本发明专利技术公开了一种基于兔单克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫吸附试剂盒。它包括盒体和设在盒体内的９６孔酶标板以及试剂，９６孔酶标板内包被有氯霉素包被抗原，盒内的试剂如下：（１）洗涤浓缩液；（２）稀释浓缩液；（３）氯霉素标准溶液；（４）氯霉素抗体；（５）辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；（６）底物稀释液；（７）底物；（８）底物显色液；（９）反应终止液。本发明专利技术适用于牛奶、猪尿等样本中氯霉素残留的检测。该试剂盒能同时检测大批量样本，方便又快速，对现场监控痕量分析具有十分重要的现实意义；同时使检测成本大大降低，具有潜在的经济价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及试剂盒，尤其涉及一种基于兔单克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫 吸附试剂盒。
技术介绍
氯霉素(ChloramphenicoLCAP)，化学名D-苏式_(-)-Ν--2，2-二氯乙酰胺。其属于广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、阴性菌均有 良好的抑制作用，因而广泛应用于畜牧、水产养殖业。但在动物性食品内残留的CAP对人体 的健康具有潜在的危害。为此，世界上许多国家均制定了氯霉素的最高残留标准，严格限制 其使用。为了适应加入WTO后的国际竞争与挑战，必须建立起一种具有自主知识产权的快 速检测方法。因此开发出一种简单快速，适用于氯霉素残留现场监控的痕量分析具有十分 重要的现实意义。目前对氯霉素残留检测的主要方法有色谱法、微生物法等。其中HPLC法、气相色 谱以及液相色谱-串联质谱等方法虽然具有灵敏、准确等特点，但该类方法前处理较复杂， 所需仪器昂贵，而且需要有熟练的技术人员，难以在基层工作中普及推广。微生物检测方法 操作简单，费用低，但耗时长，敏感性和专一性低，易漏检，也会出现假阳性，引起误判，一般 用于定性检测简便。而免疫分析法具有一定的灵敏度和特异性，而且不需要昂贵的仪器设 备，为氯霉素提供了一个简单实用的分析检测途径。适用于大量样本的快速检测，ELISA检 测方法势必成为检测氯霉素残留的发展趋势。兔单克隆抗体较常规的鼠单克隆抗体具有更多优点。首先，兔子相比于小鼠能识 别更多免疫抗原的表位。其次，由于兔脾脏较大，可以进行更多的融合实验，使得高通量筛 选融合细胞成为可能。本试剂盒应用杂交瘤技术及重组抗体技术得到氯霉素兔单克隆抗 体，开发出基于兔单克隆抗体的氯霉素间接酶联免疫试剂盒，国内外均未见有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种具有高特异性、高灵敏度的基于 兔单克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫吸附试剂盒。基于兔单克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫吸附试剂盒包括盒体和设在盒体 内的96孔酶标板以及试剂，96孔酶标板内包被有氯霉素包被抗原，盒内的试剂如下(1)洗涤浓缩液；(2)稀释浓缩液；(3)氯霉素标准溶液；(4)氯霉素抗体； (5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；(6)底物稀释液；(7)底物；(8)底物显色液；(9)反应终止液。所述的氯霉素包被抗原为氯霉素与卵清蛋白的偶联产物，氯霉素包被抗原能与抗 氯霉素抗体特异性结合。所述的洗涤浓缩液的组成为氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、磷酸氢二钠 3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g、吐温200. 5 Iml和去离子水。所述的稀释浓缩液的组成为 氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、磷酸氢二钠3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g和去离子 水。所述的氯霉素抗体是兔单克隆抗体，是以兔子为免疫动物，经过杂交瘤技术以及重组抗 体技术最终得到的。所述的底物显色液为3，3，5，5-四甲基联苯胺配制液。所述的底物稀 释液为PH5. 0柠檬酸缓冲液，pH5. 0柠檬酸缓冲液的组成为3 6g柠檬酸、6 9g磷酸氢 二钠和去离子水。所述的氯霉素标准溶液的浓度为10ng/mL、5ng/mL、2. 5ng/mL、l. 25ng/ mL、0.625ng/mL或0.3125ng/mL。所述的底物为过氧化氢或过氧化脲。所述的反应终止液 为2M硫酸或盐酸。本专利技术在氯霉素检测中，IC5tl值为1.06ng/mL，抑制率曲线线性拟合方程y = 39. 705x+48. 946，检测范围在0. 19-6. 05ng/mL之间，最低检测限是0. 10ng/mL。试剂盒中抗 氯霉素抗体具有较高的特异性，除了和琥珀氯霉素酸钠，甲砜霉素，氟甲砜霉素交叉反应率 分别为2. 09%, 18. 10%,12. 45%外，和其他喹诺酮类以及磺胺类药物均无交叉反应。本专利技术适用于牛奶、蜂蜜等样品中氯霉素残留的检测。该试剂盒能同时检测大批 量样本，方便又快速，对现场监控痕量分析具有十分重要的现实意义；同时使检测成本大大 降低，具有潜在的经济价值。附图说明图1是以PBS缓冲液为基质的氯霉素单抗间接竞争ELISA标准曲线；图2是以牛奶为基质的氯霉素单抗间接竞争ELISA标准曲线。具体的实施方式本专利技术基于兔单克隆抗体开发氯霉素残留分析的间接酶联免疫吸附试剂盒，该试 剂盒基于免疫反应和酶促反应，能够检测牛奶及蜂蜜等样本中的氯霉素的残留。基于兔单 克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫吸附试剂盒包括盒体和设在盒体内的96孔酶标板以 及试剂。96孔酶标板内包被有氯霉素包被抗原，盒内的试剂如下(1)洗涤浓缩液；(2)稀 释浓缩液；(3)氯霉素标准溶液；(4)氯霉素抗体；(5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；(6) 底物稀释液；(7)底物；(8)底物显色液；(9)反应终止液。所述的氯霉素包被抗原为氯霉素与卵清蛋白的偶联产物，氯霉素包被抗原能与抗 氯霉素抗体特异性结合；所述的洗涤浓缩液的组成为氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、磷酸氢二钠3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g、吐温200. 5 Iml和去离子水。所述的稀释 浓缩液的组成为氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、磷酸氢二钠3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g和去离子水。所述的氯霉素抗体是兔单克隆抗体，是以兔子为免疫动物，经过杂交瘤 技术以及重组抗体技术最终得到的。所述的底物显色液为3，3，5，5-四甲基联苯胺配制液。 所述的底物稀释液为PH5. O柠檬酸缓冲液，pH5. O柠檬酸缓冲液的组成为3 6g柠檬酸、 6 9g磷酸氢二钠和去离子水。所述的氯霉素标准溶液的浓度为10ng/mL、5ng/mL、2. 5ng/mL、l. 25ng/mL、0. 625ng/mL或0. 3125ng/mL。所述的底物为过氧化氢或过氧化脲。所述的 反应终止液为2M硫酸或盐酸。盒内的试剂设置(1)洗涤浓缩液1瓶，25 35mL/瓶，内含有氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、磷酸氢二钠3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g、吐温200. 5 1ml，为正常使用浓度的30 40倍；(2)稀释浓缩液1瓶，25 35mL/瓶，内含有氯化钠7 9g、磷酸二氢钾0. 1 0. 3g、 磷酸氢二钠3 5g、氯化钾0. 1 0. 3g，为正常使用浓度的30 40倍；(3)氯霉素标准溶 液(10ng/mL、5ng/mL、lng/mL、0. 5ng/mL、0. lng/mL、0. 05ng/mL)各 1 瓶，ImL/瓶；(4)氯霉素 抗体1管，25 50 μ 1/管，使用时2000 3000倍稀释；(5)辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体 (酶标二抗)1管，50-100 μ 1/管，使用时1000 2000倍稀释；(6)底物稀释液1瓶，25 35mL/瓶，内含3 6g柠檬酸，6 9g磷酸氢二钠，为正常使用量的30-40倍；(7)底物1 瓶，1 5mL/瓶，其为过氧化氢或过氧化脲；(8)底物显色液为四甲基联苯胺配制液1瓶， 2 5mL/瓶，配制方法为IOmgTMB溶于2mLDMS0中；(9)反应终止液1瓶，15 20mL/瓶， 其为2mol/L硫酸或盐酸。实施例1 氯霉素免疫抗原及包被抗原的合成具体操作步骤如下取CAP小分子80mg，溶于1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于兔单克隆抗体的氯霉素残留分析酶联免疫吸附试剂盒，其特征在于包括盒体和设在盒体内的９６孔酶标板以及试剂，９６孔酶标板内包被有氯霉素包被抗原，盒内的试剂如下：（１）洗涤浓缩液；（２）稀释浓缩液；（３）氯霉素标准溶液；（４）氯霉素抗体；（５）辣根过氧化物酶标羊抗兔抗体；（６）底物稀释液；（７）底物；（８）底物显色液；（９）反应终止液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓冬，陆蕾，刘娜，倪庚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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