具有促细胞分裂活性的Ｂｖ８的核酸和多肽制造技术

本发明专利技术涉及具有促细胞分裂活性的Ｂｖ８的核酸和多肽，更具体地本发明专利技术提供了用Ｂｖ８多肽诱导内皮细胞增生和促进内皮细胞存活的方法。本发明专利技术还提供了筛选Ｂｖ８活性调节物的方法。本发明专利技术还提供了利用Ｂｖ８多肽进行治疗的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术主要涉及利用具有促细胞分裂活性的蛋白BvS的方法，组合物和检测法。
技术介绍
内皮细胞局部微环境以组织特异性或器官特异性方式深刻影响着血管内皮细胞的表型和 生长特性，但局部有益信号本身的性质仍然很不明了。有明显迹象表明，血管内皮生长因 子(VEGF)和内皮细胞特异性生长因子的血管生成蛋白(angiopoietin)家族都是胚胎发育 和各种生理和病理情况下的血管生成所必需的(Ferrara and Alitalo,Nature Medicine, 5:1359-1364(1999) ；Carmeliet, Nature Medicine，6 :389_395 (2000))。另外，对内皮细 胞表型和生长的局部、组织特异性调节也有十分明显的证据(Aird等，J. Cell Biol. , 138 1117-1124(1997) ；Stewart and Wiley, Dev. Biol. ,84 183-192 (1981)) 内皮细胞的形 态和功能特征在不同器官中差别很大(Simionescu and Simionescu, Cell and Tissue Biology, Urban and Schwarzemberg, Baltimore, (1988)pp. 355—398) 。 Mi，MIlJii^iil 管生成因子的应用部位比类型更能决定新血管的特性(Dellian等，Am. J. Pathology. 149 59-71(1996) ；Roberts 等，Am. J. Pathology, 153 1239-1248 (1998)) 局部微环境对脉管 系统特性的这种影响的分子基础目前尚不清楚，但有人认为特化的基质在其中起主要作用 (Dellian，出处同上)。有理由相信，除了细胞的以及细胞外的基质成分以外，由刺激(可能 包括组织特异性分泌蛋白)所形成的一种集成的网络也能决定常驻内皮的结构和功能以 及生长调节。因此现在需要鉴定并定性能影响内皮细胞生长和/或分化的因子。这样的化合物 除了能帮助我们进一步了解脉管系统的发育以外，还可以用于诊断和治疗与脉管组织相关 的疾病。激素分泌细胞尽管现在的科学和医学治疗有了进步，但仍然需要新的针对社会的医学疾病的治 疗。一种发现新治疗的方法是研究器官如何操作。具体目标是传递信号的细胞如何控制生 物的行为。例如，内分泌细胞分泌所谓激素分子，这些激素的分泌出现故障时可以导致各种 疾病。特化的激素分泌细胞包括性腺细胞，它们分泌睾丸激素(睾丸间质细胞(Leydig cell))，雌激素(卵泡内膜细胞)和黄体酮(已分裂卵泡的黄体细胞)。尽管在医学领域有 各种利用外源给予睾丸激素，雌激素和黄体酮来进行的治疗，但是仍然需要对产生这些激 素的细胞进行调节。其它特化的激素分泌细胞包括肾上腺的细胞和消化系统的细胞。例如，肾上腺的 细胞分泌肾上腺素，去甲肾上腺素和类固醇激素如盐皮质激素和糖皮质激素。尤其有兴趣 的是皮质醇(Cortisol)，它产生于肾上腺皮质，能影响多种类型细胞的代谢。消化系统的细 胞包括胰腺的细胞，它们分泌胰岛素。胰岛素由朗格汉岛(islets of Langerhans)分泌， 它是糖代谢所必需的。胰岛素用于治疗和控制糖尿病(diabetes mellitus)，但目前仍需要 针对诸如糖尿病(diabetes)等疾病的有效治疗。肠道和呼吸道的其它目的激素包括5_羟 色胺，内啡肽，生殖激素抑制素，胃泌素，分泌素，缩胆囊素，胰高血糖素和铃蟾肽。很多疾病与激素分泌细胞有关，尤其与内分泌腺中生成类固醇的内皮细胞有关。 因此，最好能鉴定特异性影响这类内皮细胞的生长因子。这种内皮细胞特异性生长因子将 会是，诊断和治疗与这类细胞相关的疾病，以及鉴定可用于诊断和治疗这类疾病的其它药 物的有价值的工具。Bv8Bv8是一种小分子蛋白，它最初是从青蛙(Bombina variegata)的皮肤分泌物中 分离得到的(Mollay 等 Eur. J. Pharmacol. 374 189-196(1999))。Bv8 与 MIT-I 有 40 % 以上的同一性，后者是来自黑色树蛇(mamba)毒液的一种小分子蛋白，已知它能强效诱导 小肠收缩(Schweitz等FEBS Lett. 461 183-188 (1999))。目前已经从小鼠和人中克隆 出Bv8的多种哺乳动物同系物，它们都具有相同的氨基末端序列(Wechselberger等FEBS Lett. 462 :177-181(1999))。与MIT-I —样，人Bv8使胃肠道平滑肌强烈收缩，EC50值在 亚纳摩尔水平(1^等船1.卩1^1~111.59:692-698(2001))。现已在人类中鉴定出Bv8的两种 形式，其中较长的形式反映了旁路剪接外显子的存在。人BvS的较长形式与美国专利申请 09/886，242中所述的VRPA有近78%的同源性和58%的同一性。专利技术简述本专利技术基于鉴定出BvS的新活性。具体地，发现BvS诱导内皮细胞增殖，促进内皮 细胞存活并促进血管生成。如本文详述，BvS核酸和多肽可用于多种检测法中，以及用于诊 断和治疗与内皮细胞相关的疾病。一方面，本专利技术提供了诱导内皮细胞增殖的方法。在一个实施方案中，所述方法包 括使细胞与能够有效诱导所述细胞增殖的量的BvS接触。所述方法还包括使所述细胞与 VEGF接触。在另一个实施方案中，所述方法包括将编码BvS的核酸引入所述细胞，所述核酸 的量能有效诱导细胞增殖。所述方法还包括将编码VEGF的核酸引入所述细胞中。在一个实施方案中，BvS是天然序列BvS多肽。优选天然序列BvS多肽是天然人 Bv8多肽。天然人Bv8多肽可包含氨基酸序列SEQ ID NO 2或氨基酸序列SEQ ID NO :4。 在另一实施方案中，天然序列BvS包含氨基酸序列SEQ ID NO :6。在另一实施方案中，BvS 能与肝素结合。在另一实施方案中，BvS是BvS免疫粘附素。在另一实施方案中，BvS是嵌 合 Bv8。在一个实施方案中，所述细胞是内皮细胞，更优选生成类固醇的内皮细胞，如生成 类固醇的腺体的细胞。在另一方面，本专利技术提供了促进细胞存活的方法。在一个实施方案中，所述方法包 括使细胞与能够有效促进所述细胞存活的量的BvS接触。所述方法还包括使所述细胞与 VEGF接触。在另一个实施方案中，所述方法包括将编码BvS的核酸引入所述细胞，所述核酸6的量能有效促进细胞存活。所述方法还包括将编码VEGF的核酸引入所述细胞中。在一个实施方案中，BvS是天然序列BvS多肽。优选天然序列BvS多肽是天然人 Bv8多肽。天然人Bv8多肽可包含氨基酸序列SEQ ID NO 2或氨基酸序列SEQ ID NO :4。 在另一实施方案中，天然序列BvS包含氨基酸序列SEQ ID NO :6。在另一实施方案中，BvS 能与肝素结合。所述细胞优选内皮细胞，更优选生成类固醇的内皮细胞，如生成类固醇的腺体的 细胞。在另一方面，本专利技术提供了治疗哺乳动物与产激素组织相关的疾病的方法。在一 个实施方案中，所述方法优选包括对该哺乳动物给药能够有效治疗该疾病的量的BvS或其 激动剂或拮抗剂。在另本文档来自技高网...

【技术保护点】
诱导肾上腺皮质毛细管内皮（ＡＣＥ）细胞增殖且包含与ＳＥＱＩＤＮＯ：２或ＳＥＱＩＤＮＯ：４具有至少９０％同一性的氨基酸序列的多肽或编码该多肽的核酸分子在制备用于诱导生成类固醇组织的内皮细胞增殖、促进生成类固醇的组织的内皮细胞存活、或诱导生成类固醇的组织中血管生成的药物中的用途。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：纳波利奥恩弗拉拉，詹妮弗利考特，
申请(专利权)人：杰南技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]