【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开概括而言涉及真核细胞例如u2os细胞中t2r味觉受体的表达。本公开还涉及在此类细胞中表达t2r味觉受体的方法，以及筛选调节t2r受体的物质的方法，因此该物质可用作苦味的调节剂。
技术介绍
1、味觉系统提供有关外界化学组成的感官信息。味觉转导是动物中化学触发的感觉的更复杂的形式之一。从简单的后生动物到最复杂的脊椎动物，在整个动物界中都可以找到味觉的信号。哺乳动物被认为具有五种基本的味觉形式：甜味、苦味、酸味、咸味和鲜味。
2、味觉受体可以在细胞例如人胚肾293(hek-293)细胞中功能性表达。此类味觉受体与一种或多种g蛋白偶联。当测试分子与味觉受体结合时，偶联的g蛋白通过发出响应(例如细胞中钙阳离子浓度的变化)来响应结合事件。可以检测并测量此类化学变化，从而提供指示测试分子与味觉受体结合的化学信号。可以将表达此类g蛋白偶联味觉受体的多个细胞纳入标准细胞测定中。使用此类测定，可以筛选各种味觉化合物以确定它们调节味觉受体蛋白的程度和方式。
3、细胞类型会影响此类测定的稳健程度。例如，大多数此类测定具有信号窗口，在该信号窗口内，可检测信号与测试分子相对于味觉受体的活性相当好地对应。在该信号窗口之外，对应性恶化，并且测定不再提供有关结合事件的有用信息。t2r苦味受体可以在hek-293细胞中表达。但对于大约25种苦味受体中的一些，当这些受体在hek-293细胞中表达时，信号窗口相当窄。因此，需要开发在其他细胞类型中表达t2r苦味受体的方法，这可以提供更宽的信号窗口，可用于评估测试化合物在更广泛的活性水平范围
技术实现思路
1、本公开提供了在除hek-293之外的细胞类型中表达t2r苦味受体的方法，其中，在一些情况下，掺入此类细胞的测定提供了比在可比较的hek-293细胞中表达相同味觉受体时更宽的信号窗口。
2、在第一形态中，本公开提供了u2os细胞，该细胞包含t2r苦味受体。在一些实施方案中，细胞还包含与t2r苦味受体偶联的g蛋白。在一些实施方案中，细胞还包含编码g蛋白的外源核酸序列。在一些实施方案中，g蛋白是味导素(gustducin)。在一些其他实施方案中，g蛋白是g(i/o)蛋白。在一些其他实施方案中，g蛋白是混杂(promiscuous)g蛋白，例如g15或g16gust25。在一些实施方案中，u2os细胞是分离的u2os细胞。
3、在第二形态中，本公开提供了u2os细胞，该细胞包含编码t2r苦味受体的外源核酸序列。在一些实施方案中，细胞还包含编码g蛋白的外源核酸序列。在一些进一步的实施方案中，g蛋白是味导素。在一些其他实施方案中，g蛋白是g(i/o)蛋白。在一些其他实施方案中，g蛋白是混杂g蛋白，例如g15或g16gust25。在一些实施方案中，u2os细胞是分离的u2os细胞。
4、在第三形态中，本公开提供了鉴定苦味调节剂的方法，该方法包括：(a)使第一形态的一种或多种u2os细胞与测试化合物接触；(b)测量t2r苦味受体活性，其中t2r苦味活性的变化指示该测试化合物是苦味调节剂。在一些实施方案中，u2os细胞包含在测定中。在一些实施方案中，u2os细胞粘附至基底。
5、在第四形态中，本公开提供了鉴定减少苦味的化合物的方法，该方法包括：(a)使第一形态的一种或多种u2os细胞与测试化合物和促苦味剂接触；(b)通过在存在和不存在测试化合物的情况下比较t2r苦味受体与促苦味剂的活性来测量t2r苦味受体的响应，其中t2r苦味受体活性的降低指示该测试化合物是苦味阻滞剂。在一些实施方案中，该方法包括基于t2r苦味受体活性的变化将测试化合物鉴定为苦味阻滞剂。在一些实施方案中，该方法包括选择该苦味阻滞剂作为减少苦味的化合物。在一些实施方案中，u2os细胞包含在测定中。在一些实施方案中，u2os细胞粘附至基底。
6、在第五形态中，本公开提供了第三或第四形态的某些实施方案的任何经鉴定或经选择的活性测试化合物用于减少可摄取组合物的苦味的用途。
7、在第六形态中，本公开提供了减少可摄取组合物的苦味的方法，包括将一定量(例如减少苦味有效量)的第三或第四形态的任何实施方案的任何经鉴定或经选择的活性测试化合物引入到可摄取组合物中。
8、在第七形态中，本公开提供了可摄取组合物，其包含第三或第四形态的某些实施方案的任何经鉴定或经选择的活性测试化合物。在一些实施方案中，可摄取组合物包含一种或多种促苦味剂。
9、在第八形态中，本公开提供了包含第七形态的可摄取组合物的风味化产品。在一些实施方案中，风味化产品是饮料产品，例如苏打水、调味水、茶等。在一些其他实施方案中，风味化产品是食物产品。在一些其他实施方案中，风味化产品是药物和非处方药。
10、进一步的形态以及它们的实施方案在下面的详细描述、附图、摘要和权利要求中阐述。
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1.一种U2OS细胞，该细胞包含T2R苦味受体和G蛋白，其中该G蛋白与T2R苦味受体功能性偶联。
2.根据权利要求1所述的细胞，其中该T2R苦味受体是：SEQ ID NO:1的多肽序列或其功能片段；SEQ ID NO:3的多肽序列或其功能片段；SEQ ID NO:5的多肽序列或其功能片段；SEQ ID NO:7的多肽序列或其功能片段；或者SEQ ID NO:9的多肽序列或其功能片段。
3.根据权利要求1或2所述的细胞，其中该G蛋白是味导素或G(i/o)多肽或混杂G蛋白例如G15或G16gust25。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的细胞，其中该细胞经修饰以过表达T2R苦味受体。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的细胞，其中该细胞经修饰以过表达该G蛋白。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的细胞，其中该细胞是分离的细胞。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的细胞，其中该细胞包含在基于细胞的测定中或置于固体支持物上。
8.一种鉴定苦味调节剂的方法，该方法包括：
9.根据权利要求8所述
10.鉴定减少苦味的化合物的方法，该方法包括：
11.根据权利要求10所述的方法，该方法还包括：
12.根据权利要求11所述的方法，该方法还包括：
13.权利要求11的经鉴定化合物或权利要求12的经选择化合物用于减少可摄取组合物的苦味的用途。
14.一种可摄取组合物，其包含一种或多种促苦味剂和权利要求11的经鉴定化合物或权利要求12的经选择化合物。
15.一种风味化产品，其包含权利要求14所述的可摄取组合物，其中该风味化产品是食物产品、饮料产品、药物产品或口腔护理产品。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种u2os细胞，该细胞包含t2r苦味受体和g蛋白，其中该g蛋白与t2r苦味受体功能性偶联。
2.根据权利要求1所述的细胞，其中该t2r苦味受体是：seq id no:1的多肽序列或其功能片段；seq id no:3的多肽序列或其功能片段；seq id no:5的多肽序列或其功能片段；seq id no:7的多肽序列或其功能片段；或者seq id no:9的多肽序列或其功能片段。
3.根据权利要求1或2所述的细胞，其中该g蛋白是味导素或g(i/o)多肽或混杂g蛋白例如g15或g16gust25。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的细胞，其中该细胞经修饰以过表达t2r苦味受体。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的细胞，其中该细胞经修饰以过表达该g蛋白。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的细胞，其中该细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·赛尔温特，M·威廉姆斯，卢敏，M·塞加尼舍，
申请(专利权)人：弗门尼舍公司，
类型：发明
国别省市：
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