β－兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及β－兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条及其制备方法，有效解决快速、简便同时检测出β－兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗的问题，方法是，基材ＰＶＣ板上面自前向后依次设置有引水玻璃纤维、载体玻璃纤维、硝酸纤维膜和吸水棉浆板，引水玻璃纤维、载体玻璃纤维和吸水棉浆板上面覆盖有由前部覆盖膜和后部覆盖膜组成的覆膜，测试条前部载体玻璃纤维上吸附有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物、抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；中部硝酸纤维膜上自后向前分布有一条包被有兔抗鼠多抗的质控线，二条分别包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物的检测线，本发明专利技术有效用于同时检测沙丁胺醇、盐酸克伦特罗，方便、快捷，结果准确。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及β -兴奋剂检测
，特别是一种β -兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦 特罗二元检测测试条及其制备方法。
技术介绍
β -兴奋剂是一类拟肾上腺素，因其能使动物和人体组织中的β受体兴奋(激 动)从而调节体内不同组织的机能而得名，其化学成分为苯乙醇胺衍生物，该类药物具有 促进畜禽脂肪分解、增加肌肉生长作用，作为营养重分配剂，以提高瘦肉率，减少脂肪沉积 和促进动物生长，被一些畜牧养殖者作为养殖促进剂非法使用。在养殖业中最常用的是盐 酸克仑特罗(Clenbuterol)、沙丁胺醇(Salbutamol)和莱克多巴胺(ractopamine)，在家 畜饲料中使用兴奋剂而造成消费者食物中毒事件时有发生。兴奋剂作为促进动物 生长、提高瘦肉率的饲料添加剂，但长期使用会使该类药物在动物食品中蓄积，人食用了饲 喂含β-兴奋剂作为添加剂饲料的畜产品后，就会出现中毒症状，通常会出现肌肉震颤、心 悸、精神紧张、头疼、肌肉疼痛、晕眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，甚至死亡。因此，世界许 多国家禁止在饲料中使用盐酸克伦特罗等β-兴奋剂来增加动物的瘦肉率。我国政府已明 令禁止在畜牧生产中使用盐酸克伦特罗等兴奋剂。目前，现有技术对于盐酸克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的检测主要依赖化学 仪器分析、酶免疫检测试剂盒及单独检测盐酸克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的检测测 试条。监管部门并不知道养殖户使用了何种β兴奋剂，检测存在一定的盲目性，常常造成 漏检。因此，市场迫切需要有一种试剂能同时检测常见的β兴奋剂，以方便日常监管工作
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本专利技术之目的就是提供一种β “兴奋剂沙 丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条及其制备方法，可有效解决快速、简便地同时检测出 β -兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗的问题，其解决的技术方案是，该测试条包括基材PVC 板和覆膜，基材PVC板上面自前向后依次设置有引水玻璃纤维、载体玻璃纤维、硝酸纤维膜 和吸水棉浆板，引水玻璃纤维、载体玻璃纤维和吸水棉浆板上面覆盖有由前部覆盖膜和后 部覆盖膜组成的覆膜，测试条前部载体玻璃纤维上吸附有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物、抗盐 酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；中部硝酸纤维膜上自后向前分布有一 条包被有兔抗鼠多抗(为公知市售产品，如郑州兰森生物技术有限公司的产品)的质控线， 二条分别包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物的检测线(所说的 前、后是指以引水方向向吸水方向而言，引水玻璃纤维为前，吸水棉浆板为后)，硝酸纤维膜 两端分别与载体玻璃纤维后端面和吸水棉浆板前端面紧密接触，载体玻璃纤维前端面和引 水玻璃纤维后端面紧密接触；本专利技术的测试条的制备方法是，由以下步骤实现首先分别制备胶体金标记单克隆抗体、胶体金溶液、胶体金标记物、固化金标物、包被膜，再将上述制备好的包被膜、固化 金标物、引水玻璃纤维、吸水棉浆板固定粘结于基材PVC板上，覆盖上覆膜，切割成长条即可。本专利技术可有效用于同时检测沙丁胺醇、盐酸克伦特罗，方法简单，方便、快捷，结果 准确。四附图说明附图为本专利技术测试条立体结构图(覆膜掀起)。五具体实施例方式以下结合附图对本专利技术的具体实施方式作详细说明。由附图给出，本专利技术二元检测测试条其结构是，包括基材PVC板和覆膜，基材PVC 板1上面自前向后依次设置有引水玻璃纤维3、载体玻璃纤维4、硝酸纤维膜2和吸水棉浆 板5，引水玻璃纤维3、载体玻璃纤维4和吸水棉浆板5上面覆盖有由前部覆盖膜7和后部 覆盖膜6组成的覆膜，测试条前部载体玻璃纤维上吸附有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物、抗盐 酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；中部硝酸纤维膜上自后向前分布有一 条包被有兔抗鼠多抗的质控线，二条分别包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋 白质偶联物的检测线(所说的前、后是指以引水方向向吸水方向而言，引水玻璃纤维为前， 吸水棉浆板为后)，硝酸纤维膜两端分别与载体玻璃纤维后端面和吸水棉浆板前端面紧密 接触，载体玻璃纤维前端面和引水玻璃纤维后端面紧密接触。为了保证使用效果，所说的覆膜为不干胶膜。本专利技术二元检测测试条的制备方法是，由以下步骤实现首先分别制备胶体金标 记单克隆抗体、胶体金溶液、胶体金标记物、固化金标物、包被膜，再将上述制备好的包被 膜、固化金标物、引水玻璃纤维、吸水棉浆板固定粘结于基材PVC板上，覆盖上覆膜，切割成 长条即可；具体是1、胶体金标记单克隆抗体的制备取1份含有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物或抗 盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水与2份60mM醋酸缓冲液混合，室温 (18-25°C )搅拌下逐滴加入辛酸33 μ 1/ml小鼠腹水(即辛酸加入量为每Iml小鼠腹水中 加入33 μ 1的辛酸)，混勻后，18-25°C的室温放置30分钟，15000转/分、4°C离心20分钟， 用玻璃棉过滤上清液，弃沉淀物，过滤后的上清液用NaOH调PH值至7. 2，再加入硫酸铵，硫 酸铵加入量为每Iml PH值7. 2的上清液中加入硫酸铵0. 277g(硫酸铵0. 277g/ml PH值 7. 2上清液)，快速使硫酸铵溶解，18-25°C的室温搅拌30分钟，15000转/分、4°C离心20分 钟，弃上清液，沉淀物用原小鼠腹水1/2体积的0. OlM PBS pH 7. 2溶液溶解，再放入0. OlM PBS pH 7. 2溶液中浸没，4°C透析48小时，用紫外分光光度计测定蛋白含量，即制备成胶体 金标记用的抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体、抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗 体；所说的小鼠腹水，其制备方法是，将液体石蜡注射7周龄Balb/c小鼠腹腔内，注射量为 500 μ 1/只，10天后，将分泌盐酸克伦特罗蛋白质偶联物或抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克 隆抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内，注射杂交瘤细胞的数量为2 X IO6/只鼠，10天后用 无菌注射器注射于小鼠腹腔采集腹水，即为盐酸克伦特罗蛋白质偶联物或抗沙丁胺醇蛋白5质偶联物单克隆抗体的小鼠腹水；2、制备胶体金溶液在烧杯中加入IOOOml蒸馏水，100°C煮沸约5分钟，再加入质 量浓度为1 %的氯金酸溶液IOml和质量浓度为1 %的柠檬酸三钠溶液15 20ml，搅拌至溶 液呈深红色，冷至室温(18-25°C)，碳酸钾(K2TO3)调PH值至待标记单克隆抗体的等电点或 略偏碱，即为待标记的胶体金溶液；3、胶体金标记物的制备取IOOml步骤2中调好PH的胶体金溶液，加入抗沙丁胺 醇蛋白质偶联物单克隆抗体或抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体1 10μ g/ml胶 体金溶液(即Iml胶体金溶液中加入单克隆抗体1-10 μ g)，搅拌2分钟，加入质量浓度为 10%的牛血清白蛋白(BSA) 15 μ 1/ml胶体金溶液终止反应，离心50分钟，得沉淀物，沉淀物 用PH为7. 4的0. OlM PBS稀释至步骤2的原胶体金溶液体积的30%，制备成抗沙丁胺醇蛋 白质偶联物单克隆抗体或抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；4、固化金标物的制备用载体玻璃纤维吸取抗沙丁胺醇蛋白质偶联物单克隆抗体 或抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物，干燥，制备成抗沙丁胺醇蛋白 质偶联物单克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种β－兴奋剂沙丁胺醇、盐酸克伦特罗二元检测测试条，包括基材ＰＶＣ板和覆膜，其特征在于，基材ＰＶＣ板（１）上面自前向后依次设置有引水玻璃纤维（３）、载体玻璃纤维（４）、硝酸纤维膜（２）和吸水棉浆板（５），引水玻璃纤维（３）、载体玻璃纤维（４）和吸水棉浆板（５）上面覆盖有由前部覆盖膜（７）和后部覆盖膜（６）组成的覆膜，测试条前部载体玻璃纤维上吸附有抗沙丁胺醇蛋白质偶联物、抗盐酸克伦特罗蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物；中部硝酸纤维膜上自后而前分布有一条包被有兔抗鼠多抗的质控线，二条分别包被有沙丁胺醇蛋白质偶联物、盐酸克伦特罗蛋白质偶联物的检测线，硝酸纤维膜两端分别与载体玻璃纤维后端面和吸水棉浆板前端面紧密接触，载体玻璃纤维前端面和引水玻璃纤维后端面紧密接触。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉金，杨书豪，刘丽，
申请(专利权)人：河南省科学院生物研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]