【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及环二肽制备领域，具体涉及一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法。
技术介绍
1、环二肽类化合物，又称2,5-二酮哌嗪，该类化合物是由两个氨基酸通过肽键缩合环合而形成的，是自然界中存在最小的环肽类化合物，一般由两个l-氨基酸形成相对稳定的六元环，具有一定的构象约束作用，同时拥有两个氢键给体和两个氢键受体，六个原子中四个位置可以进行拓展和立体构型控制，且对于蛋白质的水解作用是非常稳定的，诸多优势使其在药学、生物学、化学、农药学等领域的得到广泛关注。
2、作为肽类化合物中最有特点的一类化合物，环二肽以它稳定的六元环结构、分子多样性的优点，使其在作用受体的选择性和体内代谢的稳定性方面都强于其他肽类化合物，环二肽类化合物在药物、抗生素和农用生物除草剂的研制等方面具有巨大的开发潜力。
3、目前，许多天然环二肽类化合物从植物、动物、微生物中被分离鉴定，并发现具有广泛的生理活性，如抑菌活性、抗肿瘤活性、心血管系统活性、细胞间信号介导活性、保护神经元及改善脑功能活性、植物生长调节剂活性、脱瘾与解毒活性、钙激活中性蛋白酶抑制活性、钙拮抗活性等。
4、含有环二肽骨架的天然产物在自然界分布极为广泛，从自然界的植物、动物甚至到生活中常见的发酵产品中均广泛存在，许多微生物菌株都能胞外分泌环二肽类化合物，如解淀粉芽孢杆菌fzb42、burkholderia seminalis r456、海洋细菌pseudomonas putida、芽孢杆菌hz16等。
5、从微生物发酵液中提取环二肽，常规方法是用
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于：为解决上述
技术介绍
中提出的问题，本专利技术提供了一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法。
2、本专利技术为了实现上述目的具体采用以下技术方案：
3、一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，该方法包括以下步骤：
4、s1：从解淀粉芽孢杆菌w1发酵液除去菌体，得到上清液，除去菌体时采用离心法；
5、s2：对上述s1中得到的上清液进行吸附处理，并进行洗脱，洗脱后得到洗脱液；
6、s3：将上述s2中得到的洗脱液进行减压浓缩处理，得到粗提取物；
7、s4：将上述s3中得到的粗提取物悬于温水中，并进行萃取，将萃取液浓缩蒸干得到环二肽粗品；
8、s5：对上述s4中得到的环二肽粗品进行吸附处理，之后进行洗脱，并将得到的洗脱液根据tlc检测合并，减压浓缩蒸干得到环(l-丙氨酸-l-脯氨酸)二肽和环(甘氨酸-l-脯氨酸)二肽；
9、s6：将上述s5中得到的环(l-丙氨酸-l-脯氨酸)二肽溶解于甲醇，并进行冷藏，冷藏一段时间后收集针状晶体，得到纯的环(l-丙氨酸-l-脯氨酸)二肽；
10、s7：将上述s5中得到的环(甘氨酸-l-脯氨酸)二肽溶解于甲醇，并进行里冷藏，冷藏后收集柱状晶体，得到纯的环(l-丙氨酸-l-脯氨酸)二肽。
11、进一步地，所述s2中对上清液进行吸附处理时，采用大孔树脂柱(塔)对上清液进行吸附。
12、进一步地，所述s2中对吸附后的上清液进行洗脱时，先使用纯水洗脱，之后再利用90％乙醇洗脱，洗脱后收集90％乙醇洗脱液。
13、进一步地，所述s4中将粗提取物悬于温水中采用24℃-30℃的温水。
14、进一步地，所述s4中对粗提取物进行萃取时，采用正丁醇萃取，萃取四次。
15、进一步地，所述s5中对环二肽粗品进行吸附处理时，采用分子筛凝胶柱(塔)对环二肽粗品进行吸附。
16、进一步地，所述s5中对采用分子筛凝胶柱(塔)吸附后的环二肽粗品洗脱时，采用甲醇洗脱。
17、进一步地，所述s6中对溶解于甲醇的环(l-丙氨酸-l-脯氨酸)二肽进行冷藏时，冷藏温度5℃，冷藏48小时。
18、进一步地，所述s7中对溶解于甲醇的环(甘氨酸-l-脯氨酸)二肽进行冷藏时，冷藏温度5℃，冷藏48小时。
19、本专利技术的有益效果如下：
20、本专利技术，采用此方法提取纯环二肽，提取步骤较少，操作简单，所得到纯环二肽的纯度更高，该方法所得环二肽属于纯天然产物，对环境友好，成本低，方法简单，可实现工业化生产。
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1.一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S2中对上清液进行吸附处理时，采用大孔树脂柱(塔)对上清液进行吸附。
3.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S2中对吸附后的上清液进行洗脱时，先使用纯水洗脱，之后再利用90％乙醇洗脱，洗脱后收集90％乙醇洗脱液。
4.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S4中将粗提取物悬于温水中采用24℃-30℃的温水。
5.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S4中对粗提取物进行萃取时，采用正丁醇萃取，萃取四次。
6.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S5中对环二肽粗品进行吸附处理时，采用分子筛凝胶柱(塔)对环二肽粗品进行吸附。
7.根据权利要求6所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所
8.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S6中对溶解于甲醇的环(L-丙氨酸-L-脯氨酸)二肽进行冷藏时，冷藏温度5℃，冷藏48小时。
9.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述S7中对溶解于甲醇的环(甘氨酸-L-脯氨酸)二肽进行冷藏时，冷藏温度5℃，冷藏48小时。
...【技术特征摘要】
1.一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述s2中对上清液进行吸附处理时，采用大孔树脂柱(塔)对上清液进行吸附。
3.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述s2中对吸附后的上清液进行洗脱时，先使用纯水洗脱，之后再利用90％乙醇洗脱，洗脱后收集90％乙醇洗脱液。
4.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述s4中将粗提取物悬于温水中采用24℃-30℃的温水。
5.根据权利要求1所述的一种从微生物酵液中分离提纯环二肽的方法，其特征在于，所述s4中对粗提取物进行萃取时，采用正丁醇萃取...
【专利技术属性】
技术研发人员：李兴玉，赵金燕，李旻玥，高熹，钟匀，沈晓静，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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