【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测方法，具体是一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法。
技术介绍
1、淋巴细胞亚群的比例的增高或者降低，都提示了免疫功能紊乱，而细胞因子参与机体免疫反应和炎症反应，是非常灵敏的炎症指标，在疾病发展过程中动态监测细胞因子水平，可及时发现疾病转重倾向，及时治疗、避免或降低病情的恶化风险，实现“治未重”，提高临床治疗有效率；
2、目前基于流式细胞术的tbnk亚群和cba细胞因子的检测是建立在两种不同的方法之上，一种检测方法对应一种待检测物，分别检测样本的淋巴细胞表型和血浆/血清中的细胞因子含量，该方式存在检测周期长、样本量大、复杂和检测成本高的问题，为此，我们提出了一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法。
技术实现思路
1、为了解决现有方式存在检测周期长、样本量大、复杂和检测成本高的问题。
2、本专利技术提出一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，包括以下步骤，
3、a，依次向流式细胞管中加入抗凝血样本，抗体包被微球，荧光标记的检测抗体，以及结合缓冲液；
4、b，震荡孵育；
5、c，向样本管中加入溶血剂，经漩涡混匀仪混匀，静置后得到裂解红细胞；
6、d，对裂解红细胞溶液进行离心，弃去上清；
7、e，向样本管中加入洗涤缓冲液，经涡旋和离心后弃去上清；
8、f，向每个样本管中加洗涤缓冲液，摇晃样本使微球重悬，得到供上机流式细胞仪同时进行淋巴细胞表型和细胞因子检测的样本，样本上机检测
9、优选的，步骤a中，抗体包被微球使用的微球是聚苯乙烯乳胶微球，微球直径在1-10um之间，抗体通过抗体偶联的方式附着在微球表面。
10、优选的，步骤a中，荧光标记的检测抗体，抗体标记应用偶联技术，使用的荧光素包括但不限于fitc、pe和apc。
11、优选的，步骤a中，结合缓冲液结合缓冲液由0.1mpbs，0.2%bsa，0.1%proclin300以及表面活性剂组成。
12、优选的，步骤a中，抗凝血样本的量为100μl，抗体包被微球的量为1-10ul，荧光标记的检测抗体的量为1-10ul。
13、优选的，步骤b中，震荡孵育的时间为1～3小时，环境温度控制在37℃，无光源直接照射。
14、优选的，步骤c中，溶血剂加入量为2ml，漩涡混匀仪混匀时间不少于10s，静置时间不少于10分钟。
15、优选的，步骤d中，离心机的转速设定为1000～1500rpm，离心时间为5分钟。
16、优选的，步骤e中，涡旋时间为3至10秒，1000～1500rpm离心5分钟。
17、优选的，步骤f中，洗涤缓冲液由0.01mpbs，0.02%bsa，0.1%proclin30组成，涡旋8～12s。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
19、1、本专利技术中，一份样本同时检测淋巴细胞表型和细胞因子，省时省力，降低检测成本；
20、2、本专利技术中，通过在缓冲液中加入表面活性剂的方式，解决淋巴细胞表型和细胞因子检测相互干扰的问题。
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1.一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（A）中，抗体包被微球使用的微球是聚苯乙烯乳胶微球，微球直径在1-10um之间，抗体通过抗体偶联的方式附着在微球表面。
3.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（A）中，荧光标记的检测抗体，抗体标记应用偶联技术，使用的荧光素包括但不限于FITC、PE和APC。
4.根据权利要求3所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（A）中，结合缓冲液结合缓冲液由0.1MPBS，0.2%BSA，0.1%proclin300以及表面活性剂组成。
5.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（A）中，抗凝血样本的量为100μl，抗体包被微球的量为1-10ul，荧光标记的检测抗体的量为1-10ul。
6.根据权利要求5所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（B）中，震荡孵
7.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（C）中，溶血剂加入量为2ml，漩涡混匀仪混匀时间不少于10s，静置时间不少于10分钟。
8.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（D）中，离心机的转速设定为1000～1500rpm，离心时间为5分钟。
9.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（E）中，涡旋时间为3至10秒，1000～1500rpm离心5分钟。
10.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（F）中，洗涤缓冲液由0.01MPBS，0.02%BSA，0.1%proclin30组成，涡旋8～12s。
...【技术特征摘要】
1.一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（a）中，抗体包被微球使用的微球是聚苯乙烯乳胶微球，微球直径在1-10um之间，抗体通过抗体偶联的方式附着在微球表面。
3.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（a）中，荧光标记的检测抗体，抗体标记应用偶联技术，使用的荧光素包括但不限于fitc、pe和apc。
4.根据权利要求3所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（a）中，结合缓冲液结合缓冲液由0.1mpbs，0.2%bsa，0.1%proclin300以及表面活性剂组成。
5.根据权利要求1所述的一种淋巴细胞表型和细胞因子联合检测方法，其特征在于：步骤（a）中，抗凝血样本的量为100μl，抗体包被微球的量为1-10ul，荧光标记的检测抗体的量为1-10ul。...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋光运，王斌，李秀艳，
申请(专利权)人：江苏沃兴生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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