【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学领域，特别是涉及一种靶向抑制agrin基因的shrna及其应用。
技术介绍
1、心血管疾病是目前全球范围内死亡的主要原因，其中低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)为血脂的重要管理指标。众多循证医学证据表明，将ldl-c的水平控制在理想范围，有助于延缓血管动脉粥样硬化斑块形成，降低心梗、脑梗等严重心脑血管事件的发生风险。因此，研发更有效的降胆固醇药物，提高低密度脂蛋白胆固醇达标率，对降低心血管疾病的发生率和死亡率至关重要。
2、集聚蛋白(agrin)是一种硫酸肝素蛋白多糖，分子量约为400kda。作为一种细胞外基质蛋白，agrin在神经肌肉接头、心肌、肾脏、血管等组织中均有表达。研究报道，小鼠心脏中的agrin与心肌细胞受体肌营养不良蛋白聚糖(α-dystroglycan，dag)结合，激活hippo-yap通路促进心肌细胞增殖。研究发现agrin在刚出生小鼠心脏ecm内含量较高，而在7天时表达明显下调，从而心肌细胞再生修复能力减弱，在成年小鼠心梗模型中外源性注射agrin能够促进心肌细胞增殖和血管新生形成。此外，agrin在调控肿瘤微环境中的血管生成中扮演着关键的角色。agrin通过与其受体复合物结合，稳定了内皮细胞血管内皮生长因子受体2(vegfr2)，同时激活了细胞粘附激酶(fak)。vegfr2的稳定进一步激活了内皮细胞一氧化氮合酶(enos)-akt-erk1/2(细胞外信号调节激酶1/2)信号通路，从而在肿瘤组织中持续促进血管发芽和血管生成。总之，这些发现表明agrin在心血管系统中具有重
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种靶向抑制agrin基因的shrna及其应用，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术所述shrna能够有效沉默agrin基因，进而促进体内低密度脂蛋白受体的表达，最终达到治疗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的效果。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
3、本专利技术提供了一种靶向抑制agrin基因的shrna，所述shrna的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，反义链的核苷酸序列如seq id no.2所述。
4、本专利技术提供了一种载体，所述载体包括上述的shrna。
5、优选的，所述载体包括腺病毒载体。
6、本专利技术提供了一种重组菌，所述重组菌包括上述的载体。
7、优选的，所述重组菌的基础菌包括大肠杆菌。
8、本专利技术提供了上述的shrna、上述的载体或上述的重组菌在制备和/或筛选抗高胆固醇血症的药物中的应用。
9、优选的，所述抗高胆固醇血症是通过所述shrna抑制agrin基因表达，提高体内低密度脂蛋白受体的表达量。
10、优选的，所述药物包括核酸分子、脂类、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白质或腺相关病毒。
11、本专利技术提供了上述的shrna、上述的载体或上述的重组菌在制备和/或筛选抗高胆固醇血症引起的动脉粥样硬化的药物中的应用。
12、优选的，所述药物包括核酸分子、脂类、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白质或腺相关病毒。
13、本专利技术公开了以下技术效果：
14、本专利技术针对agrin基因设计得到了靶向抑制agrin基因的shrna，该shrna能够有效沉默agrin基因，促进低密度脂蛋白受体(ldlr)的表达，最终达到治疗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的效果。在本专利技术具体实施例中，通过连续12周高脂喂养apoe-/-小鼠来构建高脂小鼠模型，对小鼠模型注射腺相关病毒包装得到的腺相关病毒(aav-agrin-shrna)，达到了降低血清胆固醇以及缓解主动脉根部粥样硬化的作用，从而为制备或筛选抑制agrin基因表达的药物或制剂作为抗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的备选药物或制剂提供了理论依据。
15、药物筛选主要是针对未知药物，将药物作用于靶标基因，根据该药物是否可以抑制靶标基因的表达筛选得到抗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的药物；药物制备主要是以靶标基因为基础，有针对性地制备或构建抗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的药物以抑制靶标基因的表达。本专利技术以agrin基因沉默为作用靶标，制备或筛选抗高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的药物，对筛选或制备的药物在高胆固醇血症及其诱导的动脉粥样硬化的治疗具有重要意义。
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1.一种靶向抑制Agrin基因的shRNA，其特征在于，所述shRNA的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述。
2.一种载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1所述的shRNA。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体包括腺病毒载体。
4.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌包括权利要求2或3所述的载体。
5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的基础菌包括大肠杆菌。
6.权利要求1所述的shRNA、权利要求2或3所述的载体或权利要求4或5所述的重组菌在制备和/或筛选抗高胆固醇血症的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗高胆固醇血症是通过所述shRNA抑制Agrin基因表达，提高体内低密度脂蛋白受体的表达量。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物包括核酸分子、脂类、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白质或腺相关病毒。
9.权利要求1所述的shRNA、权利要求2或3所述的载
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物包括核酸分子、脂类、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白质或腺相关病毒。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向抑制agrin基因的shrna，其特征在于，所述shrna的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，反义链的核苷酸序列如seq id no.2所述。
2.一种载体，其特征在于，所述载体包括权利要求1所述的shrna。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体包括腺病毒载体。
4.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌包括权利要求2或3所述的载体。
5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的基础菌包括大肠杆菌。
6.权利要求1所述的shrna、权利要求2或3所述的载体或权利要求4或5所述的重组菌在制备和/或...
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