【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、包括脂肪酶和角质酶在内的脂解酶已被用于洗涤剂清洁组合物中，以去除油性污渍。脂解酶功能发挥作用的一种机制是通过水解甘油三酯来生成脂肪酸。然而，清洁组合物中存在的表面活性剂和其他组分常常会抑制这些酶，从而干扰其除去油性污渍的能力。因此，需要可在清洁组合物的苛刻环境中起作用的脂解酶。
技术实现思路
1、本专利技术提供了改善的脂解酶，特别是可用于洗涤剂组合物的酶。具体地讲，本专利技术提供与亲本脂解酶相比具有一个或多个修饰(诸如置换)的脂解酶变体。这可通过以下来实现：通过改善在标准洗涤剂制剂和低表面活性剂洗涤剂制剂中的洗涤性能、酶在洗涤剂组合物中的稳定性、酶的热稳定性、底物水解、表达和/或改善酶在洗涤循环中的效力的改进的电荷/疏水性分布来对酶进行改善。本专利技术提供了特别适合于并且可用于多种清洁应用的变体脂解酶，其包括但不限于变体脂肪酶脂解酶。本专利技术还提供了使用本专利技术的脂解酶变体来进行清洁的方法。
2、在一个实施例中，本专利技术为脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中该修饰是在脂解酶变体的有效位置处，其中在有效位置测试的修饰中的至少一种修饰满足以下标准中的至少一者：
3、a)某一位置，其中对于表达、在ph 8.2下的cs-61微样本活性(micro-swatchactivity)、在ph 6或ph 8.2下对对硝基苯基酯底物的活性以及洗涤剂稳定性、las稳定性或热稳定性来说，相对于tll亲本的最小性能指数(pi)大于或等于
4、b)某一位置，其中对于表达、在ph 8.2下的cs-61微样本活性、在ph 6或ph 8.2下对对硝基苯基酯底物的活性以及洗涤剂稳定性、las稳定性或热稳定性来说，相对于tll亲本的最小性能指数(pi)大于或等于0.8，并且对于这些测试中的任一者另外具有大于或等于1.2的pi；
5、c)某一位置，其中对于表达、在ph 8.2下的cs-61微样本活性、在ph 6或ph 8.2下对对硝基苯基酯底物的活性以及洗涤剂稳定性、las稳定性或热稳定性来说，相对于tll亲本的最小性能指数(pi)大于或等于0.5，并且对于这些测试中的任一者另外具有大于或等于1.5的pi；
6、并且其中有效位置选自：1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、79、84、85、86、87、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、111、112、114、115、117、118、119、120、121、122、123、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、142、143、149、151、152、153、154、155、156、158、159、162、163、164、165、166、167、168、169、170、176、179、180、181、183、184、187、188、189、190、191、192、193、196、198、199、200、202、205、206、208、209、210、211、212、213、214、216、217、218、221、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、236、237、238、239、242、243、244、246、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、259、260、262、263、264、265、266、267、268以及269，其中脂肪酶变体的氨基酸位置的编号与seq id no:4中所示的疏棉状嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosus)脂肪酶tll的氨基酸序列相对应。
7、在一个实施例中，本专利技术是脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中该修饰是在脂解酶变体的有效位置处，其中在有效位置测试的修饰中的至少50％满足以上所列出的标准a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置选自：1、2、3、4、5、6、8、9、13、23、24、25、26、27、28、29、33、37、38、39、46、51、52、54、58、64、66、68、69、71、72、75、90、93、94、111、120、122、123、130、131、137、140、162、163、189、250、252以及264，其中脂肪酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
8、在一个实施例中，本专利技术是脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中该修饰是在脂解酶变体的有效位置处，其中在有效位置测试的修饰中的至少30％满足以上所列出的标准a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置选自：18、19、20、30、31、32、47、48、49、50、53、56、60、73、74、85、86、91、95、96、97、98、99、101、105、108、115、125、127、128、132、133、151、159、164、179、183、187、188、190、216、223、232、237、244、251、254、263、267以及269，其中脂肪酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
9、在一个实施例中，本专利技术是脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中该修饰是在脂解酶变体的有效位置处，其中在有效位置测试的修饰中的至少15％满足以上所列出的标准a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置选自：7、11、12、15、22、35、40、42、43、44、45、61、63、65、67、76、77、84、87、114、117、119、121、134、135、136、143、154、155、156、158、165、166、168、176、180、191、199、200、202、209、211、214、217、221、224、225、228、229、231、233、248、249、253、255、256、265以及268，其中脂肪酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
10、在一个实施例中，本专利技术是脂解酶变体或其活性片段，其包含对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中所述修饰位于所述脂解酶变体的有效位置，其中在所述有效位置测试的修饰中的至少一个修饰至少符合以下标准之一：
2.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置24或189处测试的至少50％的修饰满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，并且其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
3.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置18处测试的修饰的至少30％但小于50％满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
4.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置11处测试的修饰的至少15％但小于30％满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。>
5.权利要求1的脂解酶变体，其中所述有效修饰选自11(K、V、Y)、18(C、H、K、M、N、Q、S、W)、24(A、D、E、F、H、I、L、M、N、P、R、T、V、W、Y)和189(D、E、G、K、M、N、Q、R、S、V)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
6.权利要求1的脂解酶变体，其中所述有效修饰选自11(A，E，I)和24(Q，5)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
7.权利要求5的脂解酶变体，其中所述修饰选自11(V)、18(K)、24(A、D、E、H、I、L、N、P、T、V、W)和189(D、G、N、Q、R、S)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
8.权利要求1的脂解酶变体，其中所述修饰选自11(K，Y)、18(Q)、24(Y)和189(K，V)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
9.权利要求1的脂解酶变体，其中所述脂解酶变体满足标准a)或b)和c)两者，但不是a)、b)或c)中的全部三者，并且其中所述修饰选自由18(C、H、S)和24(F)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
10.权利要求1的脂解酶变体，其中所述脂解酶变体满足标准c)但不满足标准a)或b)，并且其中所述修饰选自18(M，N，W)，24(M，R)和189(E，M)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
11.权利要求1的脂解酶变体，其中所述修饰在表面暴露的残基处并且是有利的疏水性或电荷表面修饰位置，其中所述残基位置是18，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与SEQ ID NO:4中所示的TLL的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
12.一种脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中相对于TLL亲本，其对于表达和去污剂稳定性的最小性能指数(P1)大于或等于0.8，并且
13.一种脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中相对于疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(TLL)亲本的表达和热稳定性的最小性能指数(P1)大于或等于0.8，和
14.权利要求1的脂解酶变体，其中所述亲本脂解酶源自疏棉状嗜热丝孢菌。
15.一种清洁组合物，其包含至少一种权利要求1的脂解酶变体。
16.权利要求15的清洁组合物，其中所述清洁组合物是衣物洗涤剂组合物、餐具洗涤剂组合物或硬表面清洁组合物。
17.权利要求16的清洁组合物，其中所述清洁组合物是衣物洗涤剂组合物。
18.权利要求15的清洁组合物，进一步包含至少一种选自半纤维素酶、纤维素酶、过氧化物酶、脂解酶、金属脂解酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、过水解酶、角质酶、果胶酶、果胶酸裂合酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质素酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、麦拉宁酶(malanase)、B-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、漆酶和淀粉酶。
19.一种清洁方法，包括用包含至少一种...
【技术特征摘要】
1.一种脂解酶变体或其活性片段，其包含对亲本脂解酶的氨基酸修饰，其中所述修饰位于所述脂解酶变体的有效位置，其中在所述有效位置测试的修饰中的至少一个修饰至少符合以下标准之一：
2.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置24或189处测试的至少50％的修饰满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，并且其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
3.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置18处测试的修饰的至少30％但小于50％满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
4.权利要求1的脂解酶变体，其中在所述变体的有效位置11处测试的修饰的至少15％但小于30％满足标准a)、b)或c)中的至少一项；其中修饰是氨基酸取代，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
5.权利要求1的脂解酶变体，其中所述有效修饰选自11(k、v、y)、18(c、h、k、m、n、q、s、w)、24(a、d、e、f、h、i、l、m、n、p、r、t、v、w、y)和189(d、e、g、k、m、n、q、r、s、v)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
6.权利要求1的脂解酶变体，其中所述有效修饰选自11(a，e，i)和24(q，5)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
7.权利要求5的脂解酶变体，其中所述修饰选自11(v)、18(k)、24(a、d、e、h、i、l、n、p、t、v、w)和189(d、g、n、q、r、s)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行编号。
8.权利要求1的脂解酶变体，其中所述修饰选自11(k，y)、18(q)、24(y)和189(k，v)，其中所述脂解酶变体的氨基酸位置根据与seq id no:4中所示的tll的氨基酸序列的对应关系来进行...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·P·格雷卡尔，S·普莱斯鲁斯，A·J·保罗斯，D·A·埃斯特尔，
申请(专利权)人：丹尼斯科美国公司，
类型：发明
国别省市：
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