【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、前庭功能障碍是重大公共健康问题，其对生活质量有深远影响。大约35％的40岁及以上的美国成年人表现出平衡障碍，并且这个比例随年龄增长而显著增加，导致日常活动中断、情绪和认知下降以及老年人跌倒的盛行率增加。前庭功能障碍通常是获得性的，并且具有多种病因，包括疾病或感染、头部创伤、耳毒性药物和衰老。前庭功能障碍病因中的常见因素是内耳前庭毛细胞损伤。因此，旨在恢复毛细胞功能的疗法将有益于患有前庭功能障碍的患者。已知前庭支持细胞在损伤后自发分化为毛细胞，并因此可用作适于恢复毛细胞功能的治疗靶标。
技术实现思路
1、本专利技术提供了促进目标基因(例如促进或改进毛细胞或支持细胞功能、再生、成熟、增殖或存活的基因)在特定细胞类型中的表达的组合物和方法。本文所述的组合物和方法涉及可用于诱导转基因在内耳前庭支持细胞(vsc)中的表达的溶质载体家族6成员14(slc6a14)启动子序列。本文所述的slc6a14启动子序列可以可操作地连接至转基因，并且可施用于患者以治疗前庭功能障碍(例如眩晕、头晕、失衡、双侧前庭病、双侧前庭功能低下、振动幻视或平衡障碍)。本文所述的slc6a14启动子序列通过驱动可操作地连接的转基因在前庭支持细胞中的高表达(在其他内耳细胞类型如毛细胞中的表达要低得多)而显示出高的细胞类型特异性。
2、在第一方面，本专利技术提供了核酸载体，其包含与seq id no:1具有至少85％序列同一性(例如85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、9
3、在一些实施方案中，多核苷酸可操作地连接至转基因。在一些实施方案中，转基因是异源转基因。在一些实施方案中，转基因编码蛋白质(例如治疗蛋白或报告蛋白)、短发夹rna(shrna)、反义寡核苷酸(aso)、核酸酶(例如crispr相关蛋白9(cas9)、转录激活因子样效应物核酸酶(talen)、锌指核酸酶(zfn)或向导rna(grna))，或微小rna。在一些实施方案中，转基因编码蛋白质。
4、在一些实施方案中，多核苷酸引导蛋白质(例如治疗蛋白或报告蛋白)、shrna、aso、核酸酶或微小rna在哺乳动物vsc中的前庭支持细胞(vsc)特异性表达。在一些实施方案中，vsc是人类vsc。
5、在一些实施方案中，由可操作地连接至多核苷酸的转基因编码的蛋白质是婆罗双树样转录因子2(sall2)、钙调蛋白结合转录激活因子1(camta1)、具有yrpw基序2的hes相关家族bhlh转录因子(hey2)、gata结合蛋白2(gata2)、具有yrpw基序1的hes相关家族bhlh转录因子(hey1)、神经酰胺合酶2(lass2)、sry盒10(sox10)、gata结合蛋白3(gata3)、cut样同源异形盒1(cux1)、核受体亚家族2f组成员(nr2f1)、hes相关家族bhlh转录因子(hes1)、rar相关孤儿受体b(rorb)、jun原癌基因ap-1转录因子亚基(jun)、锌指蛋白667(zfp667)、lim同源异形盒3(lhx3)、无义螺旋-环-螺旋1(nhlh1)、max二聚化蛋白4(mxd4)、miz-1型锌指(zmiz1)、髓磷脂转录因子1(myt1)、信号转导子和转录激活因子3(stat3)、barh样同源异形盒1(barhl1)、胸腺细胞选择相关的高迁移率族盒(tox)、prospero同源异形盒1(prox1)、核因子ia(nfia)、甲状腺激素受体β(thrb)、mycl原癌基因bhlh转录因子(mycl1)、赖氨酸去甲基酶5a(kdm5a)、camp反应元件结合蛋白3样4(creb3i4)、ets变体1(etv1)、父系表达的3(peg3)、btb结构域和cnc同源物2(bach2)、isl lim同源异形盒1(isl1)、锌指和含btb结构域的38(zbtb38)、肢芽和心脏发育(lbh)、tubby二分转录因子(tub)、泛素c(hmg20)、re1沉默转录因子(rest)、锌指蛋白827(zfp827)、af4/fmr2家族成员3(aff3)、pbx/有节的1同源异形盒2(pknox2)、富含at的相互作用结构域3b(arid3b)、mlx相互作用蛋白(mlxip)、锌指蛋白(zfp532)、ikaros家族锌指2(ikzf2)、婆罗双树样转录因子1(sall1)、six同源异形盒2(six2)、婆罗双树样转录因子3(sall3)、lin-28同源物b(lin28b)、调节因子x7(rfx7)、脑源性神经营养因子(bdnf)、生长因子非依赖性1转录阻遏子(gfi1)、pou4类同源异形盒3(pou4f3)、myc原癌基因bhlh转录因子(myc)、β-连环蛋白(ctnnb1)、sry盒2(sox2)、sry盒4(sox4)、sry盒11(sox11)、tea结构域转录因子2(tead2)、无调bhlh转录因子1(atoh1)或atoh1变体。
6、在一些实施方案中，由可操作地连接至多核苷酸的转基因编码的蛋白质是atoh1或atoh1变体。在一些实施方案中，atoh1变体具有相对于seq id no:4的一个或多个选自由以下组成的组的氨基酸取代：s328a、s331a、s334a、s328a/s331a、s328a/s334a、s331a/s334a和s328a/s331a/s334。在一些实施方案中，蛋白质是atoh1(例如人类atoh1)。在一些实施方案中，atoh1蛋白包含seq id no:4的序列或其具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个)保守氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，atoh1蛋白包含seq id no:6的序列或其具有一个或多个(例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个或更多个)保守氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，atoh1蛋白变体中不超过10％(10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更少)的氨基酸是保守氨基酸取代。在一些实施方案中，atoh1蛋白具有seq id no:4的序列。在一些实施方案中，atoh1蛋白是由seq id no:5的序列编码。在一些实施方案中，atoh1蛋白具有seq id no:6的序列。在一些实施方案中，atoh1蛋白是由seq id no:7的序列编码。
7、在一些实施方案中，核酸载体还包括反向末端重复序列(itr)。在核酸载体包括可操作地连接至转基因的本专利技术多核苷酸的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸载体，所述核酸载体包含溶质载体家族6成员14(SLC6A14)启动子，其包含与SEQ ID NO:1具有至少85％序列同一性的多核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的核酸载体，其中所述SLC6A14启动子具有SEQ ID NO:1的序列。
3.如权利要求1或2所述的核酸载体，其中所述SLC6A14启动子可操作地连接至转基因。
4.如权利要求3所述的核酸载体，其中所述转基因是异源转基因。
5.如权利要求3或4所述的核酸载体，其中所述转基因编码蛋白质、短发夹RNA(shRNA)、反义寡核苷酸(ASO)、核酸酶，或微小RNA。
6.如权利要求5所述的核酸载体，其中所述转基因编码蛋白质。
7.如权利要求6所述的核酸载体，其中所述蛋白质是无调BHLH转录因子1(Atoh1)、婆罗双树样转录因子2(Sall2)、钙调蛋白结合转录激活因子1(Camta1)、具有YRPW基序2的Hes相关家族BHLH转录因子(Hey2)、Gata结合蛋白2(Gata2)、具有YRPW基序1的Hes相关家族BHLH转录因子(Hey1
8.如权利要求7所述的核酸载体，其中所述蛋白质是Atoh1。
9.如权利要求3-8中任一项所述的核酸载体，其中所述核酸载体另外包含所述SLC6A14启动子的5'的第一反向末端重复；和所述转基因的3'并且以5'至3'顺序，任选的转录后调节元件、多聚腺苷酸化信号和第二反向末端重复。
10.如权利要求9所述的核酸载体，所述核酸载体包含SEQ ID NO:10的核苷酸219-3831、SEQ ID NO:10的核苷酸219-3831的5'的第一反向末端重复，其中所述5'反向末端重复与SEQ ID NO:10的核苷酸1-130具有至少80％序列同一性；和SEQ ID NO:10的核苷酸219-3831的3'的第二反向末端重复，其中所述3'反向末端重复与SEQ ID NO:10的核苷酸3919-4048具有至少80％序列同一性。
11.如权利要求9所述的核酸载体，所述核酸载体包含SEQ ID NO:11的核苷酸219-3822、SEQ ID NO:11的核苷酸219-3822的5'的第一反向末端重复，其中所述5'反向末端重复与SEQ ID NO:11的核苷酸1-130具有至少80％序列同一性；和SEQ ID NO:11的核苷酸219-3822的3'的第二反向末端重复...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种核酸载体，所述核酸载体包含溶质载体家族6成员14(slc6a14)启动子，其包含与seq id no:1具有至少85％序列同一性的多核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的核酸载体，其中所述slc6a14启动子具有seq id no:1的序列。
3.如权利要求1或2所述的核酸载体，其中所述slc6a14启动子可操作地连接至转基因。
4.如权利要求3所述的核酸载体，其中所述转基因是异源转基因。
5.如权利要求3或4所述的核酸载体，其中所述转基因编码蛋白质、短发夹rna(shrna)、反义寡核苷酸(aso)、核酸酶，或微小rna。
6.如权利要求5所述的核酸载体，其中所述转基因编码蛋白质。
7.如权利要求6所述的核酸载体，其中所述蛋白质是无调bhlh转录因子1(atoh1)、婆罗双树样转录因子2(sall2)、钙调蛋白结合转录激活因子1(camta1)、具有yrpw基序2的hes相关家族bhlh转录因子(hey2)、gata结合蛋白2(gata2)、具有yrpw基序1的hes相关家族bhlh转录因子(hey1)、神经酰胺合酶2(lass2)、sry盒10(sox10)、gata结合蛋白3(gata3)、cut样同源异形盒1(cux1)、核受体亚家族2f组成员(nr2f1)、hes相关家族bhlh转录因子(hes1)、rar相关孤儿受体b(rorb)、jun原癌基因ap-1转录因子亚基(jun)、锌指蛋白667(zfp667)、lim同源异形盒3(lhx3)、无义螺旋-环-螺旋1(nhlh1)、max二聚化蛋白4(mxd4)、miz-1型锌指(zmiz1)、髓磷脂转录因子1(myt1)、信号转导子和转录激活因子3(stat3)、barh样同源异形盒1(barhl1)、胸腺细胞选择相关的高迁移率族盒(tox)、prospero同源异形盒1(prox1)、核因子i a(nfia)、甲状腺激素受体β(thrb)、mycl原癌基因bhlh转录因子(mycl1)、赖氨酸去甲基酶5a(kdm5a)、camp反应元件结合蛋白3样4(creb3i4)、ets变体1(etv1)、父系表达的3(peg3)、btb结构域和cnc同源物2(bach2)、isllim同源异形盒1(isl1)、锌指和含btb结构域的38(zbtb38)、肢芽和心脏发育(lbh)、tubby二分转录因子(tub)、泛素c(hmg20)、re1沉默转录因子(rest)、锌指蛋白827(zfp827)、af4/fmr2家族成员3(aff3)、pbx/有节的1同源异形盒2(pknox2)、富含at的相互作用结构域3b(arid3b)、mlx相互作用蛋白(mlxip)、锌指蛋白(zfp532)、ikaros家族锌指2(ikzf2)、婆罗双树样转录因子1(sall1)、six同源异形盒2(six2)、婆罗双树样转录因子3(sall3)、lin-28同源物b(lin28b)、调节因子x7(rfx7)、脑源性神经营养因子(bdnf)、生长因子非依赖性1转录阻遏子(gfi1)、pou4类同源异形盒3(pou4f3...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·伯恩斯，T·吉布森，G·普雷格尼格，K·索，
申请(专利权)人：分贝治疗公司，
类型：发明
国别省市：
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