【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物菌剂，具体为一种治理土壤的微生物菌剂及其制备方法。
技术介绍
1、随着环境污染问题的日益严重，治理土壤污染成为了亟待解决的问题。生物修复利用微生物的代谢活动和降解能力来降低或去除污染物，相比于传统的物理或化学方法，具有生态、广泛适用、简洁高效和可持续性等特点。
2、然而，目前的研究大多针对细菌，对于真菌和放线菌的研究较少。这些微生物菌种在土壤污染治理中具有重要作用，因为它们能够分解更复杂的有机污染物。此外，目前的微生物菌种生理生化特性和降解机理研究大部分是针对单一污染物的研究结果，而实际情况往往是多种污染物共存的复杂环境。因此，需要开发一种多菌种混合的微生物菌剂，以在实际应用时获得更稳定的治理效果。另外，传统的菌剂载体不利于微生物与污染物之间的传质，这限制了菌剂的作用效果。
3、因此，我们提出一种治理土壤的微生物菌剂及其制备方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种治理土壤的微生物菌剂及其制备方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：
3、一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，包括如下步骤：
4、步骤s1：将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、绿色木霉菌、细黄链霉菌活化后分别接种到种子培养基中进行种子培养，制得枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液、绿色木霉菌种子液、细黄链霉菌种子液
5、步骤s2：将枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液、绿色木霉菌种子液、细黄链霉菌种子液分别接种在液体培养基中进行液体发酵，形成枯草芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、蜡样芽孢杆菌发酵液、侧孢芽孢杆菌发酵液、绿色木霉菌发酵液、细黄链霉菌发酵液，混合均匀后，制得混合微生物发酵液；
6、步骤s3：将改性生物炭和改性沸石混合均匀，制得复合载体；将混合微生物发酵液和复合载体混合均匀，制得芯材；
7、步骤s4：将壳聚糖和冰醋酸溶液混合均匀，制得壳聚糖溶液；将壳聚糖溶液、明胶水溶液和β-环糊精水溶液混合均匀，加入芯材混合均匀，在30-40℃下搅拌0.5-1h，再加入戊二醛混合均匀，在室温下反应2-3h，经洗涤、抽滤、干燥后，制得微生物菌剂。
8、在上述技术方案中，通过将多种不同的微生物菌株混合，可以提高土壤治理的综合效果，不同菌株具有不同的代谢特性和生态功能，可以协同作用，增强土壤的养分转化和有机物降解能力；以改性生物炭和改性沸石作为复合载体，采用吸附法固定混合微生物发酵液，制得芯材，可以提供良好的附着表面，有利于微生物菌株的附着和生长，提高微生物菌株的存活率和使用效率；再以壳聚糖、明胶、β-环糊精作为原料，以戊二醛作为交联剂，形成具有三维网络多孔结构的水凝胶，进一步包覆固定芯材，增加微生物菌剂在储存和施用过程中的稳定性，从而增强土壤治理的效果。
9、进一步的，所述步骤s1中活化的具体步骤为：将枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌分别接种划线至牛肉膏蛋白胨培养基，于30-37℃培养24-48h；将绿色木霉菌接种划线至pda培养基，于28-30℃培养3-5d；将细黄链霉菌接种划线至放线菌培养基，于28-30℃培养5-7d。
10、进一步的，所述牛肉膏蛋白胨培养基为：牛肉膏3-5g/l、蛋白胨10-15g/l、氯化钠3-5g/l、琼脂15-20g/l，ph＝7.2-7.4，于121℃灭菌20-30min；pda培养基为：去皮马铃薯200-202g/l、葡萄糖18-20g/l、琼脂15-20g/l，于121℃灭菌20-30min；放射菌培养基为：可溶性淀粉18-20g/l、硝酸钾1.0-1.5g/l、氯化钠0.3-0.5g/l、硫酸镁0.3-0.5g/l、磷酸氢二钾0.3-0.5g/l、琼脂18-20g/l，ph＝7.2-7.4，于121℃灭菌20-30min。
11、进一步的，所述步骤s1中种子培养的具体步骤为：将活化后的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌分别接种划线至种子培养基，在30-37℃、160-180r/min下振荡培养1-2d，形成枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液；将活化后的绿色木霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养2-3d，形成绿色木霉菌种子液；将活化后的细黄链霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养5-7d，形成细黄链霉菌种子液。
12、进一步的，所述步骤s1中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3-5g/l、蛋白胨10-15g/l、氯化钠3-5g/l，ph＝7.2-7.4；绿色木霉菌的种子培养基为：去皮马铃薯200-202g/l、葡萄糖18-20g/l；细黄链霉菌的种子培养基为：可溶性淀粉18-20g/l、硝酸钾1.0-1.5g/l、氯化钠0.3-0.5g/l、硫酸镁0.3-0.5g/l、磷酸氢二钾0.3-0.5g/l，ph＝7.2-7.4。
13、进一步的，所述步骤s2中发酵培养的具体步骤为：将枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液分别接种在液体培养基中，在30-37℃、180-200r/min下振荡培养3-5d，形成枯草芽孢杆菌发酵液、巨大芽孢杆菌发酵液、蜡样芽孢杆菌发酵液、侧孢芽孢杆菌发酵液；将绿色木霉菌种子液接种在液体培养基中，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养7-8d，形成绿色木霉菌发酵液；将细黄链霉菌接种在液体培养基中，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养7-10d，形成细黄链霉菌发酵液。
14、进一步的，所述步骤s2中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的液体培养基为：葡萄糖10-15g/l、酵母浸粉2-3g/l、硫酸铵1-2g/l、磷酸氢二钾2-3g/l、七水硫酸镁0.1-0.2g/l、氯化钙0.1-0.2g/l、ph＝7.2-7.4；绿色木霉菌的液体培养基为：蔗糖10-15g/l、玉米粉12-13g/l、硝酸铵1-2g/l、大豆粕4-5g/l、硫酸镁1-2g/l、磷酸氢二钾3-4g/l；细黄链霉菌的液体培养基为：可溶性淀粉4-5g/l、蔗糖2-3g/l、豆饼粉2-3g/l、磷酸二氢钾0.4-0.5g/l、酵母膏0.3-0.5g/l、七水硫酸镁0.25g/l、氯化钠0.1-0.2g/l，ph＝7.2-7.4。
15、进一步的，所述步骤s2中混合微生物发酵液中各菌种的质量比为枯草芽孢杆菌：巨大芽孢杆菌：蜡样芽孢杆菌：侧孢芽孢杆菌：绿色木霉菌：细黄链霉菌＝(4-5)：(2-3)：(2-3)：(1-2)：(1-2)：1。
16、进一步的，所述改性生物炭的制备工艺如本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中种子培养的具体步骤为：将活化后的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌分别接种划线至种子培养基，在30-37℃、160-180r/min下振荡培养1-2d，形成枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液；将活化后的绿色木霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养2-3d，形成绿色木霉菌种子液；将活化后的细黄链霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养5-7d，形成细黄链霉菌种子液。
3.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S1枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3-5g/L、蛋白胨10-15g/L、氯化钠3-5g/L，pH＝7.2-7.4；绿色木霉菌的种子培养基为：去皮马铃薯200-202g/L、葡萄糖18-
4.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的液体培养基为：葡萄糖10-15g/L、酵母浸粉2-3g/L、硫酸铵1-2g/L、磷酸氢二钾2-3g/L、七水硫酸镁0.1-0.2g/L、氯化钙0.1-0.2g/L、pH＝7.2-7.4；绿色木霉菌的液体培养基为：蔗糖10-15g/L、玉米粉12-13g/L、硝酸铵1-2g/L、大豆粕4-5g/L、硫酸镁1-2g/L、磷酸氢二钾3-4g/L；细黄链霉菌的液体培养基为：可溶性淀粉4-5g/L、蔗糖2-3g/L、豆饼粉2-3g/L、磷酸二氢钾0.4-0.5g/L、酵母膏0.3-0.5g/L、七水硫酸镁0.2-0.3g/L、氯化钠0.1-0.2g/L，pH＝7.2-7.4。
5.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中混合微生物发酵液中各菌种的质量比为枯草芽孢杆菌：巨大芽孢杆菌：蜡样芽孢杆菌：侧孢芽孢杆菌：绿色木霉菌：细黄链霉菌＝(4-5)：(2-3)：(2-3)：(1-2)：(1-2)：1。
6.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中改性生物炭的制备工艺如下：
7.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中改性沸石的制备工艺如下：
8.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中混合微生物发酵液和复合载体的质量比为1：(3-4)。
9.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中微生物菌剂中的有效活菌数为1×109-1×1010CFU/g。
10.根据权利要求1-9任一项所述制备方法制得一种治理土壤的微生物菌剂。
...【技术特征摘要】
1.一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中种子培养的具体步骤为：将活化后的枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌分别接种划线至种子培养基，在30-37℃、160-180r/min下振荡培养1-2d，形成枯草芽孢杆菌种子液、巨大芽孢杆菌种子液、蜡样芽孢杆菌种子液、侧孢芽孢杆菌种子液；将活化后的绿色木霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养2-3d，形成绿色木霉菌种子液；将活化后的细黄链霉菌接种划线至种子培养基，在28-30℃、160-180r/min下振荡培养5-7d，形成细黄链霉菌种子液。
3.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s1枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的种子培养基为：牛肉膏3-5g/l、蛋白胨10-15g/l、氯化钠3-5g/l，ph＝7.2-7.4；绿色木霉菌的种子培养基为：去皮马铃薯200-202g/l、葡萄糖18-20g/l；细黄链霉菌的种子培养基为：可溶性淀粉18-20g/l、硝酸钾1.0-1.5g/l、氯化钠0.3-0.5g/l、硫酸镁0.3-0.5g/l、磷酸氢二钾0.3-0.5g/l，ph＝7.2-7.4。
4.根据权利要求1所述的一种治理土壤的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌的液体培养基为：葡萄糖10-15g/l、酵母浸粉2-3g/l、硫酸铵1-2g...
【专利技术属性】
技术研发人员：王腾，张云峰，刘立谦，刘彦兵，许岩，李宗保，王博，
申请(专利权)人：河北秉天农业科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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