一种通用型黏膜疫苗载体及其制备方法技术

技术编号：40454839 阅读：12 留言：0更新日期：2024-02-22 23:12

本发明专利技术提供一种通用型黏膜疫苗载体及其制备方法属于涉及免疫学和疫苗技术领域。该通用型黏膜疫苗载体，包括Poly（I:C）和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜。本发明专利技术还提供该载体的制备方法，包括：将细胞膜上表达有肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与Poly（I:C）混合，经电转化后，得到所述载体。本发明专利技术黏膜疫苗载体能有效结合猪肺炎支原体和伪狂病毒。该黏膜疫苗载体联合猪肺炎支原体疫苗滴鼻免疫后能有效诱导抗原特异性黏膜抗体IgA，同时免疫后还能减轻攻毒引起的肺部病变，表明黏膜疫苗载体能够增强猪肺炎支原体的黏膜免疫应答，与疫苗联合后能有效预防动物支原体感染。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学和疫苗，特别涉及一种通用型黏膜疫苗载体及其制备方法。

技术介绍

1、呼吸道疾病是影响全球动物养殖业的主要健康威胁，尤其在猪等经济动物中。诸如猪肺炎支原体、猪蓝耳病毒、猪流感病毒等病原体所引起的呼吸道疾病对畜牧业造成了重大经济损失。这些病原体主要通过呼吸道黏膜侵入宿主，因此，黏膜免疫应答在抵御这些病原体中起着至关重要的作用。

2、传统的疫苗接种方法多数通过肌肉注射进行，主要激活体液免疫反应。然而，这种方法在激活黏膜免疫应答方面效果有限，尤其是在针对呼吸道黏膜屏障的病原体时。肌肉注射疫苗通常不能有效地激活肺部黏膜的免疫应答，导致免疫保护效果不理想。此外，现有的黏膜疫苗在递送效率、靶向性、安全性和稳定性方面存在挑战，特别是在穿透呼吸道黏膜屏障、有效激活肺泡巨噬细胞等方面，现有技术仍有待改进。

3、呼吸道黏膜是多种呼吸道病原物侵入宿主的主要途径，也是抵抗感染的第一道防线。因此，开发能够有效激活呼吸道黏膜免疫应答的疫苗具有重要的意义。理想的黏膜疫苗应该能够在不破坏黏膜屏障的前提下，激活肺泡巨噬细胞和其他免疫细胞，从而提供有效的保护。针对呼吸道感染的黏膜疫苗研发是当前兽医免疫学和疫苗学领域的研究热点。人们正在探索新的黏膜疫苗递送系统，以提高疫苗对呼吸道黏膜免疫系统的激活效率。这包括开发新型的黏膜佐剂、递送载体以及靶向技术，以提高疫苗的有效性和安全性。

4、现有技术中，黏膜疫苗缺乏既能有效穿透黏膜屏障又能针对性地激活肺部免疫细胞的载体。

技术实现思路</p>

1、本专利技术的目的是提供一种通用型黏膜疫苗载体，既能有效穿透黏膜屏障又能针对性地激活肺部免疫细胞的载体，产生较高的黏膜抗体水平和较好的保护效果。

2、本专利技术的另一目的是提供通用型黏膜疫苗载体的制备方法，该方法简单，易于操作，成本低。

3、本专利技术还提供所述通用型黏膜疫苗载体的应用。

4、本专利技术的目的采用如下技术方案实现：

5、一种通用型黏膜疫苗载体，包括poly(i:c)和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜。

6、在本专利技术中，所述肺表面活性蛋白a编码基因如seq id no:1中第1-525位碱基所示，所述成孔蛋白编码基因如seq id no:1中第526-1050位碱基所示。

7、在本专利技术中，所述poly(i:c)和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜的质量比为1.5-2.5:1。

8、本专利技术还提供所述通用型黏膜疫苗载体的制备方法，包括如下步骤：将细胞膜上表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与poly(i:c)混合，经电转化后，得到所述通用型黏膜疫苗载体。

9、在本专利技术中，细胞膜上表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的构建方法如下：将肺表面活性蛋白a和成孔蛋白编码基因插入载体中，然后通过脂质体转染试剂转染至肺泡巨噬细胞；或者将肺表面活性蛋白a和成孔蛋白通过连接肽相连形成融合蛋白，将该融合蛋白的编码基因插入载体中，然后通过脂质体转染试剂转染至肺泡巨噬细胞。

10、在本专利技术中，所述肺表面活性蛋白a编码基因如seq id no:1中第1-525位碱基所示，所述成孔蛋白编码基因如seq id no:1中第526-1050位碱基所示。

11、在本专利技术中，所述细胞膜上表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与poly(i:c)的质量比为1:1.5-2.5。

12、在本专利技术中，将所述表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜采用脂质体挤出仪挤压，制备成粒径为100-200nm的人工外囊泡后再与poly(i:c)混合，并进行电转化。

13、本专利技术还提供所述通用型黏膜疫苗载体在制备兽医疫苗中的应用。

14、在本专利技术中，所述兽用疫苗为猪肺炎支原体疫苗或猪伪狂犬病毒疫苗；将含有10-30μg的poly(i:c)的通用型黏膜疫苗载体与107ccu的猪肺炎支原体混合，得到猪肺炎支原体疫苗。

15、本专利技术中的载体通过特定的生物工程技术进行改造，细胞膜表面展示表面活性剂蛋白a(sp-a)的crd结构域和成孔蛋白llo，改造的细胞膜利用挤压的方式形成人工外囊泡，进一步负载黏膜佐剂poly(i:c)。本专利技术通用型黏膜疫苗载体，既能有效穿透黏膜屏障又能针对性地激活肺部免疫细胞的载体，产生较高的黏膜抗体水平和较好的保护效果。本专利技术黏膜疫苗载体能有效结合猪肺炎支原体和伪狂病毒。黏膜疫苗载体联合猪肺炎支原体疫苗滴鼻免疫后能有效诱导抗原特异性黏膜抗体iga，同时免疫后还能减轻攻毒引起的肺部病变，表明黏膜疫苗载体能够增强猪肺炎支原体的黏膜免疫应答，与疫苗联合后能有效预防动物支原体感染。优于该黏膜疫苗载体表面的表面活性剂蛋白a，能够结合多种呼吸道病原，由此，该黏膜疫苗载体可适用于多种呼吸道病原物的疫苗。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：包括Poly（I:C）和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜。

2.根据权利要求1所述通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：所述肺表面活性蛋白A编码基因如SEQ ID NO:1中第1-525位碱基所示，所述成孔蛋白编码基因如SEQ ID NO:1中第526-1050位碱基所示。

3.根据权利要求1或2所述通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：所述Poly（I:C）和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜的质量比为1.5-2.5:1。

4.权利要求1所述通用型黏膜疫苗载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将细胞膜上表达有肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与Poly（I:C）混合，经电转化后，得到所述通用型黏膜疫苗载体。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于细胞膜上表达有肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的构建方法如下：将肺表面活性蛋白A和成孔蛋白编码基因插入载体中，然后通过脂质体转染试剂转染至肺泡巨噬细胞；或者将肺表面活性蛋白A和

6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于所述肺表面活性蛋白A编码基因如SEQ IDNO:1中第1-525位碱基所示，所述成孔蛋白编码基因如SEQ ID NO:1中第526-1050位碱基所示。

7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于所述细胞膜上表达有肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与Poly（I:C）的质量比为1:1.5-2.5。

8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于将所述表达有肺表面活性蛋白A和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜采用脂质体挤出仪挤压，制备成粒径为100-200nm的人工外囊泡后再与Poly（I:C）混合，并进行电转化。

9.权利要求1所述通用型黏膜疫苗载体在制备兽医疫苗中的应用。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于所述兽用疫苗为猪肺炎支原体疫苗或猪伪狂犬病毒疫苗；将含有10-30 μg的Poly（I:C）的通用型黏膜疫苗载体与107CCU的猪肺炎支原体混合，得到猪肺炎支原体疫苗。

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【技术特征摘要】

1.一种通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：包括poly（i:c）和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜。

2.根据权利要求1所述通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：所述肺表面活性蛋白a编码基因如seq id no:1中第1-525位碱基所示，所述成孔蛋白编码基因如seq id no:1中第526-1050位碱基所示。

3.根据权利要求1或2所述通用型黏膜疫苗载体，其特征在于：所述poly（i:c）和细胞膜上表达了肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜的质量比为1.5-2.5:1。

4.权利要求1所述通用型黏膜疫苗载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将细胞膜上表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的细胞膜与poly（i:c）混合，经电转化后，得到所述通用型黏膜疫苗载体。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于细胞膜上表达有肺表面活性蛋白a和成孔蛋白的肺泡巨噬细胞的构建方法如下：将肺表面活性蛋白a和成孔蛋白编码基因插入载体中，然后通过脂质体转染试剂转染至肺泡巨噬细胞；或者将肺表面活性蛋白a和成孔蛋白通...

【专利技术属性】
技术研发人员：张珍珍，冯志新，陈蓉，袁厅，武昱孜，郝飞，谢星，韦艳娜，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：

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