【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，涉及核酸适配体，尤其涉及特异性结合inhb蛋白的核酸适配体、应用、试剂盒。
技术介绍
1、抑制素(inhibin,inh)是生殖细胞分泌的糖蛋白激素,属于转化生长因子β家族,主要包括inh-a和inh-b(分别由α和βa或βb亚基构成)。它是由生殖系统细胞分泌产生，与生殖能力有密切关系，对生殖功能具有内分泌、旁分泌和自分泌的调节作用。已证实抑制素b是卵巢储备功能和睾丸曲细精管功能的主要标记物，可以用于卵巢因素引起的女性不孕和曲细精管功能障碍引起的男性不育检测。
2、抑制素b(inhb)是生殖细胞分泌的糖蛋白激素，inh-b的分泌主要受fsh的调节,fsh促进颗粒细胞分泌inh-b，另外胰岛素样生长因子i(igf-i)、激活素能上调inh-b的分泌；而表皮生长因子(egf)、转化生长因子α(tgf-α)、igf-ii和卵泡抑素(follistatin,fs)则抑制inh-b的分泌。在女性月经周期的卵泡期中,除e2起关键作用外,孕酮和inhb也分别控制着lh及fsh的分泌,inh-b的主要生理作用是反馈性抑制垂体fsh的分泌,并通过旁分泌/自分泌调节作用增加e2底物的产生,从而调节e2的分泌。
3、生精功能低下与生精阻滞男性血清抑制素b水平显著低于正常生精功能男性，唯支持细胞综合征(sco)男性血清抑制素b水平极低，sco的发生与血清抑制素b的水平显著相关，血清抑制素b的水平还与睾丸体积、精子总数显著相关。抑制素b水平反映了整个睾丸组织的功能，是输精管道的直接产物，成年男性血清中维持
4、血清抑制素b测定可用于评价男性不育病人的生精功能，儿童隐睾、性早熟的诊断，对非阻塞性无精子症病人睾丸精子抽吸的预测，监测放、化疗对男性生精功能的损伤等。
5、目前临床上抑制素的检测方法有酶联免疫法(elisa)、电化学发光法和化学发光法。这几种方法前处理麻烦，成本高，费时费力，所需时间较长，不利于快速和高通量的检测，因此需要开发一种新的检测方法。
6、核酸适配体是一小段经体外筛选获得的寡核苷酸序列或者短的多肽，可以和相对应的靶标进行高亲和力和强特异性的结合，可以经过体外筛选技术——指数富集的配体进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，selex)获得，可经过人工合成。近年来，适配体是广泛用于治疗和检测的一种新型合成分子，与抗体相比具有成本低、可化学合成、无批间差、耐热、易于修饰等优势。在疾病诊断和治疗方面具有巨大潜力，近年来取得了巨大进展。目前未见利用核酸适配体进行inhb水平检测的相关报导。现有监测方法主要缺陷在于：灵敏度低、成本高、检测时间长、存在批间差。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种具有高亲和力，高特异性、分子量低易于修饰的inhb蛋白核酸适配体，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法，试剂盒与应用。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了特异性结合inhb蛋白的核酸适配体，包括seq id no.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合inhb蛋白的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合inhb蛋白的核苷酸序列。
4、作为本专利技术的一种优选方案，所述具有高同源性是指与seq id no.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
5、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持所述亲和力。
6、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持所述亲和力。
7、作为本专利技术的一种优选方案，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。
8、本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或连接同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合inhb蛋白的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
9、作为本专利技术的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持所述亲和力。
10、作为本专利技术的一种优选方案，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、sirna标记物或酶标记物。
11、本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可在上述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光物质，放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、sirna或酶标记等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合inhb蛋白的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
12、换言之，以上不论是经部分取代或经过修饰后的核酸适配体序列，都具有原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与inhb蛋白的结合。
13、第二方面，本专利技术还提供了一种前述核酸适配体的应用。例如，本专利技术的核酸适配体可以用于inhb蛋白的检测，可以使用本专利技术的核酸适配体来检测受试者的inhb蛋白的含量。
14、第三方面，本专利技术提供一种检测inhb蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的核酸适配体。
15、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
16、1)核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。针对于inhb蛋白的核酸适配体还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对inhb蛋白有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。
17、2)核酸适配体相较于抗体，更稳定，由于是化学合成，批间差异几乎没有；并将该核酸适配体成功用于inhb蛋白的检测。
18、3)本专利技术经过筛选得到的适配体具有特异性高、稳定性高、方便合成且分子量低易于修饰且有望替代抗体用于inhb蛋白的检测。
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1.特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合INHB蛋白的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合INHB蛋白的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
3.根据权利要求1或2所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
4.根据权利要求1或2所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。
5.根据权利要求4所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连
6.根据权利要求1或2所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持亲和力。
7.根据权利要求6所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、siRNA标记物或酶标记物。
8.权利要求1-7任一项所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体的应用，其特征在于，所述核酸适配体检测INHB蛋白上的应用。
9.检测INHB蛋白的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的特异性结合INHB蛋白的核酸适配体。
...【技术特征摘要】
1.特异性结合inhb蛋白的核酸适配体，其特征在于，包括seq id no.1所示的核苷酸序列；或者，与seq id no.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合inhb蛋白的核苷酸序列；或者由seq id no.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合inhb蛋白的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的特异性结合inhb蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与seq id no.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。
3.根据权利要求1或2所述的特异性结合inhb蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。
4.根据权利要求1或2所述的特异性结合inhb蛋白的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力...
【专利技术属性】
技术研发人员：高强，朱建国，吴超超，牛成镇，
申请(专利权)人：杭州佰辰医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：
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