【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种试剂盒，特别是涉及用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，本专利技术还涉及一种试剂盒的检测方法，特别涉及用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒的检测方法，属于试剂盒。
技术介绍
1、非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，我国将其列为一类动物疫病。
2、asf是养猪业的头号杀手，自2018年8月我国发生首例asf疫情以来，疫情的蔓延发展对我国生猪产业产生了非常大的影响，根据其在全球范围内的流行特点和我国养殖现状，asf预计将在我国长期存在，如何对asf进行科学防控是当前养猪业的重点和难点。
3、由于asf的发病临床症状和病理变化与其他猪传染病很相似，特别是猪丹毒丝菌病的症状最为相似，均有发热、出血、皮肤发红和脾脏肿大等症状，从临床表现和病理变化难以区分，需要依据实验室诊断才能定性。
4、聚合酶链式反应技术已广泛应用于asfv的诊断检测，oie《陆生动物诊断试验和疫苗手册》推荐的asfv检测方法主要是传统pcr和实时荧光pcr。
5、然而传统pcr需要进行凝胶电泳分析，操作繁琐，且灵敏度相对较低，为此设计一种用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒及检测方法来解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是为了提供用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒及检测方法，实时荧光pcr的灵敏度和试验速度较传统pcr大大提升，并且可以同时特异性检测多种病原，因此运用荧光pcr建立能够
2、本专利技术的目的可以通过采用如下技术方案达到：
3、用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，包括2×pro taq hs probepremi、浓度为75nm的asfv-f、浓度为75nm的asfv-r、浓度为100nm的asfv-probe；
4、浓度为75nm的er-f、浓度为75nm的er-r、浓度为100nm的er-probe。
5、优选的，所述asfv-f为上游引物且基因序列为ctgcataatggcgttaac；
6、其中asfv-f的识别标记为seq id no.1；
7、asfv-r为下游引物且基因序列为gctgatacgtgtccataa；
8、其中asfv-r的识别标记为seq id no.2。
9、优选的，asfv-f/r扩增得到的目的基因的序列为：ctgcataatggcgttaacaacatgtccgaacttgtgccaatctcggtgttgatgaggattttgatcggagatgttccaggtaggttttaatcctataaacatatattcaatgggccatttaagagcagacattagtttttcatcgtggtggttattgttggtgtgggtcacctgcgttttatggacacgtatcagc；
10、其中asfv-f/r的识别标记为seq id no.7。
11、优选的，er-f为上游引物且基因序列为cgcattagttagttggtaag；
12、其中er-f的识别标记为seq id no.4；
13、er-r为下游引物且基因序列为ttgccgaaaattccctac；
14、其中er-r的识别标记为ttgccgaaaattccctac。
15、优选的，er-f/r扩增得到的目的基因的序列为：cgcattagttagttggtaaggtaacggcttaccaagacgatgatgcgtagccgacctgagagggtgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaattttcggcaa；
16、其中er-f/r的识别标记为seq id no.8。
17、优选的，asfv-probe的基因序列为caccaacaataaccaccacgatgaa；
18、其中asfv-probe的识别标记为seq id no.3。
19、优选的，er-probe的基因序列为cgatgatgcgtagccgacct；
20、其中er-probe的识别标记为seq id no.6。
21、优选的，asfv-probe的5'端连接有6-fam，3'端连接有bhq1；
22、er-probe的5'端连接有vic，3'端连接有bhq2。
23、用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
24、选取样品核酸/阳性标准品/阴性标准品各2μl、引物探针混合物1μl、2×pro taqhs probe premi10μl以及depc水补足至20μl；
25、反应程序为：95℃30s；95℃5s，54℃30s，40个循环，在每一循环退火结束时收集荧光信号；
26、通过荧光定量pcr仪自带软件读取相应的ct值。
27、本专利技术的有益技术效果：
28、本专利技术提供的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒及检测方法，实时荧光pcr的灵敏度和试验速度较传统pcr大大提升，并且可以同时特异性检测多种病原，因此运用荧光pcr建立能够区分asfv和e.rhusiopathiae的精确鉴别检测方法，可为asfv的防控和净化提供新的技术保障。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：包括2×Pro Taq HSProbe Premi、浓度为75nM的ASFV-F、浓度为75nM的ASFV-R、浓度为100nM的ASFV-probe；
2.根据权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：所述ASFV-F为上游引物且基因序列为CTGCATAATGGCGTTAAC；
3.根据权利要求2所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：ASFV-F/R扩增得到的目的基因的序列为：CTGCATAATGGCGTTAACAACATGTCCGAACTTGTGCCAATCTCGGTGTTGATGAGGATTTTGATCGGAGATGTTCCAGGTAGGTTTTAATCCTATAAACATATATTCAATGGGCCATTTAAGAGCAGACATTAGTTTTTCATCGTGGTGGTTATTGTTGGTGTGGGTCACCTGCGTTTTATGGACACGTATCAGC；
4.根据权利要求3所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征
5.根据权利要求4所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：Er-F/R扩增得到的目的基因的序列为：CGCATTAGTTAGTTGGTAAGGTAACGGCTTACCAAGACGATGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATTTTCGGCAA；
6.根据权利要求5所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：ASFV-probe的基因序列为CACCAACAATAACCACCACGATGAA；
7.根据权利要求6所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：Er-probe的基因序列为CGATGATGCGTAGCCGACCT；
8.根据权利要求7所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：ASFV-probe的5'端连接有6-FAM，3'端连接有BHQ1；
9.根据权利要求8所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌试剂盒的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：包括2×pro taq hsprobe premi、浓度为75nm的asfv-f、浓度为75nm的asfv-r、浓度为100nm的asfv-probe；
2.根据权利要求1所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：所述asfv-f为上游引物且基因序列为ctgcataatggcgttaac；
3.根据权利要求2所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：asfv-f/r扩增得到的目的基因的序列为：ctgcataatggcgttaacaacatgtccgaacttgtgccaatctcggtgttgatgaggattttgatcggagatgttccaggtaggttttaatcctataaacatatattcaatgggccatttaagagcagacattagtttttcatcgtggtggttattgttggtgtgggtcacctgcgttttatggacacgtatcagc；
4.根据权利要求3所述的用于检测非洲猪瘟病毒和猪丹毒丝菌的试剂盒，其特征在于：er-f为上游引物且基因序列为cgcatta...
【专利技术属性】
技术研发人员：贾春玲，罗胜军，翟颀，孙铭飞，吕殿红，温肖会，周秀蓉，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：
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