【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及原子力显微成像，具体涉及一种基于原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型的检测方法。
技术介绍
1、胰岛素抵抗是指胰岛素敏感性下降，即正常浓度的胰岛素不能维持血糖在正常水平，从而引发糖尿病的产生。糖尿病的早期，患者存在胰岛素抵抗和高胰岛素血症，但无高血糖症。肝脏及外周组织是胰岛素作用的主要靶器官，是胰岛素抵抗产生的主要部位。通常，人们通过建立动物模型来研究胰岛素抵抗的发病机制并筛选治疗胰岛素抵抗的有效药物，但是建立动物模型造价较高，周期比较长，同时动物与人类在生理结构上有一定的差异，因此体外建立胰岛素抵抗细胞模型，能够为胰岛素抵抗的研究以及药物筛选带来一些新的方向。
2、目前，临床上有多种检查胰岛素抵抗的方法，其中高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术被认为是经典的评价胰岛功能的方法，但实验仍然存在一定的缺点：无法知晓肝糖产生是否被完全抑制，技术复杂耗费时间较长，费用昂贵，实验中需要进行频繁取血；而葡萄糖耐量试验受到的影响因素多种多样，如碳水化合物摄入量、体力活动、应激因素、日常服用药物等；homa-ir这类静态指标检测效果差，可能是由于静态指标计算会缺失代谢过程中的某些信息，因而影响效果。
3、细胞发生病变会影响到生物信号在细胞内的传递，同样会导致细胞力学特性的改变，随着生命科学和纳米科技的不断发展，对细胞的力学特性进行分析可以作为检测细胞状态的有效物理标志，具有重大的意义。原子力显微检测技术是一种高分辨率、非侵入式的成像检测技术，可以在生理环境下对活细胞进行纳米尺度的观测，是细胞生物学研究的重要实验手段，
技术实现思路
1、本专利技术技术解决问题：针对现有检测技术中存在的缺陷，本专利技术建立新的体外肝细胞胰岛素抵抗模型，提供一种利用原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型直接成像、测量和识别的检测方法，具有检测快速、准确、低成本的优势。
2、为实现本专利技术的目的，采用的技术方案如下：
3、通过高浓度胰岛素诱导肝细胞发生胰岛素抵抗，建立肝细胞胰岛素抵抗模型，使用原子力显微术在生理环境下对正常细胞与模型细胞进行多维信息的检测与表征。具体步骤如下：
4、取对数生长期的hepg2细胞，用胰蛋白酶溶液将细胞消化下来，进行离心，加入新鲜培养液(含10％fbs和1％双抗的rpmi1640培养液)重悬细胞，进行计数，接种于细胞培养板中；
5、加入浓度为10-40μg/ml的胰岛素处理12-36h；
6、通过葡萄糖氧化酶法检测各组上清液中葡萄糖含量，计算各组葡萄糖消耗量，验证建模条件；
7、按照筛选出的建模条件建立肝细胞胰岛素抵抗模型，利用原子力显微术在轻敲模式下获取肝细胞胰岛素抵抗模型的形貌及高度、粘附力和杨氏模量改变的参数。
8、本专利技术的有益效果是：本专利技术建立新的体外肝细胞胰岛素抵抗模型，胰岛素作用的浓度范围及处理时间更加精确，建模效果更佳。且本专利技术可以在生理环境下对肝细胞胰岛素抵抗模型进行纳米尺度的观测，分辨率高，样品处理简单，低成本，对细胞进行实时、定量、可视化的操作，能够快速获取肝细胞胰岛素抵抗模型的形貌特征，通过纳米压痕技术对细胞物理特性进行定量测量，还可进一步应用于药物筛选等研究。
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1.一种基于原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型的检测方法，其特征在于，通过高浓度胰岛素诱导肝细胞发生胰岛素抵抗，建立肝细胞胰岛素抵抗模型，使用原子力显微术在生理环境下对正常细胞与模型细胞进行多维信息的检测与表征，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型的检测方法，其特征在于，所述新鲜培养液为含10％FBS和1％青链霉素的RPMI1640培养液。
3.根据权利要求1所述的一种基于原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型的检测方法，其特征在于，所述物理特性参数包括细胞高度、粘附力、杨氏模量的参数。
【技术特征摘要】
1.一种基于原子力显微术对肝细胞胰岛素抵抗模型的检测方法，其特征在于，通过高浓度胰岛素诱导肝细胞发生胰岛素抵抗，建立肝细胞胰岛素抵抗模型，使用原子力显微术在生理环境下对正常细胞与模型细胞进行多维信息的检测与表征，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于原子力...
【专利技术属性】
技术研发人员：曲凯歌，陈玉娟，王作斌，姜晓琳，王睿，王兴玥，
申请(专利权)人：长春理工大学，
类型：发明
国别省市：
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