【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针、引物、试剂盒及其应用，属于病毒检测和鉴定。
技术介绍
1、鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis，ib)是由鸡传染性支气管炎病毒(ibv)引起鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病，是危害我国养禽业健康养殖的重要疫病，该病呈全球分布的家禽疾病。其临床特征是张口呼吸、气管罗音、咳嗽、流泪，可造成雏鸡死亡，解剖可见支气管阻塞、肾脏病变和输卵管永久性退化，饲料报酬率降低，蛋鸡产蛋量、品质下降等。该病自1931年报道至今，ibv在全球养禽地区广泛且持续流行，给全球的家禽养殖业造成巨大的经济损失，阻碍了养禽业的发展。
2、目前国内外主要依靠ib弱毒活疫苗和灭活疫苗株进行免疫预防。弱毒活疫苗由于能诱导广泛的细胞免疫反应和体液免疫反应，免疫原性好，所以弱毒活疫苗是全球应用最广泛的疫苗。弱毒活疫苗主要用于雏鸡1日龄首疫和10日龄-20日龄二免，目前国内使用的弱毒疫苗株主要有：mass型(h120株、h52株、ma5株)；qx型(qxl87株)；4/91型(4/91株、nna株)；ldt3型(ld t3-a株)等。mass型疫苗株是全球应用最早、使用最广泛的毒株，其中h120株疫苗仍然是目前全球使用最广泛的ib活疫苗株，该毒株主要应用于1-3日龄雏鸡，免疫方式主要为喷雾免疫，其次为点眼免疫、饮水免疫，用于防控雏鸡感染ib野毒引起的呼吸道发病。虽然国内鸡群几乎都通过h120株活疫苗进行免疫防控雏鸡的ib野毒的早期感染，但在每年的冬春季节ib仍是养鸡业的最高
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术的第一个目的在于提供一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针，可用于对鸡传染性支气管炎h120株病毒的检测。
2、本专利技术的第二个目的在于提供一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的引物，可用于对ib h120株病毒的检测。
3、本专利技术的第三个目的在于提供一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的试剂盒，灵敏、快速、准确检测ib h120株病毒，特别是该毒株在鸡体内的免疫定植情况。
4、本专利技术的第四个目的在于提供一种鸡传染性支气管炎h120株病毒的鉴定方法，用以对ib h120株病毒进行鉴定。
5、实现本专利技术的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针，探针包括单链dna；单链dna的核苷酸序列如seq id no.1所示。
6、进一步地，探针还包括fam荧光报告基团；fam荧光报告基团连接在单链dna的5’端。
7、进一步地，探针还包括mgb荧光淬灭基团；mgb荧光淬灭基团连接在单链dna的3’端。
8、实现本专利技术的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的引物，引物包括正向引物和反向引物；正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。
9、实现本专利技术的第三个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的试剂盒，试剂盒包括探针和引物；探针包括单链dna；单链dna的核苷酸序列如seq id no.1所示；引物包括正向引物和反向引物；正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。
10、进一步地，试剂盒还包括标准阴性对照品和标准阳性对照品。
11、实现本专利技术的第四个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种鸡传染性支气管炎h120株病毒的鉴定方法，通过如上所述的试剂盒对样本进行rt-qpc r扩增，以对病毒进行鉴定。
12、进一步地，扩增的反应程序包括：42℃反转录5min，95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环。
13、进一步地，根据ct值和扩增曲线鉴定是否为鸡传染性支气管炎h120株病毒。
14、进一步地，ct值≤35且有扩增曲线则判断为阳性，35＜ct值＜38判断为可疑，ct值≥38判断为阴性。
15、相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：
16、1、本专利技术的探针和引物用于对ib h120株病毒的检测，特异、灵敏、快速、有效；
17、2、本专利技术用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的试剂盒，可以用于多种免疫方式干预后进行病毒的鉴定，评估病毒是否定植成功；
18、3、本专利技术用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的试剂盒可以准确检测微量的ib h120株病毒，可以应用于h120株病毒含量检测试验，使h120株病毒含量检测结果更精准；
19、4、本专利技术的鸡传染性支气管炎h120株病毒的鉴定方法结合试剂盒操作，简单、高效准确可以对病毒进行鉴定，是普通rt-pcr的100倍，方法简便、快速，整个过程可在一个小时内完成，计算机自动报告结果，无需电泳及其他后续的工作，即方便了操作又减少了污染。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的探针，其特征在于，所述探针包括单链DNA；所述单链DNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.如权利要求1所述的用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的探针，其特征在于，所述探针还包括FAM荧光报告基团；所述FAM荧光报告基团连接在单链DNA的5’端。
3.如权利要求1所述的用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的探针，其特征在于，所述探针还包括MGB荧光淬灭基团；所述MGB荧光淬灭基团连接在单链DNA的3’端。
4.一种用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的引物，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。
5.一种用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括探针和引物；所述探针包括单链DNA；所述单链DNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所
6.如权利要求5所述的用于检测鸡传染性支气管炎H120株病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阴性对照品和标准阳性对照品。
7.一种鸡传染性支气管炎H120株病毒的鉴定方法，其特征在于，通过如权利要求5所述的试剂盒对样本进行RT-qPCR扩增，以对鸡传染性支气管炎H120株病毒进行鉴定。
8.如权利要求7所述的鸡传染性支气管炎H120株病毒的鉴定方法，其特征在于，所述扩增的反应程序包括：42℃反转录5min，95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环。
9.如权利要求7所述的鸡传染性支气管炎H120株病毒的鉴定方法，其特征在于，根据CT值和扩增曲线鉴定是否为鸡传染性支气管炎H120株病毒。
10.如权利要求9所述的鸡传染性支气管炎H120株病毒的鉴定方法，其特征在于，所述CT值≤35且有扩增曲线则判断为阳性，35＜CT值＜38判断为可疑，CT值≥38判断为阴性。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针，其特征在于，所述探针包括单链dna；所述单链dna的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.如权利要求1所述的用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针，其特征在于，所述探针还包括fam荧光报告基团；所述fam荧光报告基团连接在单链dna的5’端。
3.如权利要求1所述的用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的探针，其特征在于，所述探针还包括mgb荧光淬灭基团；所述mgb荧光淬灭基团连接在单链dna的3’端。
4.一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的引物，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如seq id no.2所示；所述反向引物的核苷酸序列如seq id no.3所示。
5.一种用于检测鸡传染性支气管炎h120株病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括探针和引物；所述探针包括单链dna；所述单链dna的核苷酸序列如seq id no.1所示；所述引物包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈春丽，王占新，林绮萍，唐满华，李三妹，
申请(专利权)人：广东温氏大华农生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。