【技术实现步骤摘要】
本申请属于医学生物检测，涉及食管癌的诊断标志物，具体涉及用于食管癌诊断的甲基化检测试剂及试剂盒。
技术介绍
1、食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，同时也是消化道最常见的恶性肿瘤。食管癌具有高度的侵袭性，往往导致不良预后。据统计，2018年全球范围内食管癌的新发病例约57万例，死亡病例约50万例，其发病率和死亡率在所有恶性肿瘤中分别位居第7位和第6位。根据肿瘤的病理分型，食管癌主要包括两种组织学亚型：食管鳞状细胞癌(escc)和食管腺癌(eac)。在中国，食管鳞状细胞癌是最常见的癌种，其约占食管癌病例总数的90％。中国是食管癌高发地区之一，拥有全球一半以上的食管癌患者。由于食管癌的症状在癌症发生的早期并不明显，且缺乏方便的筛查手段，大多数患者在确诊时已经发展为中晚期食管癌。据统计，我国食管癌患者的5年总体生存率为30％左右，中晚期食管癌患者的5年生存率低于10％，而早期食管癌患者的5年生存率则高达90％以上。因而提高食管癌患者或高风险人群的早期诊断率，对于提高患者的生活质量、延长生命周期具有重要意义。
2、目前，我国食管癌高发区的筛查策略是以内镜下碘染色为基础的活检组织病理诊断技术组合法，是食管癌诊断的金标准。但是，由于内镜检查操作难度比较大，对医师的技术水平要求较高，且患者对内镜检查存在一定的畏惧心理，其依从性较差。因此，在基因层面寻找食管癌发生发展和转移过程中高灵敏度、高特异性的生物标志物将有助于食管癌的早期无创诊断。
3、食管癌的发病机制涉及遗传学、表观遗传学和环境因素之间复杂的相互作用。dna甲基
技术实现思路
1、鉴于此，本申请提供了kcna3和otop2基因甲基化作为食管癌诊断标志物的应用，还提供了检测kcna3和otop2基因目标区域甲基化水平的试剂以及诊断试剂盒，所述试剂和试剂盒诊断食管癌的灵敏度高、特异性好，为食管癌和早期食管癌的无创诊断提供了新的思路。
2、本申请的第一方面，提供了检测基因中目标区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂或试剂盒中的应用，所述基因包括kcna3基因和otop2基因。
3、在一些实施方式中，所述目标区域包括属于kcna3基因的第一目标区域和属于otop2基因的第二目标区域：第一目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.1、seq idno.2、seq id no.3、seq id no.4所示的至少一者的全长或部分序列；和/或第二目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.6、seq id no.7、seq id no.12所示的至少一者的全长或部分序列。
4、进一步的，第一目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.8、seq id no.9、seqid no.10、seq id no.11所示的至少一者的全长或部分序列；和/或第二目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.5、seq id no.13、seq id no.14所示的至少一者的全长或部分序列。
5、更进一步的，第一目标区域包括核苷酸序列为seq id no.3所示的全长或部分序列；第二目标区域包括核苷酸序列为seq id no.12所示的全长或部分序列。
6、本申请的第二方面，提供了一种用于食管癌诊断的检测试剂，该检测试剂包括检测基因中目标区域甲基化水平的试剂，所述基因包括kcna3基因和otop2基因。
7、在本申请的一些实施方式中，所述检测试剂包括检测属于kcna3基因的第一目标区域和属于otop2基因的第二目标区域甲基化水平的试剂，
8、所述第一目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.1、seq id no.2、seq idno.3、seq id no.4所示的至少一者的全长或部分序列；
9、所述第二目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.6、seq id no.7、seq idno.12所示的至少一者的全长或部分序列。
10、在本申请的一些实施方式中，所述第一目标区域还包括选自核苷酸序列为seq idno.8、seq id no.9、seq id no.10、seq id no.11所示的至少一者的全长或部分序列；所述第二目标区域还包括选自核苷酸序列为seq id no.5、seq id no.13、seq id no.14所示的至少一者的全长或部分序列。
11、在本申请的一些实施方式中，所述检测试剂包括检测选自第一目标区域的核苷酸序列为seq id no.3所示和选自第二目标区域的核苷酸序列为seq id no.12所示的全长或部分序列的甲基化水平的试剂。
12、在本申请的一些实施方式中，所述试剂包括核酸分子，所述核酸分子包括检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对。
13、在本申请的一些实施方式中，所述试剂还包括与检测引物对对应的检测探针，所述检测探针上连接有荧光基团和荧光淬灭基团。
14、在本申请的一些实施方式中，荧光探针的5'端含有荧光报告基团如fam、hex、vic、cy5、rox、texsa red、joe及quasar 705中任意一种，3'端含有荧光淬灭基团，如mgb、bhq-1、bhq-2、bhq-3中的任意一种。
15、在本申请的一些实施方式中，所述的检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对如下表1所示：
16、表1检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对汇总
17、
18、在本申请的一些实施方式中，所述的检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对和探针的组合如下表2所示：
19、表2检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对和探针的组合
20、
21、
22、在本申请的一些实施方式中，所述试剂还包括检测内参基因的引物对和对应的检测探针。
23、在本申请的一些实施方式中，所述内参基因包括actb基因，所述actb基因对应seqid no.64和seq id no.65所示的检测引物对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.检测基因中目标区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述目标区域包括属于KCNA3基因的第一目标区域和属于OTOP2基因的第二目标区域。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一目标区域包括选自核苷酸序列为SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示的至少一者的全长或部分序列；和/或
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一目标区域包括核苷酸序列为SEQID NO.3所示的全长或部分序列；所述第二目标区域包括核苷酸序列为SEQ ID NO.12所示的全长或部分序列。
5.一种用于食管癌诊断的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括检测属于KCNA3基因的第一目标区域和属于OTOP2基因的第二目标区域甲基化水平的试剂。
6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于，所述第一目标区域包括选自核苷酸序列为SEQ I
8.根据权利要求6所述的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括检测选自第一目标区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示和选自第二目标区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.12所示的全长或部分序列的甲基化水平的试剂。
9.根据权利要求5～8任一项所述的检测试剂，其特征在于，所述试剂包括核酸分子，所述核酸分子包括检测所述第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对。
10.根据权利要求9所述的检测试剂，其特征在于，所述试剂还包括与检测引物对对应的检测探针，所述检测探针上连接有荧光基团和荧光淬灭基团。
11.根据权利要求9所述的检测试剂，其特征在于，检测所述第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对如下表所示，
12.根据权利要求10所述的检测试剂，其特征在于，所述的检测第一目标区域和第二目标区域甲基化水平的引物对和探针的组合如下表所示，
13.一种诊断食管癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求5～12任一项所述的检测试剂。
14.根据权利要求13所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取试剂、甲基化转化试剂、质控试剂、PCR反应试剂和测序试剂中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.检测基因中目标区域甲基化水平的试剂在制备食管癌诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述目标区域包括属于kcna3基因的第一目标区域和属于otop2基因的第二目标区域。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.8、seq id no.9、seq id no.10、seq id no.11所示的至少一者的全长或部分序列；和/或
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一目标区域包括核苷酸序列为seqid no.3所示的全长或部分序列；所述第二目标区域包括核苷酸序列为seq id no.12所示的全长或部分序列。
5.一种用于食管癌诊断的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括检测属于kcna3基因的第一目标区域和属于otop2基因的第二目标区域甲基化水平的试剂。
6.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于，
7.根据权利要求5所述的检测试剂，其特征在于，所述第一目标区域包括选自核苷酸序列为seq id no.8、seq id no.9、seq id no.10、seq id no.11所示的至少一者的全长或部分序列；和/或所述第二目标区域包括选自核苷酸序列为seq id...
【专利技术属性】
技术研发人员：周俊，董兰兰，张良禄，熊杨辉，郑义慧，赵巴丽，黄越，
申请(专利权)人：武汉艾米森生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。