【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、开发治疗性抗体是一个复杂的过程。各种理化和功能负担可能会损害抗体的产生或治疗疗效。本公开提供了适合用于药物开发的抗vista抗体、包含该抗体的药物组合物，以及治疗vista介导的疾病的方法。
2、单克隆抗体是一类主要的生物药品，其适应症目前涵盖从癌症到哮喘等多种疾病，包括中枢神经系统疾患、传染病和心血管疾病。化学稳定性是蛋白质治疗开发中的一个主要问题，因为它对疗效和安全性都有影响，并且与制剂、环境、操作以及蛋白质自身结构等众多因素有关。抗体药物表现出广泛的微小化学变化，包括聚糖结构差异、天冬酰胺(asn)脱酰胺化、天冬氨酸(asp)异构化、蛋氨酸/色氨酸(met/trp)氧化和非酶促赖氨酸(lys)糖化，其中一些可能会影响药物的安全性或疗效。具体地，已知asn和asp残基的降解可以影响体外稳定性和体内生物学功能。虽然这些反应可以通过最终抗体药物产品进行合适储存和配制条件来控制，但发酵、下游加工和体内过程中的降解不能得到充分控制，导致潜在的效力损失和/或清除增加。
3、asn脱酰胺化是一种非常常见的影响重组单克隆抗体的非酶修饰。asn的侧链羰基很容易受到n+1肽键的氮的亲核攻击，从而形成亚稳态的环状琥珀酰亚胺中间体。然后，琥珀酰亚胺中间体水解为asp(α肽键)或iso-asp(β肽键)终产物。据报道，在单克隆抗体中，fc区和互补决定区(cdr)已经有脱酰胺化。cdr区的脱酰胺化可能会影响药物疗效。例如，各种研究已经报道了cdr脱酰胺化可能对靶标结合产生直接影响；参见，例如harris等人jc
4、免疫疗法已成为癌症治疗领域的游戏规则改变者。为了确保一旦肿瘤抗原刺激反应，不会持续活化免疫炎性反应，多个控制或“检查点”就位(in place)或被活化。vista(t细胞活化的v结构域ig抑制子(suppressor))是一种负性检查点控制的蛋白，其调节t细胞的活化和免疫反应。visat是b7家族的成员，该家族包含若干免疫检查点蛋白，如pd-l1。然而，与该家族的成员不同的是，vista包含一个单个不同寻常大的ig样v型结构域。此外，vista胞质尾部结构域包含多个效应蛋白对接位点，表明vista可能同时充当受体和配体发挥作用。
5、人vista有两个已确认的具有免疫抑制功能的结合伴侣：psgl-1和vsig3。vista在生理ph值下与vsig3相互作用，但在酸性ph值下，表达vista的细胞可以与t细胞上的psgl-1结合(wang等人，immunology.156(1):74-85(2019)；johnston等人，nature.574(7779):565-570(2019))。两种相互作用都会导致t细胞功能的抑制。还报道了其他受体，包括vsig8(wo2016/090347a1)和lrig1(wo 2015/187359)。
6、从生理学角度来看，vista在多个层面上对免疫系统发挥调节功能，特别是通过调节t细胞活化。最近，vista被确定为外周t细胞耐受性的最早检查点调节剂，特别是在维持初始t细胞静止方面。在癌症的上下文中，在免疫抑制性肿瘤浸润白细胞(如抑制性调节性t细胞(treg)和髓系来源的抑制细胞(mdsc))中vista上调。在肿瘤微环境中vista的存在会阻碍t细胞的有效反应，并涉及多种人类癌症，包括前列腺癌、结肠癌、皮肤癌、胰腺癌和肺癌。
7、已经描述了几种可以用于治疗癌症的拮抗性抗vista抗体(eltanbouly等人，clinexp immunol.200(2):120-130(2020)；mehta等人，sci rep.10(1):1 5171(2020)；yuan等人，trends immunol.42(3):209-227(2021)；tagliamento等人，immunotargets ther.10:185-200(2021)；thakkar等人，j immunother cancer.10(2):e003382(2022)；wo 2015/097536；wo 2016/094837；wo 2017/181139；wo 2019/183040)。具体地，wo 2016/094837公开了能够抑制vista对抗肿瘤免疫反应的抑制的抗体，从而赋予了保护性抗肿瘤免疫性。然而，该抗体包含几个潜在的可能容易脱酰胺化的asn残基，从而影响药物疗效以及临床和制备开发。因此，需要一种均质、安全且有效的抗vista抗体。
8、与本文描述的那些类似或等同的所有方法和材料都可以用于本专利技术的实践或测试中，其中本文描述了合适的方法和材料。除非另有说明，否则本专利技术的实践采用本领域技术范围内的常规技术或蛋白质化学、分子病毒学、微生物学、重组dna技术和药理学。这样的技术在文献中得到充分阐述(参见，例如，ausubel等人，short protocols in molecularbiology,current protocols；第5版，2002；remington’s pharmaceutical sciences，第17版，mack publishing co.easton,pa.,1985年；和sambrook等人，molecular cloning:alaboratory manual,cold spring harbor laboratory press；第三版，2001年)。本文描述的与分子和细胞生物学、蛋白质生物化学、酶学以及医疗化学和药物化学结合使用的命名法以及实验室程序和技术是本领域公知和通常使用的。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、和其他参考文献通过引用其整体并入本文。此外除非另有说明，否则材料、方法和实施例仅用于阐述目的而并不旨在限制本专利技术。
9、根据以下具体说明和权利要求，本专利技术的其他特征和优势将是显而易见的。
技术实现思路
1、本文提供了以下几个方面：
2、在第一方面，本公开提供特异性结合vista的分离的抗体或其抗原结合片段。该抗体具有本文提供的重链和轻链。具体地，本公开的抗vista抗体在第55位具有天冬氨酸。本文公开的抗vista抗体优选不易脱酰胺化。
3、优选地，抗体是单克隆抗体，更优选人源化的抗体。
4、在另一个方面，抗体与细胞毒性剂缀合以提供抗体-药物缀合物。
5、在另一个方面，本公开提供多核苷酸，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单克隆抗VISTA抗体，其包含由SEQ ID NO:21表示的序列的重链和由SEQ IDNO:22表示的序列的轻链。
2.一种抗体-药物缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体。
3.一种多核苷酸，其选自：
4.一种表达载体，其包含：
5.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的表达载体。
6.一种产生权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体的方法，其包括：
7.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体或权利要求2所述的抗体-药物缀合物，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其包含缓冲剂，优选柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液，更优选组氨酸缓冲液。
9.根据权利要求7或权利要求8中任一项所述的药物组合物，其包含张力调节剂，所述张力调节剂优选选自多元糖醇，例如三元或更高级糖醇，如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇，盐和氨基酸；更优选地，盐选自氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和
10.根据权利要求7至权利要求9中任一项所述的药物组合物，其包含非离子表面活性剂，优选聚山梨酯，例如，聚山梨酯20或聚山梨酯80。
11.根据权利要求7至权利要求10中任一项所述的药物组合物，其包含25mM组氨酸、150mM NaCl、0.3％聚山梨酯80(w/w)，pH 6.5。
12.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于治疗患者的癌症的用途。
13.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求12所述的用途，其中所述用途包括在患者中诱导免疫反应。
14.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体、或权利要求2所述的免疫缀合物、或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求13所述的用途，其中所述免疫反应包括诱导CD4+T细胞增殖、诱导CD8+T细胞增殖、诱导CD4+T细胞产生细胞因子和诱导CD8+T细胞产生细胞因子。
15.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求12至14中任一项所述的用途，其中所述癌症选自膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胆囊癌、胃肠道癌、头颈癌、血癌(例如，白血病、淋巴瘤或骨髓瘤)、喉癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、黑素瘤、间皮瘤、卵巢癌、原发性腹膜癌、唾液腺癌、肉瘤、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌、肾细胞癌、胶质母细胞瘤和前列腺癌。
16.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求12至15中任一项所述的用途，其中所述用途包括活化所述抗体的效应功能。
17.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求12至16中任一项所述的用途，其进一步包括施用第二治疗剂。
18.权利要求1所述的单克隆抗VISTA抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于权利要求17所述的用途，其中所述第二治疗剂是抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体。
19.一种用于检测受试者中VISTA介导的癌症的体外方法，所述方法包括以下步骤：
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述单克隆抗VISTA抗体用可检测标记进行标记。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种单克隆抗vista抗体，其包含由seq id no:21表示的序列的重链和由seq idno:22表示的序列的轻链。
2.一种抗体-药物缀合物，其包含与细胞毒性剂缀合的权利要求1所述的单克隆抗vista抗体。
3.一种多核苷酸，其选自：
4.一种表达载体，其包含：
5.一种宿主细胞，其包含权利要求4所述的表达载体。
6.一种产生权利要求1所述的单克隆抗vista抗体的方法，其包括：
7.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的抗体或权利要求2所述的抗体-药物缀合物，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其包含缓冲剂，优选柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或组氨酸缓冲液，更优选组氨酸缓冲液。
9.根据权利要求7或权利要求8中任一项所述的药物组合物，其包含张力调节剂，所述张力调节剂优选选自多元糖醇，例如三元或更高级糖醇，如甘油、赤藓糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇和甘露糖醇，盐和氨基酸；更优选地，盐选自氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和氯化钙；甚至更优选nacl、mgcl2和/或cacl2。
10.根据权利要求7至权利要求9中任一项所述的药物组合物，其包含非离子表面活性剂，优选聚山梨酯，例如，聚山梨酯20或聚山梨酯80。
11.根据权利要求7至权利要求10中任一项所述的药物组合物，其包含25mm组氨酸、150mm nacl、0.3％聚山梨酯80(w/w)，ph 6.5。
12.权利要求1所述的单克隆抗vista抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物组合物用于治疗患者的癌症的用途。
13.权利要求1所述的单克隆抗vista抗体，或权利要求2所述的免疫缀合物，或权利要求7至10中任一项所述的药物...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·贝克，
申请(专利权)人：皮埃尔法布雷医药公司，
类型：发明
国别省市：
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