【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗体领域，特别涉及一种检测rin3蛋白活性位点的兔源单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、rin3属于rin家族，由五个功能域组成：src同源性2(sh2)域，脯氨酸富集域(prd)，rin同源性(rh)域，vps9域(囊泡蛋白质分选9)和ras(ra)结构域。rin3被证明可以促进rab5b，rab21和rab31(33,34)的gtp结合。rin3已经被证明参与多种疾病发生发展过程，但是目前对这一家族的了解仍然非常匮乏。因此，制备抗体特异性检测rin3的活性位点，将为了解rin3的生物学特性，探索其活性在疾病中的改变提供有效武器。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供一种检测rin3蛋白活性位点的兔源单克隆抗体及其应用，以克服业内缺乏有效检测rin3活性形式水平的抗体的问题。
2、本专利技术提供了一种检测rin3蛋白活性位点的兔源单克隆抗体，包括rin3-2单克隆抗体和rin3-3单克隆抗体；其中，所述rin3-2单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seqid no.1所示，所述rin3-2单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述rin3-3单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述rin3-3单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。
3、本专利技术提供了编码基因，用于编码所述的兔源单克隆抗体。
4、包括如seq id no.5所示的dna序列，
5、本专利技术提供了一种核酸分子，其含有所述的编码基因。
6、本专利技术提供了一种表达载体或重组质粒，其特征在于：其含有核酸分子。
7、本专利技术提供了一种检测rin3蛋白活性位点的试剂盒，其特征在于，其包括所述兔源单克隆抗体和免疫组织化学检测试剂。所述免疫组织化学检测试剂包括通常的检测试剂。
8、所述试剂盒用于检测rin3蛋白活性位点y825磷酸化修饰水平。
9、本专利技术分别合成了包含y825位点的rin3磷酸化多肽，纯度>95％以及非磷酸化多肽(alqlgegs-pyylt)，将磷酸化肽段与bsa偶联后，作为抗原与佐剂乳化并免疫兔子，经4次免疫血清效价检测合格后，进行加强免疫。免疫效价合格动物收集新鲜脾脏和骨髓，提取总rna，并进行质控定量。使用质控合格的rna进行反转录，pcr扩增抗体重链和轻链可变区基因，并进行拼接后连入噬菌粒(phage)载体并电转化，复苏扩增获得抗体库，同时计算扩增前后库容大小。采取针对性措施设计多个方案进行抗体文库的筛选和检测。阳性库单克隆化并phage表达应用elisa检测其结合磷酸化抗原的特异性和有效性，获得单克隆阳性抗体两株(rin3-2以及rin3-3)。
10、有益效果
11、本专利技术中的rin3-2单克隆抗体适用于免疫沉淀，免疫荧光/组织化学染色；rin3-3单克隆抗体适用于免疫印迹(western blot)；两者均可以有效检测rin3-y825磷酸化水平，提示rin3蛋白的活性形式水平，具有良好的应用前景。
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1.一种检测RIN3蛋白活性位点的兔源单克隆抗体，其特征在于：包括Rin3-2单克隆抗体和Rin3-3单克隆抗体；其中，所述Rin3-2单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，所述Rin3-2单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述Rin3-3单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，所述Rin3-3单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
2.编码基因，其特征在于：用于编码权利要求1所述的兔源单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：包括如SEQ ID No.5所示的DNA序列，以用于编码所述Rin3-2单克隆抗体的重链可变区；以及如SEQ ID No.6所示的DNA序列，以用于编码所述Rin3-2单克隆抗体的轻链可变区；如SEQ ID No.7所示的DNA序列，以用于编码所述Rin3-3单克隆抗体的重链可变区；以及如SEQ ID No.8所示的DNA序列，以用于编码所述Rin3-3单克隆抗体的轻链可变区。
4.一种核酸分子，其特征在于：
5.一种表达载体或重组质粒，其特征在于：其含有权利要求4所述的核酸分子。
6.一种检测RIN3蛋白活性位点的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1的兔源单克隆抗体和免疫组织化学检测试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用于检测RIN3蛋白活性位点Y825磷酸化修饰水平。
...【技术特征摘要】
1.一种检测rin3蛋白活性位点的兔源单克隆抗体，其特征在于：包括rin3-2单克隆抗体和rin3-3单克隆抗体；其中，所述rin3-2单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seq idno.1所示，所述rin3-2单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示；所述rin3-3单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seq id no.3所示，所述rin3-3单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.4所示。
2.编码基因，其特征在于：用于编码权利要求1所述的兔源单克隆抗体。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于：包括如seq id no.5所示的dna序列，以用于编码所述rin3-2单克隆抗体的重链可变区；以及如seq ...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁健青，沈瑞楠，束亦梅，钱宇沁，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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