备液氮冷冻微球，真空度为1～10pa，温度为-50～-30℃。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，s1中磁珠溶液的制备方法为先于磁珠中加入去离子水制成磁珠浓度为5-15mg/ml的磁珠悬浮...
【专利技术属性】
技术研发人员：邬鹏程，陈立杰，危亚熵，程宁，黄常青，刘赛，郭凡财，冯静，张良，黎俊，谢凯，袁海涛，
申请(专利权)人：湖南乐准智芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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