【技术实现步骤摘要】
技术介绍
1、程序性细胞死亡1(pd-1)的cdna于1992年从鼠t细胞杂交瘤和经历细胞凋亡的造血祖细胞系中分离出。基因切除(genetic ablation)研究显示，pd-1的缺陷在多种的小鼠品系中导致不同的自身免疫表型。具有转基因t细胞受体(tcr)的pd-1缺陷的同种异体t细胞对同种抗原(alloantigen)表现出增强的反应，表明t细胞上的pd-1在响应抗原中起到负调节作用。
2、几项研究对与pd-1相互作用的分子的发现作出贡献。在1999年，b7同源物1(b7-h1，也称为程序性死亡配体1[pd-l1])，基于其与b7家族分子的同源性，利用分子克隆和人类表达序列标签数据库检索，独立于pd-1被鉴定出来，并显示b7-h1在体外作为人t细胞应答的抑制剂起作用。一年后，freeman、wood和honjo的实验室表明，b7-h1(以下称为pd-l1)是pd-1的结合和功能性伴侣，这两项独立的研究线汇合。接下来，确定了pd-l1缺陷小鼠(pd-l1 ko小鼠)易于被诱导自身免疫性疾病，尽管这一小鼠品系并不自发地发展出这样的疾病。之后，阐明了pd-l1/pd-1相互作用在体内抑制t细胞应答中起着主导作用，特别是在肿瘤微环境中。
3、初步研究显示，肿瘤相关的pd-l1促进了活化的t细胞的凋亡(dong h.等，tumor-associated b7-h1 promotes t-cell apoptosis:a potential mechanism of immuneevasion.nature m
4、最近，fda批准了两种pd-1 mab来治疗人类癌症，一种来自施贵宝(opdivo，纳武单抗(nivolumab),mdx1106，bms-936558，ono-4538)，另一种来自默克(keytruda,派姆单抗(pembrolizumab),lambrolizumab，mk-3475)。此外，pd-1或pd-l1的多种mab正在数以百计的牵涉数以千计的患者的临床试验中积极开发。迄今为止，抗pd治疗通过诱导晚期和转移性肿瘤的消退(regression)和提高生存率而产生显著的临床益处。更重要的是，抗pd治疗可以具有持久的效果、可耐受的毒性，并显示适用于广谱的癌症类型，特别是实体肿瘤。这些临床发现进一步证实了pd通路阻断的原理，并将抗pd治疗置于与个性化或肿瘤类型特异性治疗不同的独特类别中。由于其与其他癌症治疗相比独特且不重叠的机制，人们正将抗pd治疗的方式与几乎所有的癌症治疗方法相结合，以试图进一步扩大治疗效力。除了与多种癌症免疫治疗方法(如癌症疫苗、共刺激和共抑制抗体和过继性细胞治疗)相结合外，还开始了各种临床试验以将抗pd治疗与化疗、放疗和靶向治疗相结合。
5、抗pd治疗在人类癌症特别是实体肿瘤的免疫治疗中处于中心地位。这种疗法不同于以前的免疫治疗剂——其主要目的是增强全身免疫应答或产生对癌症的新免疫力；相反，抗pd治疗调节肿瘤部位的免疫应答，靶向肿瘤引起的免疫缺陷，并修复正在进行的免疫反应。虽然抗pd治疗用于治疗多种人类癌症的临床成功已经证实了这种方法，但我们仍在研究这一途径和相关的免疫应答，这将有助于发现和设计新的临床可应用的癌症免疫治疗方法。
技术实现思路
1、本公开提供了抗pd-1抗体，其对pd-1蛋白呈现出色的结合和抑制活性。测试的pd-1抗体中的一种甚至显示出比两个经监管批准的抗pd-1抗体产品更强的结合活性。
2、因此，根据本公开的一个实施方案，提供了一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人类程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3选自由以下组成的组：(a)hcdr1:gftfssyt(seq id no:1)，hcdr2:ishgggdt(seq id no:2)，hcdr3:arhsgyergyyyvmdy(seq id no:3)，lcdr1:esvdyygfsf(seq id no:4)，lcdr2:aas(seq id no:5)，lcdr3:qqskevpw(seq id no:6)；(b)hcdr1:gytftsyt(seq id no:7)，hcdr2:inpttgyt(seq id no:8)，hcdr3:arddayysgy(seq id no:9)，lcdr1:eniysnl(seq id no:10)，lcdr2:aak(seq id no:11)，lcdr3:qhfwgtpwt(seq idno:12)；和(c)hcdr1:gfafssyd(seq id no:13)，hcdr2:itigggtt(seq id no:14)，hcdr3:arhrydyfamdn(seq id no:15)，lcdr1:envdnyginf(seq id no:16)，lcdr2:vss(seq idno:17)，lcdr3:qqskdvpw(seq id no:18)。
3、在一些实施方案中，本公开的抗体或片段还包括重链恒定区、轻链恒定区、fc区或其组合。在一些实施方案中，轻链恒定区是κ链或λ链恒定区。
4、在一些实施方案中，所述抗体或其片段可以是igg、igm、iga、ige或igd的同种型。在一些实施方案中，所述同种型为igg1、igg2、igg3或igg4。在一些实施方案中，所述抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。
5、在一些实施方案中，所述抗体或其片段包含重链可变区，所述重链可变区包含seqid no∶35、seq id no∶37、seq id no：39的氨基酸序列，或与seq id no：35、seq id no:37或seq id no:39具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其片段包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq id no：41、seq id no∶43、seq id no：45的氨基酸序列，或与seq id no：41、seq id no:43或seq id no:45具有至本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：
2.权利要求1所述的抗体或其片段，进一步包括重链恒定区、轻链恒定区、Fc区或它们的组合。
3.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述轻链恒定区是κ链或λ链恒定区。
4.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD的同种型。
5.权利要求4所述的抗体或其片段，其中所述同种型为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
6.权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。
7.权利要求6所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是人源化抗体。>
8.权利要求7所述的抗体或其片段，其包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ IDNO:35、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:39的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:39具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
9.权利要求8所述的抗体或其片段，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43或SEQ ID NO:45具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
10.一种分离的抗体或片段，所述分离的抗体或片段对人程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3选自由以下组成的组：
11.权利要求10所述的分离的抗体或其片段，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3如(a)-(c)中任一项所示，但其中之一包含保守氨基酸取代。
12.权利要求10所述的分离的抗体或其片段，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3如(a)-(c)中任一项所示，但其中两个的每个均包含保守氨基酸取代。
13.权利要求10所述的分离的抗体或其片段，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3如(a)-(c)中任一项所示，但其中三个的每个均包含保守氨基酸取代。
14.一种组合物，其包含权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段和药学上可接受的载体。
15.一种分离的细胞，其包含一个或多个编码权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段的多核苷酸。
16.权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
17.权利要求16所述的用途，其中所述癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、肝癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、白血病、淋巴瘤、胰腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、尿道癌、头颈部癌，胃肠道癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、肾癌、黑色素瘤、前列腺癌和甲状腺癌。
18.一种治疗有需要的患者的癌症的方法，包括向所述患者施用权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段。
19.一种治疗有需要的患者中的癌症或感染的方法，包括：
20.权利要求19所述的方法，其中所述细胞是T细胞。
21.权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段在制备用于治疗感染的药物中的用途。
22.权利要求21所述的用途，其中所述感染是病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。
23.权利要求1-13中任一项所述的抗体或其片段在制备用于治疗免疫紊乱的药物中的用途。
24.权利要求23所述的用途，其中所述免疫紊乱选自由以下组成的组：感染、与感染相关的内毒素休克、关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、COPD、盆腔炎性疾病、阿尔茨海默病、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、佩罗尼氏病、乳糜泻、胆囊疾病、藏毛病、腹膜炎、银屑病、血管炎、手术粘连、脑卒中、I型糖尿病、莱姆病、关...
【技术特征摘要】
1.一种分离的抗体或其片段，所述分离的抗体或其片段对人程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3选自由以下组成的组：
2.权利要求1所述的抗体或其片段，进一步包括重链恒定区、轻链恒定区、fc区或它们的组合。
3.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述轻链恒定区是κ链或λ链恒定区。
4.权利要求1所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是igg、igm、iga、ige或igd的同种型。
5.权利要求4所述的抗体或其片段，其中所述同种型为igg1、igg2、igg3或igg4。
6.权利要求1-5中任一项所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。
7.权利要求6所述的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是人源化抗体。
8.权利要求7所述的抗体或其片段，其包含重链可变区，所述重链可变区包含seq idno:35、seq id no:37、seq id no:39的氨基酸序列，或与seq id no:35、seq id no:37或seq id no:39具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
9.权利要求8所述的抗体或其片段，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含seq idno:41、seq id no:43、seq id no:45的氨基酸序列，或与seq id no:41、seq id no:43或seq id no:45具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
10.一种分离的抗体或片段，所述分离的抗体或片段对人程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)具有特异性，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区hcdr1、hcdr2和hcdr3，所述轻链可变区包含轻链互补决定区lcdr1、lcdr2和lcdr3，其中所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3选自由以下组成的组：
11.权利要求10所述的分离的抗体或其片段，其中所述hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3如(a)-(c)中任一项所示，但其中之一包含保守氨基酸取代。
12.权利要求10所述的分离的抗体或其片段...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈列平，罗利群，
申请(专利权)人：大有华夏生物医药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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