【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及bbd29_06325基因突变体及其应用。
技术介绍
1、谷氨酸是最常用的调味添加剂被广泛应用到食品工业。以葡萄糖为原料大量生产谷氨酸主要是由谷氨酸棒杆菌和黄色短杆菌等菌属为代表的细菌发酵获得，通过柠檬酸循环中的中间体α-酮戊二酸的还原性胺化合成谷氨酸。
2、为了大量积累谷氨酸就必须严格地控制发酵环境，此外，还要控制ph、通风量、溶氧、温度、磷酸及金属离子等，这些条件对于建立良好的谷氨酸发酵都是很重要的。
3、此外，人们通过提高谷氨酸棒杆菌利用葡萄糖的效率或者提高还原当量，增加高能化合物量促进细胞代谢。通过改进这些工程细胞的生长和繁殖，既可提高大规模培养物中的细胞存活力，又可提高其分裂率，从而使发酵罐培养物中活细胞数量增多而提高产率、产量或生产效率。
4、高丝氨酸脱氢酶是天冬氨酸族氨基酸生物合成途径的关键酶，同时也是限速酶，它催化天冬氨酸p-半醛生成高丝氨酸，最终控制合成蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸。
5、谷氨酸发酵在利用糖发酵过程会产生许多降解产物或中间体。然而，除数种有用的降解产物或中间体外，还产有乳酸、玻拍酸等有机酸及其他氨基酸，如蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸。如果在不适合谷氨酸生产的条件下，这些物质的生成量明显地增加。
6、目前，关于bbd29_06325基因编码的高丝氨酸脱氢酶在谷氨酸发酵过程中对l-谷氨酸产量方面的影响还未见报道。
技术实现思路
1、为了更好地挖掘谷氨酸棒杆菌产谷氨酸的代谢潜
2、第一方面，本专利技术要求保护bbd29_06325蛋白突变体。
3、本专利技术所要求保护的bbd29_06325蛋白突变体是将bbd29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由d替换为其他氨基酸后得到的蛋白质；
4、所述bbd29_06325蛋白包含(或为)如下任一：
5、(a1)如seq id no.3所示的蛋白质；
6、(a2)在(a1)所限定的蛋白质的n端和/或c端连接蛋白标签后得到的融合蛋白。
7、进一步地，所述bbd29_06325蛋白突变体是将所述bbd29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由d替换为g后得到的蛋白质。即所述bbd29_06325蛋白突变体的氨基酸序列如seqid no.1所示。
8、第二方面，本专利技术要求保护编码前文第一方面中所述bbd29_06325蛋白突变体的核酸分子。
9、进一步地，所述核酸分子可包含(或为)如下任一：
10、(b1)seq id no.2所示的dna分子；
11、(b2)与(b1)限定的dna序列具有95％以上同一性且编码所述bbd29_06325蛋白突变体的dna分子。
12、这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
13、所述95％以上同一性具体可为96％以上同一性或97％以上同一性或98％以上同一性或99％以上同一性。
14、第三方面，本专利技术要求保护含有前文第二方面中所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。
15、进一步地，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。
16、进一步地，所述表达盒由启动子、由所述启动子启动表达的所述核酸分子，以及转录终止序列组成；所述启动子以功能性方式与所述核酸分子连接，且所述核酸分子与所述转录终止序列连接。更进一步地，所述表达盒还可包括增强子。
17、进一步地，所述重组微生物为含有所述表达盒或所述重组载体的重组微生物。
18、所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌。其中，细菌可为谷氨酸棒杆菌(corynebacterium glutamicum)、乳酸发酵短杆菌、黄色短杆菌(brevibacteriumflavum)、北京棒杆菌(corynebacterium pekinense)、噬氨短杆菌、钝齿棒状杆菌或泛菌(pantoea)。进一步地，所述细菌为谷氨酸棒杆菌。更进一步地，所述谷氨酸棒杆菌为谷氨酸棒杆菌(corynebacterium glutamicum)cgmcc no.21220或野生型谷氨酸棒杆菌菌株atcc13869。
19、在本专利技术中，所述重组微生物具体为重组菌。
20、进一步地，所述重组菌为将细菌基因组中的编码所述bbd29_06325蛋白的核酸分子替换为前文第一方面中所述核酸分子后得到的重组菌。
21、其中，编码所述bbd29_06325蛋白的核酸分子可包含(或为)如下任一：
22、(c1)seq id no.4所示的dna分子；
23、(c2)与(c1)限定的dna序列具有95％以上同一性且编码所述bbd29_06325蛋白的dna分子。
24、这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
25、所述95％以上同一性具体可为96％以上同一性或97％以上同一性或98％以上同一性或99％以上同一性。
26、具体地，将所述细菌基因组中的编码所述bbd29_06325蛋白的核酸分子替换为前文第一方面中所述核酸分子具体可通过即将所述细菌基因组中seq id no.4的第1211位由a突变为g(其他核苷酸序列不变)实现。
27、在本专利技术的具体实施方式中，将所述细菌基因组中的编码所述bbd29_06325蛋白的核酸分子替换为前文第二方面中所述核酸分子是通过向所述细菌中导入实施例中的重组载体pk18-bbd29_06325a1211g实现的。
28、第四方面，本专利技术要求保护如下任一应用：
29、p1、前文第一方面中所述的bbd29_06325蛋白突变体或前文第二方面中所述的核酸分子或前文第三方面中所述的表达盒或重组载体或重组微生物在生产l-氨基酸中的应用；
30、p2、前文第一方面中所述的bbd29_06325蛋白突变体或前文第二方面中所述的核酸分子或前文第三方面中所述的表达盒或重组载体在提高细菌l-氨基酸产量中的应用；
31、p3、前文第一方面中所述的bbd29_06325蛋白突变体或前文第二方面中所述的核酸分子或前文第三方面中所述的表达盒或重组载体在构建产l-氨基酸工程菌株中的应用。
32、第五方面，本专利技术要求保护一种提高细菌l-氨基酸产量的方法。
33、本专利技术要本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.BBD29_06325蛋白突变体，是将BBD29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由D替换为其他氨基酸后得到的蛋白质；
2.根据权利要求1所述的BBD29_06325蛋白突变体，其特征在于：所述BBD29_06325蛋白突变体是将所述BBD29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由D替换为G后得到的蛋白质。
3.编码权利要求1或2所述BBD29_06325蛋白突变体的核酸分子。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含如下任一：
5.含有权利要求3或4所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。
6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于：所述重组微生物为重组菌；
7.如下任一应用：
8.一种提高细菌L-氨基酸产量的方法，包括如下步骤：将细菌基因组中的编码权利要求1中所述BBD29_06325蛋白的核酸分子替换为权利要求3或4所述核酸分子，实现细菌所述L-氨基酸产量的提高。
9.一种构建产L-氨基酸工程菌株的方法，包括如下步骤：将细菌基因组中的编码权利要
10.根据权利要求6所述的重组菌或权利要求7-9中任一所述的应用或方法，其特征在于：所述细菌为谷氨酸棒杆菌；和/或
...【技术特征摘要】
1.bbd29_06325蛋白突变体，是将bbd29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由d替换为其他氨基酸后得到的蛋白质；
2.根据权利要求1所述的bbd29_06325蛋白突变体，其特征在于：所述bbd29_06325蛋白突变体是将所述bbd29_06325蛋白的第404位氨基酸残基由d替换为g后得到的蛋白质。
3.编码权利要求1或2所述bbd29_06325蛋白突变体的核酸分子。
4.根据权利要求3所述的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含如下任一：
5.含有权利要求3或4所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。
6.根据权利要求5所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李峰，孟刚，魏爱英，赵春光，苏厚波，马文有，王攀，张坤，王吉玮，
申请(专利权)人：黑龙江伊品生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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