【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于重组蛋白、单克隆抗体生产及生物，具体涉及一种cho细胞用化学成分限定培养基及其应用。
技术介绍
1、cho细胞(中国仓鼠卵巢细胞)在生物医学研究中具有重要作用。具有转染效率高、可悬浮培养应用于大规模复制扩增生产、复制扩增蛋白接近于天然蛋白、以及快速高密度生长等优势，被广泛应用于抗体、疫苗、基因重组蛋白类药物等生物技术产品包装生产等领域，目前，70％以上的动物细胞表达药物产品都是由cho细胞表达的。
2、cho细胞培养是重组蛋白及单克隆抗体产品规模化生产的重要技术，反应器贴壁培养、微载体培养、无血清悬浮培养均适应于cho细胞培养，其中无血清悬浮培养作业方式相对简单，易于大规模放大，是cho规模化放大的重要方式，要实现cho细胞悬浮培养必须先将贴壁培养cho细胞驯化为悬浮培养的cho细胞并寻找适合高密度无血清培养的培养基配方。
3、
4、目前市场上，cho细胞无血清培养基成分设计不是很高效，需在使用中另外添加人源或动物源的蛋白或蛋白水解物等物质，存在以下问题：
5、1、配方中含有非化学成分限定成分的蛋白、蛋白水解物等物质，使得最终产品的安全性不足；
6、2、非化学成分限定成分的培养基，其稳定性不足，在培养基规模化生产过程中，批间差难以受控；
7、3、含有的非化学成分限定物质对环境敏感，导致培养基产品运送及保存条件苛刻；
8、4、蛋白或蛋白水解物等物质影响最终产品分离纯化，在下游分离纯化过程中难以去除，对分离纯化要求高，纯化柱清洗困难，拉
9、5、全配方研磨无法有效保证产品品质，大多数产品含基础培养基及添加剂等多个组分，给产品运送保存及客户配液造成不便；
10、因此，急需一款适应于cho细胞培养、稳定的产物表达的化学成分限定的优质培养基来克服以上困难。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决上述现有技术中存在的问题而提供一种cho细胞用化学成分限定培养基及其应用，该培养基化学成分明确，无血清无蛋白，也不添加植物水解物，采用了一些已知结构与功能的小分子化合物作为替代，更有利于进行cho细胞培养代谢及进行蛋白表达，更加安全有效。
2、本专利技术的目的是这样实现的：
3、本专利技术cho细胞用化学成分限定培养基，包括以下组分：cho cdm27、lr3-igf-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物、亚油酸，其中所述cho cdm27购自上海东富龙生物试剂有限公司，货号为dp27，所述lr3-igf-1购自上海普欣生物技术有限公司，货号为105-03，所述泊洛沙姆188购自sigma，货号为p4894。
4、上述的cho细胞用化学成分限定培养基，其中，所述cho细胞用化学成分限定培养基为在cho cdm27中添加lr3-igf-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物和亚油酸获得。
5、上述的cho细胞用化学成分限定培养基，其中，每1l cho细胞用化学成分限定培养基中含有21000mg cho cdm27，0.02-0.06mg lr3-igf-1，5-50mg柠檬酸铁铵、70-130mg胱氨酸二钠盐、400-2000mg泊洛沙姆188、80-150mg酪氨酸二钠盐水合物和0.1-1.2mg亚油酸。
6、上述的cho细胞用化学成分限定培养基，其中，每1l cho细胞用化学成分限定培养基中含有21000mg cho cdm27，0.04mg lr3-igf-1，25mg柠檬酸铁铵、110mg胱氨酸二钠盐、1500mg泊洛沙姆188、120mg酪氨酸二钠盐水合物和0.5mg亚油酸。
7、本专利技术还提供了上述cho细胞用化学成分限定培养基用于cho细胞的悬浮培养、重组蛋白和单克隆抗体表达的用途。
8、上述用于cho细胞悬浮悬浮培养、重组蛋白和单克隆抗体表达的方法，包括步骤：将cho细胞置于如权利要求1-4任一项所述cho细胞用化学成分限定培养基中进行培养。
9、本专利技术添加了柠檬酸铁铵，铁是细胞存活的必需营养素，对于dna复制，线粒体功能和促红细胞生成至关重要，铁不仅参与营养代谢，还参与抗病毒免疫。胞内外的tyr浓度与细胞活率有较强的相关性，tyr浓度越低，细胞活率骤降发生得越早。酪氨酸是影响cho细胞培养中mab生产的关键氨基酸。低酪氨酸浓度会干扰蛋白质翻译，并将比生产率降低到几乎为零。酪氨酸耗竭后会加剧细胞自噬，从而影响细胞生长与产物的产量。
10、本专利技术配方中的酪氨酸二钠盐水合物，能够起到酪氨酸在培养基中相同的作用，且其在培养基中的溶解度更高。
11、脂肪酸的添加和配方中其他组分结合对于后期蛋白表达起到正向的作用。亚油酸通常与载体分子如牛血清白蛋白(bsa)或环糊精结合，用于细胞培养；亚油酸可增加pparα(过氧化物增殖激活受体)及其靶基因(如酰基辅酶a氧化酶)的细胞增殖和基因表达；对细胞有一定保护作用。
12、半胱氨酸是单克隆抗体生产中唯一含硫醇的氨基酸，是一种特殊的非必需氨基酸。半胱氨酸残基上巯基之间形成的二硫桥支持cho细胞结构蛋白和重组抗体产物的三级和四级结构的折叠。半胱氨酸的限制对cho细胞生长可能是致命的，且是不可逆的，并可能导致细胞活性在3天内下降到40％以下。
13、本专利技术配方中的胱氨酸二钠盐，能够起到半胱氨酸在培养基中相同的作用，且其在培养基中的溶解度更高。
14、本专利技术使用的lr3-igf-1是一种促有丝分裂多肽生长因子，它可以促进细胞由g1期进入s期，可在体外刺激包括肌肉、骨骼和软骨组织在内的各种细胞类型的增殖和存活，支持重组生物制药的大规模生产。
15、本专利技术与现有技术相比，具有以下有益效果：
16、1、本专利技术化学成分限定培养基性能优越，在倍增时间、最高密度及蛋白产量上都超越了国际知名同类产品；
17、2、本专利技术属于完全化学成分限定配方，不含蛋白或蛋白水解物等物质，产品安全性及稳定性高，适用于cho细胞的培养；
18、3、本专利技术使得规模化生产过程中批间差易于受控，且培养基性质稳定，运送及保存条件相对宽松；
19、4、本专利技术不含蛋白或蛋白水解物等物质，在生产过程中不引入非目的蛋白，简化分离纯化，有利于下游纯化过程的时间和成本控制；
20、5、本专利技术可全配方研磨生产，组分简单，无添加剂，客户端应用配液简便。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种CHO细胞用化学成分限定培养基，其特征在于：包括以下组分：CHO CDM27、LR3-IGF-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物、亚油酸，其中所述CHO CDM27购自上海东富龙生物试剂有限公司，货号为DP27，所述LR3-IGF-1购自上海普欣生物技术有限公司，货号为105-03，所述泊洛沙姆188购自Sigma，货号为P4894。
2.根据权利要求1所述的CHO细胞用化学成分限定培养基，其特征在于，所述CHO细胞用化学成分限定培养基为在CHO CDM27中添加LR3-IGF-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物和亚油酸获得。
3.根据权利要求1所述的CHO细胞用化学成分限定培养基，其特征在于，每1L CHO细胞用化学成分限定培养基中含有21000mg CHO CDM27，0.02-0.06mg LR3-IGF-1，5-50mg柠檬酸铁铵、70-130mg胱氨酸二钠盐、400-2000mg泊洛沙姆188、80-150mg酪氨酸二钠盐水合物和0.1-1.2mg亚油酸。
4.根据权
5.如权利要求1-4任一项所述CHO细胞用化学成分限定培养基用于CHO细胞的悬浮培养、重组蛋白和单克隆抗体表达的用途。
6.一种用于CHO细胞悬浮悬浮培养、重组蛋白和单克隆抗体表达的方法，包括步骤：将CHO细胞置于如权利要求1-4任一项所述CHO细胞用化学成分限定培养基中进行培养。
...【技术特征摘要】
1.一种cho细胞用化学成分限定培养基，其特征在于：包括以下组分：cho cdm27、lr3-igf-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物、亚油酸，其中所述cho cdm27购自上海东富龙生物试剂有限公司，货号为dp27，所述lr3-igf-1购自上海普欣生物技术有限公司，货号为105-03，所述泊洛沙姆188购自sigma，货号为p4894。
2.根据权利要求1所述的cho细胞用化学成分限定培养基，其特征在于，所述cho细胞用化学成分限定培养基为在cho cdm27中添加lr3-igf-1、柠檬酸铁铵、胱氨酸二钠盐、泊洛沙姆188、酪氨酸二钠盐水合物和亚油酸获得。
3.根据权利要求1所述的cho细胞用化学成分限定培养基，其特征在于，每1l cho细胞用化学成分限定培养基中含有21000mg cho cdm27，0.02-0.06mg ...
【专利技术属性】
技术研发人员：胥坤，王恒，刘桂伽，
申请(专利权)人：上海东富龙生物试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：
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