【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、通过fms相关酪氨酸激酶3(flt3)受体的信号传导支持造血祖细胞和树突细胞(dc)的存活、增殖和分化(1，2)。人dc是将抗原呈递给人t细胞所必需的，并且是发展强大的人免疫应答所必需的(4)。成熟的人dc还产生白细胞介素15和支持自然杀伤(nk)细胞和人先天免疫系统的其他成分的发育的其他因子(5)。
技术实现思路
1、在一些实施方式中，本文提供了免疫缺陷型nod.cg-prkdcscid il2rgtm1wjl/szj(nsgtm)小鼠(“nod scid gamma”小鼠)，其包含编码人flt3l的核酸(例如，包含人flt3l转基因)和失活的小鼠flt3等位基因。尽管nsgtm小鼠支持人造血干细胞(hsc)移植，但它表现出人hsc向树突细胞(dc)群体的发育受损(3)。为了提供支持人hsc发育成dc群体的小鼠模型，产生了表达人flt3l(nsgtm-tg(hu-flt3l))的转基因nsgtm小鼠。然而，预料不到的是，与nsgtm对照相比，nsgtm-tg(hu-flt3l)小鼠中人hsc的移植显著降低。为了理解在nsgtm-tg(hu-flt3l)小鼠中观察到的表型，flt3l的小鼠内源性受体–flt3–被敲除。令人惊讶的是，用这种转基因品系进行的人hsc移植，在本文中称为nsgtmflt3null-tg(hu-flt3l)，其导致(1)人cd3+t细胞和人cd33+骨髓细胞的百分比显著增加，(2)人cd123+浆细胞样树突细胞、cd56+人自然杀伤(nk)细
2、因此，本公开的一些方面提供了包含编码人flt3l的核酸和失活的小鼠flt3等位基因(nsgtmflt3null-tg(hu-flt3l))的nsgtm小鼠。这种小鼠模型支持将hsc发育成人先天免疫系统的许多不同细胞类型，包括树突细胞。
3、在一些实施方式中，小鼠包含使小鼠flt3等位基因失活的基因组修饰。在一些实施方式中，基因组修饰在选自编码区、非编码区和调控区的小鼠flt3等位基因的至少一个区域。在一些实施方式中，基因组修饰在小鼠flt3等位基因的至少一个编码区。例如，基因组修饰可以在外显子6、外显子7和/或外显子8中。在一些实施方式中，基因组修饰选自基因组缺失、基因组插入、基因组置换及其组合。例如，基因组修饰可以是基因组缺失。小鼠flt3等位基因可包含例如外显子6、外显子7和外显子8中核苷酸序列的基因组缺失。
4、在一些实施方式中，seq id no:5的核酸序列已从小鼠flt3等位基因中缺失。
5、在一些实施方式中，修饰的小鼠flt3等位基因包含seq id no:6的核酸序列。
6、在一些实施方式中，编码人flt3l的核酸包含人flt3l转基因。在一些实施方式中，人flt3l转基因包含seq id no:7的核酸序列。在一些实施方式中，小鼠表达人flt3l。人flt3l可以例如以至少10,000pg/ml的水平表达。在一些实施方式中，人flt3l以10,000pg/ml至30,000pg/ml的水平表达。例如，人flt3l可以以15,000+/-1000pg/ml至17,000+/-100pg/ml的水平表达。
7、在一些实施方式中，所述小鼠表达小鼠flt3l。在一些实施方式中，小鼠flt3l以至少2,000pg/ml的水平表达。例如，小鼠flt3l可以以5,000pg/ml至10,000pg/ml的水平表达。在一些实施方式中，小鼠flt3l以6,000pg/ml至8,000ml的水平表达。
8、在一些实施方式中，所述小鼠不表达可检测水平的小鼠flt3。在一些实施方式中，由所述小鼠表达的小鼠flt3的可检测水平低于1,000pg/ml。。
9、在一些实施方式中，小鼠缺乏可检测数量的cd135+多能祖细胞。
10、在一些实施方式中，小鼠进一步包含人cd34+造血干细胞。在一些实施方式中，人cd34+造血干细胞来自人脐带血、骨髓或动员的外周血。
11、在一些实施方式中，小鼠包含人cd45+细胞群。在一些实施方式中，人cd45+细胞群包含人cd45+/cd3+t细胞和/或人cd45+/cd33+骨髓细胞。
12、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述人cd45+细胞群包含增加的百分比的人cd45+/cd3+t细胞。例如，所述小鼠中人cd45+/cd3+t细胞的百分比增加至少25％、至少50％或至少100％。
13、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述人cd45+细胞群包含增加的百分比的人cd45+/cd33+骨髓细胞。例如，所述小鼠中人cd45+/cd33+骨髓细胞的百分比可增加至少25％、至少50％或至少100％。
14、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述小鼠包含增加的百分比的人cd123+浆细胞样树突细胞。例如，所述小鼠中人cd123+浆细胞样树突细胞的百分比可增加至少25％、至少50％或至少100％。
15、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述小鼠包含增加的百分比的人cd56+自然杀伤细胞。例如，所述小鼠中人cd56+自然杀伤细胞的百分比可增加至少25％、至少50％或至少100％。
16、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述小鼠包含增加的百分比的人cd14+单核巨噬细胞。例如，所述小鼠中人cd14+单核巨噬细胞的百分比可增加至少25％、至少50％或至少100％。
17、在一些实施方式中，相对于nod scid gamma对照小鼠或nod scid gamma-hu-flt3l对照小鼠，所述小鼠包含增加的百分比的人cd11c+hla-dr+髓样树突细胞。所述小鼠中人cd11c+hla-dr+髓样树突细胞的百分比增加至少25％、至少50％或至少100％。
18、在一些实施方式中，所述小鼠在小鼠的小肠中表现出人cd45+细胞的粘膜移植。
19、本公开的其他方面提供了一种方法，对权利要求1-23中任一项的小鼠进行亚致死辐照，并用人cd34+造血干细胞注射所述小鼠。
20、在一些实施方式中，所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NOD scid gamma)小鼠，其包含
2.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠包含使所述小鼠Flt3等位基因失活的基因组修饰。
3.权利要求2所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠Flt3等位基因的选自编码区、非编码区和调控区的至少一个区域。
4.权利要求3所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠Flt3等位基因的至少一个编码区。
5.权利要求4所述的小鼠，其中所述基因组修饰在外显子6、外显子7和/或外显子8中。
6.权利要求2-5中任一项所述的小鼠，其中所述基因组修饰选自基因组缺失、基因组插入、基因组置换及其组合。
7.权利要求6所述的小鼠，其中所述基因组修饰是基因组缺失。
8.权利要求7所述的小鼠，其中所述小鼠Flt3等位基因包含外显子6、外显子7和外显子8中核苷酸序列的基因组缺失。
9.权利要求8所述的小鼠，其中SEQ ID NO:5的核酸序列已从所述小鼠Flt3等位基因中缺失。
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...【技术特征摘要】
1.一种nod.cg-prkdcscid il2rgtm1wjl/szj(nod scid gamma)小鼠，其包含
2.权利要求1所述的小鼠，其中所述小鼠包含使所述小鼠flt3等位基因失活的基因组修饰。
3.权利要求2所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠flt3等位基因的选自编码区、非编码区和调控区的至少一个区域。
4.权利要求3所述的小鼠，其中所述基因组修饰位于所述小鼠flt3等位基因的至少一个编码区。
5.权利要求4所述的小鼠，其中所述基因组修饰在外显子6、外显子7和/或外显子8中...
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