【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种锗酸锌长余辉纳米探针检测试纸条的制备方法及其应用，属于免疫层析检测。
技术介绍
1、基于信号标签的免疫层析试纸是一种便捷的测量方式，其主要方法为胶体金法，其主要基于颜色观察，大多数情况下只能满足定性检测。基于荧光标签的免疫层析试纸比胶体金具有更高的灵敏度，目前常用的荧光标签主要有上转换、稀土掺杂微球和量子点等，但是普遍存在背景荧光干扰，且往往由于背景干扰导致灵敏度降低，难以用于低含量生物分析物的检测。因此，发展无背景干扰的高灵敏的定量检测的免疫层析技术已成为一个有吸引力的研究方向。
2、肝素结合蛋白(hbp)是一种由中性粒细胞产生的功能性蛋白质。它被认为是炎症反应程度和感染严重程度的指标之一。尤其在严重感染、脓毒症和器官功能衰竭等情况下，肝素结合蛋白的水平显著升高。通过监测肝素结合蛋白的变化，可以评估炎症反应的活跃程度，并辅助判断感染的严重性和预后，鉴于其广泛的应用场景，该结合蛋白的检测需求量极大。针对hbp检测问题，目前常用的方法为特定蛋白仪+hbp试剂(速率散射比浊法)及hbp生化试剂(免疫比浊法)，二者均需要投入专用全自动生化仪，导致检测成本偏高，不利于进行大规模推广。
3、基于以上背景，如何开发无背景荧光干扰、高灵敏度的定量检测方法，同时有效降低设备投入，成为亟需解决的问题之一。
技术实现思路
1、为了解决上述
技术介绍
中荧光干扰、测试灵敏度不足的技术问题，本专利技术提供一种长余辉纳米探针双模式免疫层析试纸。
2、实现本专
3、一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，所述试纸条包括底板，所述底板上设置有依次相连的样品垫、检测膜和吸水垫；
4、所述样品垫上含有锗酸锌长余辉纳米探针标记的第一生物标记物和锗酸锌长余辉纳米探针标记的质控物；
5、所述锗酸锌长余辉纳米探针为锰掺杂的锗酸锌纳米材料；
6、所述检测膜上设置有检测线和质控线，所述检测线上包被有第二生物标记物，所述质控线上包被有质控标记物；
7、所述第一生物标记物和第二生物标记物能与待测样中品中目标物特异性结合，且结合位点不同；
8、所述质控物和质控标记物特异性结合。
9、所述锌、锗和锰的摩尔比为(1～2):(1～2):(0.001～0.01)，其中(1-2)中的具体点值可以选择1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2等；其中(0.001-0.01)中的具体点值可以选择0.001、0.002、0.08、0.009、0.01等。
10、本专利技术采用zn2geo4:xmn2+作为探针，该发光成分发射光为537nm左右，将其作为试纸条的发光标签，以检测hbp，利用免疫层析技术，除了在光源激发下进行肉眼可见的定性检测之外，还可以检测激发后的余辉强度，实现免激发无背景荧光干扰的定量检测，能够检测更低浓度的hbp，具有双模式、高灵敏定量检测的能力。
11、进一步的，所述锌、锗和锰的摩尔比为(1～2):(1～2):(0.001-0.01)，经检测在此范围内可实现双模检测。
12、进一步的，所述锗酸锌长余辉纳米探针粒径为90～130nm；
13、进一步的，所述目标物为肝素结合蛋白。
14、所述锗酸锌长余辉纳米探针半径包括但不限于100nm、110nm、115nm或128nm等，不再一一列举。
15、进一步的，所述质控物选自兔igg抗体，所述质控标记物选自羊抗兔igg抗体；
16、所述第一生物标记物和第二生物标记物为单克隆抗体。
17、本申请还提供一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
18、制备锗酸锌长余辉纳米探针；
19、锗酸锌长余辉纳米探针表面氨基化；
20、锗酸锌长余辉纳米探针表面羧基化；
21、羧基化的锗酸锌长余辉纳米探针表面抗体偶联；
22、制备样品垫；
23、制备检测膜；
24、在底板上顺次相互搭接地粘贴样品垫、检测膜和吸水垫得到试纸板，切割所述试纸板得到所述试纸条。
25、具体的，其制备过程为：
26、(1)制备锗酸锌长余辉纳米探针
27、通过水热法合成锗酸锌长余辉纳米探针。在剧烈搅拌下，将1～3mmol zn(no3)2、0.001～0.01mmol mncl2和100～500μl浓hno3加入5～20ml去离子水中。然后，向上述溶液中缓慢加入0.1～2mmol na2geo3。之后，立即加入氢氧化铵(28％，wt)以将溶液的ph调节至7～8。将所得反应体系在室温下搅拌0.5～2小时。然后将溶液转移到特氟隆衬里的高压釜中，并使其在150～300℃下反应6～15小时。通过离心收集所得氨基化锗酸锌长余辉纳米探针并用去离子水洗涤三次，将洗涤完毕的锗酸锌长余辉纳米探针进行冷冻干燥并收集。
28、(2)表面修饰锗酸锌长余辉纳米探针
29、将锗酸锌长余辉纳米探针氨基化：首先，将锗酸锌长余辉纳米探针(25～75mg)溶解在dmf(20～50ml)中，并在超声下将锗酸锌长余辉纳米探针分散在dmf溶液中。然后，放入80℃油浴锅中，在搅拌下加入100～400μl的aptes，之后搅拌18～28小时。通过离心收集产物并用dmf洗涤一次、无水乙醇洗涤两次，冷冻干燥过夜后收集得到的氨基化锗酸锌长余辉纳米探针。
30、将锗酸锌长余辉纳米探针羧基化：首先，将paa(20～80mg)加入mes溶液中，超声使其溶解，然后加入edc(5～20mg)，溶解后再加入nhs(5～20mg),室温下搅拌10～40min使其完全溶解后调节ph至7～8之间，然后加入氨基化的锗酸锌长余辉纳米探针(10～50mg)，室温下搅拌过夜，通过离心收集所得羧基化锗酸锌长余辉纳米探针并用去离子水洗涤三次，并冷冻干燥过夜收集。
31、羧基化的锗酸锌长余辉纳米探针和抗体偶联：将羧基化锗酸锌长余辉纳米探针用水配成8～15mg/ml的溶液，超声处理2～5min后，取80～200μl纳米探针溶液以9000～12000rpm高速离心5～15min后，沉淀物用ph为5.0～7.0的mes溶液洗涤至300～1000μl，超声波处理2～5min；加入10～100μl的20～100mg/ml碳二亚胺，混匀5～10min，再加入50～200μl的20～100mg/mln-羟基硫代琥珀酰亚胺，混匀10～20min后9000～12000rpm高速离心5～15min，沉淀用ph为5.0～7.0的mes溶液洗涤至300～1000μl，之后超声处理2～5min，按照150～250μg/100μl分别加入第一生物标记物和质控物，混匀1～3h，用含0.5～2％bsa、0.1～1％甘氨酸的10～50mm、ph7.5～8.5tris-hcl封闭液封闭0.5～1h后本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板，所述底板上设置有依次相连的样品垫、检测膜和吸水垫；
2.根据权利要求1所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：所述锌、锗和锰的摩尔比为(1～2):(1～2):(0.001-0.01)。
3.根据权利要求1所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：其特征在于，所述锗酸锌长余辉纳米探针粒径为90～130nm。
4.根据权利要求3所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：
5.根据权利要求1～4中任一所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，其制备方法步骤中：
7.根据权利要求6所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，其制备方法步骤中：
8.根据权利要求5所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条
9.根据权利要求1～4任一所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条在在检测肝素结合蛋白中的应用。
10.根据权利要求9所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条在在检测肝素结合蛋白中的应用，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板，所述底板上设置有依次相连的样品垫、检测膜和吸水垫；
2.根据权利要求1所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：所述锌、锗和锰的摩尔比为(1～2):(1～2):(0.001-0.01)。
3.根据权利要求1所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：其特征在于，所述锗酸锌长余辉纳米探针粒径为90～130nm。
4.根据权利要求3所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特征在于：
5.根据权利要求1～4中任一所述的一种基于锗酸锌长余辉纳米探针的免疫层析试纸条，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：史俊朋，高艳，张云，孙霞，
申请(专利权)人：厦门稀土材料研究所，
类型：发明
国别省市：
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