【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫治疗，具体涉及一种经修饰的靶向hbv免疫细胞及其医药用途。
技术介绍
1、1.1 hbv在世界范围内的流行
2、hbv是一种非细胞病变的双链dna病毒，主要通过血液传播，母婴传播或性传播。虽然hbv有可用的疫苗和直接作用的高效抗病毒药，但hbv在全世界人群中仍造成很大的疾病负担。2015年全球携带hbv的人数为2.57亿，因慢性hbv感染并发症导致的死亡人数超过88.4万，相当于每36秒就有一个死亡发生。流行病学研究估算表明，与美洲或欧洲比较，亚洲和非洲国家的hbv感染比例更高。
3、1.2亚洲人最常感染的hbv和hla基因型
4、hbv易突变产生不同的基因型，据报道全球目前存在10种不同hbv基因型。而在亚洲国家中，hbv的基因型主要为b和c亚型。hbv基因型与肝病的进展、肝硬化的风险、肝细胞癌(hcc)的发展等预后因素显著相关。研究人员重点关注不同区域中不同基因型的流行。例如，与其他基因型比较，基因型c和d更容易发展为肝硬化和hcc。
5、人类白细胞抗原(hla)，是人类基因组中最具多态性的基因复合体基因分型包括hla-a，hla-b，hla-c，hla-drb1，hla-dqb1等。研究发现，与其它hla基因相比，hla-a等位基因在中国汉族人群中发挥更加重要的作用。在亚洲最常见的hla-a*02亚型则是*02：01，*02：06和*02：07。
6、1.3 hcc及其致癌通路
7、原发性肝癌(hcc，hepatocellular car
8、hbv-dna整合见于80-90％的hbv相关肝细胞癌。hbv-dna整合在hbv相关hcc的发生发展过程中起着重要的作用。首先，hbv-dna包含与肝癌发生相关的基因，如编码端粒酶逆转录酶、赖氨酸甲基转移酶2b和细胞周期蛋白a2的基因。其次，hbv整合到人类基因组的时候，通过对插入位点基因表达的影响，增高基因组不稳定性，从而激活某些致癌途径，如磷酸肌醇-3-激酶/akt、myc、wnt/β-联蛋白、c-met和hedgehog等。研究认为akt信号传导的活化会抑制转化生长因子(tgf)-β诱导的凋亡，促进肿瘤形成，同时也与β-联蛋白信号传导有关联，从而引发肝细胞癌变。另外，hbv-dna整合所致的分子改变也会损伤dna检控点，并导致硬化肝脏中肿瘤的形成。这些分子改变包括p53肿瘤抑制基因功能丧失、p27细胞周期调节因子的失活、胰岛素样生长抑制2受体位点杂合性缺失以及p16细胞周期抑制蛋白表达的缺失。
9、总之，hbv病毒会引发肝脏基因表达的变化，从而赋予细胞肿瘤的特征。这些变化涉及dna甲基化的改变、mrna表达谱的改变以及许多信号转导通路的组合激活。其中，诱发肝癌的主要机制是由免疫反应介导的。病毒利用免疫反应在肝脏中创造的氧化环境，结构性地激活信号通路，阻断细胞凋亡，促进细胞存活，支持hbv复制，从而促进病毒的持续存在；同时病毒也可能抑制或阻断先天免疫，从而影响获得性免疫反应的发展。这种慢性、持续性的免疫反应，在病理层面上表现为肝炎和长期的纤维化反应，最终导致肝硬化和肝癌。
10、整合的hbv-dna，包含一个完整的开放阅读框(orf)的信封蛋白，此蛋白可以作为生产hbs蛋白的模。hcc细胞基因组中整合的hbv-dna的转录水平和hbs蛋白表达水平呈正相关。而且hbs蛋白在hbv相关hcc的转移灶中也有表达。有研究显示，当hbs蛋白的完整开放阅读框被嵌合到宿主的基因组中，血浆样本、hcc肿瘤组织可以检测到hbs蛋白，而临近的肝脏组织中并没有hbs蛋白的表达。这提示这些hbs蛋白并不是感染造成的，而是来源于肝癌的发生发展过程中嵌入宿主细胞基因组的hbv病毒基因。即肝癌细胞无hbv感染却持续表达hbs蛋白。抗病毒药物对于这种整合的hbv基因表达的蛋白是没有抑制和下调作用的。所以hcc患者，即使在抗病毒治疗下hbs蛋白表达仍为阳性。
11、1.4 hcc的治疗现状
12、当前，外科手术切除和肝移植是治疗hcc最有效的方法，但符合这些手术标准的hcc患者不足30％，且符合条件的患者5年内术后复发率高达80％。此外，供体肝脏的等待时间很长，等待移植的人数持续增加，导致将近25％的患者最终因肿瘤进展而无法接受移植。最常用的保守治疗是经导管的肝动脉化疗栓塞(tace)，但这种疗法禁用于晚期肝硬化和肝脏功能代偿不全的患者；另外，与栓塞相关的缺血性损伤会导致患者腹水增加，并可能导致死亡。
13、目前fda批准用于治疗hcc的靶向药为索拉非尼和瑞格非尼，均为酪氨酸激酶抑制剂。索拉菲尼在未接受治疗的晚期肝癌的中位总生存期(mos)为10.7个月，中位至疾病进展时间为5.5个月。其中索拉菲尼一线治疗失败的二线晚期hcc使用瑞戈非尼的临床研究中mos为10.6个月，中位无进展生存期(mpfs)为3.1个月，客观缓解率(orr)为11％]。而且晚期hcc患者的临床试验数据提示，索拉非尼和瑞格非尼与出血风险增高以及动静脉血栓有关，且其在适应症人群中生存期优势只有2-3个月，随着时间延长，患者容易发生疾病进展。另外阿帕替尼在既往接受过至少一线系统性治疗后失败或不可耐受的晚期hcc的iii期临床试验显示，阿帕替尼组的mos为8.7个月，mpfs为4.5个月，orr为10.7％。以上生存数据可见目前靶向药物疗效有限。
14、近年来，hcc的免疫治疗研究取得了重大突破。免疫治疗在hcc一线治疗中的地位有相关临床研究可以验证，免疫联合疗法一线治疗iii期研究(imbrave150)的结果显示：与标准疗法索拉非尼单药治疗相比，采用阿替利珠单抗和贝伐珠单抗(t+a)联合用药能够大幅降低患者死亡风险和疾病进展风险，但orr(recist v1.1)仅达到27.3％，其mpfs仅为6.8个月。在晚期hcc预后更差的中国患者中，其mpfs仅为5.7个月。另外，pd-1在hcc二线治疗的依据在checkmate-040中可以证实，未伴hcv或hbv感染的晚期hcc患者的pd-1单药治疗，orr为15-20％，未接受过索拉菲尼治疗的受试者mos为28.6个月，接受过索拉菲尼治疗的mos为15.6个月。以上数据表明hcc的免疫治疗与以往相比有了很大进步，但其疗效仍差强人意，有待进一步研究。
15、化疗一般对hcc患者不产生显著的生存优势。虽然目前正在开发几种化疗药物的联合疗法，例如，piaf(顺铂、干扰素、多柔比星和5-氟尿嘧啶)、gemox(吉西他滨和奥沙利铂)和folfox4(氟尿嘧啶、亚叶酸钙和奥沙利铂输液)，但与之相关的临床试验尚未成功，结果也不完整。
16、hbv相关hcc患者需要抗病毒治疗以抑制病毒复制、降低病毒负荷以及改善肝硬化的预后。同时由于抗肿瘤治疗有可能本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述经修饰的免疫细胞包含靶向HBV表面抗原的T细胞受体(TCR)和嵌合转换受体。
2.根据权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述TCR包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；其中，
3.如权利要求2所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述TCRα链可变区包含互补决定区αCDR1、αCDR2和αCDR3，且所述TCRβ链可变区包含互补决定区βCDR1、βCDR2和βCDR3，其中：
4.如权利要求2所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述TCRα链可变区包含与SEQID NO:7具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或
5.根据权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合转换受体包含：
6.根据权利要求5所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述免疫抑制蛋白是包括PD1、CTLA4，BTLA，TIM3，TIGIT，TGFβ受体以及其他任意具有免疫抑制功能或与免疫抑制信号通路相关的蛋白中的任意一种蛋白及其组合，且所述免疫抑制蛋白的ECD序列可存在至少一个氨基酸突变
7.根据权利要求5所述的经修饰的免疫细胞，所述ECD和所述ICD通过跨膜区序列连接；优选地，所述跨膜区包含选自以下的蛋白的跨膜结构域：T细胞受体的α，β或δ链,CD28，CD3ε,CD45,CD4,CD5,CD8,CD9，CD16，CD22，CD33，CD37，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137和CD154及其组合，且所述跨膜区序列可存在至少一个氨基酸突变；更优选地，所述跨膜区序列为CD8跨膜区序列或CD28跨膜区序列；更优选地，所述CD8跨膜区序列如SEQ ID NO:10所示，所述CD28跨膜区序列如SEQ ID NO:11所示。
8.根据权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞选自淋巴细胞、树突状细胞、巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞；优选地，所述免疫细胞为T细胞。
9.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1-8任一项所述的TCR分子的核酸序列；和/或
10.一种载体，其特征在于，所述的载体包含权利要求9所述的核酸分子。
11.一种药物组合物，其特征在于，所述组合物含有药学上可接受的载体以及权利要求1-8任一项所述的经修饰的免疫细胞、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述载体。
12.权利要求1-8任一项所述的经修饰的免疫细胞、权利要求9所述的核酸分子、权利要求10所述载体或权利要求11所述的药物组合物在制备用于预防或治疗由HBV感染所引发的相关疾病的药物中的用途。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述HBV感染相关疾病包含肝炎、肝纤维化、肝硬化、肝癌所组成的一种或多种。
...【技术特征摘要】
1.一种经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述经修饰的免疫细胞包含靶向hbv表面抗原的t细胞受体(tcr)和嵌合转换受体。
2.根据权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述tcr包含tcrα链可变区和tcrβ链可变区；其中，
3.如权利要求2所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述tcrα链可变区包含互补决定区αcdr1、αcdr2和αcdr3，且所述tcrβ链可变区包含互补决定区βcdr1、βcdr2和βcdr3，其中：
4.如权利要求2所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述tcrα链可变区包含与seqid no:7具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或
5.根据权利要求1所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述嵌合转换受体包含：
6.根据权利要求5所述的经修饰的免疫细胞，其特征在于，所述免疫抑制蛋白是包括pd1、ctla4，btla，tim3，tigit，tgfβ受体以及其他任意具有免疫抑制功能或与免疫抑制信号通路相关的蛋白中的任意一种蛋白及其组合，且所述免疫抑制蛋白的ecd序列可存在至少一个氨基酸突变；
7.根据权利要求5所述的经修饰的免疫细胞，所述ecd和所述icd通过跨膜区序列连接；优选地，所述跨膜区包含选自以下的蛋白的跨膜结构域：t细胞受体的α，β或δ链,cd28，cd3ε,cd45,cd4,cd5,cd8...
【专利技术属性】
技术研发人员：张柯，金涛，黄延周，卡琳·魏斯基兴，乌尔丽克·普罗策，
申请(专利权)人：新加坡星汉德生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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