一种河豚毒素的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂。该制剂包括作为药物活性成份的小剂量河豚毒素和选自药学上允许的助溶剂或支架剂，所述的助溶剂为氨基酸。本发明专利技术中选用氨基酸作助溶剂，不仅能起到助溶剂的作用，增加河豚毒素在水中的溶解性，还能与河豚毒素形成高水溶性的盐溶液。本发明专利技术所用的河豚毒素采用本发明专利技术特定的方法制备，所制备的河豚毒素纯度高达９８％，收率高。采用本发明专利技术所提供的方法所制备的河豚毒素和氨基酸形成的制剂不仅水溶性良好，而且稳定性良好，安全可靠，质量稳定，不需在特定温度下的冰箱中保存，室温下贮存期可达２年以上，大大节约了贮藏、运输成本，方便医疗使用，治疗效果显著，特别是用于生理脱毒，治愈率达１００％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药制剂领域，具体地说涉及一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂。
技术介绍
河豚毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一种由河豚鱼内脏提取的低分子量生物碱类物 质。由于其独特的化学结构使其成为细胞钠离子通道专一阻断剂。因此其在生物学研究领 域作为生物试剂有着不可替代的位置。河豚毒素在医学临床上所显示的药理学作用，早在 上世纪30年代就已有用于临床介断生物碱类成瘾性病症的报道。在镇痛治疗方面也不断 有报道推出。因此，其无论在生物学研究领域还是在医学临床应用方面，都显示了十分重要 的地位。TTX由于在极微量的情况下就能阻断细胞钠离子的通道，而对钾离子通道没有影 响，具有高度的转移性，因此是十分有用的神经生理研究用工具药。临床医学上已证明TTX是良好的镇静剂、解痉剂、镇痛剂，特别对癌症等恶性疼痛 具有良好的镇痛作用，与传统的杜冷丁、吗啡等镇痛药相比虽然响应时间稍长，但其镇痛作 用可达12-20小时，而且无成瘾性。近来TTX在戒毒方面也显示出良好的效果，一般戒毒者 只需每日注射 ο μ gTTX 一针，5-7天为一个疗程，毒瘾即可得到控制，并可大大减轻一般戒 毒中常常出现的戒毒综合症。但河豚毒素注射液(水溶液)对温度很敏感，容易受温度的影响而发生降解，温度 越高，降解越快。一旦有效活性物质河豚毒素含量低于其标示量的90%或有关物质的相对 含量超过医药标准规定限度(大于对照溶液主峰面积)就不符合临床使用要求。试验证明， 河豚毒素注射液(水针剂)在室温下不稳定，为了保证河豚毒素注射液的质量，防止河豚毒 素含量下降和有关物质含量升高，必须将其置于4-8°C冰箱中保存。这就给河豚毒素的临 床适用带来诸多困难和不便，相应在贮存、运输、装卸、批发、零售、医院和应用各个环节都 得注意保持4-8°C低温，否则温度偏高可能影响临床效果，对此，必须设法尽快予以解决，研 制出安全稳定，室温下就能长期贮存的可靠产品。为了解决上述问题，一个简单的做法是将 河豚毒素做成冻干制剂。一般在水溶液中不稳定的生物活性物质在冻干脱水后贮存期都可 延长，待临床应用时，加灭菌注射用水再生即可。但河豚毒素用于医药时，其每剂量的用量 只有0. 5-60 μ g，如此微量的河豚毒素在溶液中经冻干脱水后形成不了所要求的固态残留 物，必需加入医药上能接受的赋形剂，才能提供微量河豚毒素得以附着的支架，在溶液冻干 脱水后能形成固态物。申请号为03146020. 8的中国专利申请公开了一种具有良好稳定性的含有符合人3体安全注射使用的室温下能长期贮存的河豚毒素冷冻干燥制剂的组合物及制备方法，是通 过在河豚毒素制剂中加入一定量的双糖如乳糖、蔗糖、纤维二糖、麦芽糖，冷冻干燥后制成 冻干剂来解决河豚毒素在制剂中稳定性的问题。该冻干剂在室温下贮存1年后，其河豚毒 素的含量及有关物质含量均未发生明显变化，符合医药用规定标准。但是，由于生物活性物质河豚毒素几乎不溶于水，尽管上述专利申请公开的河豚 毒素冻干制剂的组合物中加入了一定量的助溶剂，但其冻干制剂的复溶性依然不太好。为了获得所需浓度的河豚毒素水溶液，现有技术中，以河豚毒素为原料将其制备 成高水溶性的河豚毒素盐衍生物，如申请号为200410102449. 5的中国专利申请公开了河 豚毒素各种以盐形式制备成的河豚毒素衍生物(包括河豚毒素的酒石酸盐、马来酸盐、甲 磺酸盐、盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐的等当量衍生物)及其制备方法。中国专利02117928. X公开了一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素呼吸道给药制剂，其 特点是以河豚毒素枸橼酸盐或河豚毒素醋酸盐为原料药，按常规方法制成气雾剂、喷雾剂 或气溶胶制剂。本专利技术呼吸道给药制剂安全、高效、非成瘾性、使用方便。本专利技术的河豚毒 素呼吸道给药制剂对癌痛患者有效率达97%以上，戒毒有效率达100%，因此是一种很好 的戒毒、镇痛的药物制剂。但其给药方式限于呼吸道给药，包括鼻腔、口腔或舌给药，最好是 鼻腔给药。然而，鼻腔粘膜的吸收率受多种因素的影响。且该专利的实施例中所用的酸为 缓冲剂，制备用酸的摩尔数说明多数TTX仍然未形成盐，即多数TTX还是不能形成高水溶性 的溶液，未能从根本上解决其水溶性的问题。可见，解决河豚毒素的水溶性和稳定性是制备河豚毒素制剂的关键问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，该制剂不仅水溶性良 好，而且稳定性良好，安全可靠，质量稳定，不需在特定温度下的冰箱中保存，室温下贮存期 可达2年以上，大大节约了贮藏、运输成本，方便医疗使用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案一种用于戒毒、镇痛的河豚毒素制剂，其特征在于，所述的制剂包括作为药物活性 成份的小剂量河豚毒素和选自药学上允许的助溶剂或支架剂，所述的助溶剂为氨基酸。生物活性物质河豚毒素几乎不溶于水，为了获得所需浓度的水溶液，现有技术中， 以河豚毒素为原料将其制备成高水溶性的河豚毒素盐衍生物，如酒石酸盐、马来酸盐、甲磺 酸盐、盐酸盐、硫酸盐、氢溴酸盐、醋酸盐、枸橼酸盐的等当量衍生物。但本专利技术人发现在实 际应用中，制备这些高水溶性的河豚毒素盐衍生物时，所用的酸为缓冲剂，多数TTX仍然未 形成盐，未能从根本上解决河豚毒素的溶解性问题，而且这些酸多数是强酸，会对河豚毒素 的毒性造成破坏。本专利技术人在进行了大量的试验后惊喜地发现氨基酸不仅能够起到助溶剂 的作用，还能与河豚毒素形成TTX氨基酸盐，从而形成高水溶性的盐溶液，以TTX氨基酸盐 制备的制剂水溶性良好，制剂稳定性亦很好。本专利技术中，所述的小剂量河豚毒素为每制剂单位含有5-20 y g河豚毒素。本专利技术中，所述的制剂单位是指片剂的每片、胶囊剂的每粒胶囊、颗粒剂的每袋等 药学上常规制剂的剂型单位。本专利技术中，优选的制剂方式有以下两种(1)所述的制剂为由河豚毒素、助溶剂和注射用水配制的每制剂单位含有 5-20 yg河豚毒素的注射剂。(2)所述的制剂为由河豚毒素、助溶剂、支架剂和注射用水配制的每制剂单位含有 5-20 u g河豚毒素的冻干粉针剂。本专利技术所提供的河豚毒素注射剂采用本领域技术人员常用的方法制备，优选采用 如下方法制备向TTX中加入助溶剂，再加入注射用水，加热溶解，稀释至1000ml，过滤，滤 液超滤，灌装，封口制成1000只，灭菌，检验，即得。本专利技术所提供的河豚毒素冻干粉针剂采用本领域技术人员常用的方法制备，优选 采用如下方法制备向TTX中加入助溶剂，再加入支架剂和注射用水，加热过滤，滤液超滤， 分装，冷冻干燥后压盖即得。上述冷冻干燥分为四个阶段⑴预冻3-4小时，温度在-30 -45°C; (2)减压干 燥14小时，温度在-30 -45°C; (3)升温干燥4小时，温度在-15 -10C ；⑷二次升温干 燥4小时，温度在30°C。本专利技术采用特有的低温速冻，分阶段升温干燥的冻干方法，所得河豚毒素冻干成 形良好，获得了稳定性能较常规冻干结晶优良的晶型，有利稳定的运输和贮存，彻底解决了 河豚毒素冻干粉针剂的稳定问题。总之，本专利技术的冷冻干燥工艺大大提高了河豚毒素冻干 粉针剂在制备过程中的稳定性，制备所得的河豚毒素冻干粉针剂质量均一稳定，贮存和运 输更加方便。本专利技术中，所述的助溶剂为氨基酸或其盐酸盐，优选天门冬氨酸、精本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种河豚毒素的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：　　１）将河豚的卵巢或肝脏绞碎、匀浆，用含乙酸的醇溶液搅拌浸泡，将浸泡液过滤，滤液减压回收醇，至无醇味，得粗毒液；　　２）将上步获得的粗毒液离心、过滤，得滤液；滤渣用含３～５％乙酸的水溶液洗涤，将洗涤液合并到滤液中，静置，分离水层和上层油层，油层放置用于精制河豚鱼肝油；　　３）将上步的水层滤过，滤液过弱酸性阳离子交换树脂柱，洗脱，收集洗脱液；　　４）将洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液过葡萄糖凝胶柱，洗脱，收集洗脱液，合并减压浓缩，得浓缩液；　　５）将浓缩液用氨水调ｐＨ值至８－９，在５～１０℃温度下放置４５－５０小时后，沉淀过滤、洗涤、干燥、精制，富集ＴＴＸ峰的馏分，减压浓缩、冷冻干燥即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王开业，
申请(专利权)人：上海亿年生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]