【技术实现步骤摘要】
本申请涉及检测试剂盒，尤其涉及一种涎液化糖链抗原化学发光检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
1、涎液化糖链抗原kl-6(krebs von den lungen-6)，是由日本的kohno教授于1985年发现的，通过利用人肺腺癌细胞系(vmrc-lcr)免疫小鼠制备了多株单克隆抗体，其中第6号抗体识别的涎液化糖链抗原被命名为kl-6。kl-6属于分类为cluster9的上皮性粘蛋白1(muc1)，主要表达在ⅱ型肺泡上皮细胞的表面。在正常肺组织和终末细支气管上皮细胞中，kl-6的表达量很少，但在退变的ⅱ型肺泡上皮细胞中表达增强。
2、kl-6对于评估ⅱ型肺泡上皮细胞功能具有特异性。当肺部基底膜受损时，血管通透性会增加，导致kl-6进入血液循环。血清中的kl-6水平可以反映肺泡损伤、ⅱ型肺泡细胞再生以及多种间质性肺疾病的活动度。kl-6水平能够敏感地反映肺泡上皮和间质的损伤程度。近年来的多项研究表明，kl-6高水平的表达可能与间质性肺疾病(ild)、急性肺损伤、放射性肺炎、病毒性肺炎、药物相关性间质性肺炎、肿瘤等疾病相关联。kl-6可能通过促进成纤维细胞的增殖和迁移来影响纤维化的发生和发展。
3、kl-6的水平在肺部疾病患者中通常会升高，特别是在间质性肺病、肺纤维化、肺泡蛋白质沉积症等疾病中。因此，kl-6的检测可以用于评估肺部疾病的严重程度和预后，特别是与间质性肺病(ild)相关的疾病，可以作为诊断和监测这些疾病的一种辅助手段。此外，kl-6的水平也与疾病的预后相关。一些研究表明，kl-6的高水平与疾病的严
4、国内已申请的kl-6检测技术主要为胶乳增强免疫比浊法、化学发光免疫法。
5、胶乳增强免疫比浊法是一种常用的免疫测定方法，用于检测血清或体液中特定抗原或抗体的浓度。该方法结合了免疫比浊法和胶乳增强技术，通过胶乳颗粒与抗原或抗体的结合反应来产生浊度变化，从而间接测定目标物质的浓度。
6、在胶乳增强免疫比浊法中，胶乳颗粒表面覆盖有特定的抗原或抗体。当样本中存在目标物质时，它们会与胶乳颗粒上的抗原或抗体结合形成免疫复合物。这些免疫复合物会导致胶乳颗粒聚集并形成浑浊的溶液。通过测量光学密度或浊度的变化，可以间接反映出目标物质的浓度。胶乳增强免疫比浊法是一种简单且经济高效的方法，不需要复杂的仪器设备。其次，该方法对于大规模样本的处理非常方便，可以同时处理多个样本，提高实验效率。此外，胶乳增强免疫比浊法还具有较高的特异性，可以用于检测低浓度的抗原或抗体。
7、然而，胶乳增强免疫比浊法也存在一些缺点。首先，凝集反应可能受到其他因素的干扰，如溶液的ph值、离子强度和温度等。这些因素可能导致凝集反应的结果不准确。其次，由于胶乳颗粒的大小和形状不一致，会导致测量结果的误差，同时胶乳颗粒的稳定性也是一个问题，它们可能在长时间的储存过程中发生聚集或沉淀，影响实验结果的可靠性。此外，胶乳增强免疫比浊法对于某些特定类型的抗原或抗体可能不敏感，限制了其在某些检测项目的应用。
8、化学发光免疫法一种广泛应用于科学研究和临床诊断的重要工具。它们通过化学反应产生可见光，从而实现对物质的检测和分析。化学发光免疫法具有高灵敏度、宽线性范围以及具有快速反应速度等许多优势，使其成为临床诊断中的首选方法。
9、目前国内已申请的专利使用吖啶酯体系作为化学发光体系，该方法不需要酶的催化，可以直接进行化学发光，无需额外的酶反应步骤，标记过程相对简单，吖啶酯发光时间较短，能够在较短的时间内完成发光过程，但化学发光吖啶酯在一定浓度下可能具有一定的毒性，需要注意安全使用和处理，吖啶酯在光照射下容易发生光漂白，导致信号衰减、稳定性较差，同时仪器设备昂贵，不适合基层社区医院使用。
10、故需要提供一种涎液化糖链抗原化学发光检测试剂盒以解决上述技术问题。
技术实现思路
1、本申请提供了一种涎液化糖链抗原化学发光检测试剂盒及其制备方法，以解决现有胶乳增强免疫比浊法灵敏度不足技术问题。
2、第一方面，本专利技术提供了一种涎液化糖链抗原测定试剂盒，所述试剂盒包括生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体的摩尔比是0.1:1-1:0.1；
3、所述试剂盒中还包括壳聚糖季铵盐衍生物。
4、可选的，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中链霉亲和素磁珠和生物素标记抗体的摩尔比是0.05:1-1:0.05。
5、可选的，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中磁珠的尺寸为0.5μm～5μm。
6、可选的，所述碱性磷酸酶标记抗体的质量浓度是0.1μg/ml-10μg/ml。
7、可选的，所述壳聚糖季铵盐衍生物包括羧甲基壳聚糖季铵盐，羟丙基壳聚糖季铵盐和羟乙基壳聚糖季铵盐。
8、第二方面，基于同一个专利技术构思，本专利技术还提供了第一方面中所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒的制备方法，包括：
9、制备生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠；
10、制备碱性磷酸酶标记抗体；
11、分别组装所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和所述碱性磷酸酶标记抗体，得到涎液化糖链抗原测定试剂盒。
12、可选的，所述制备生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠，包括以下步骤：
13、配置链霉亲和素磁珠母液；
14、配置生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液；
15、将所述磁珠母液添加至所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液中，采用含稳定剂的缓冲液稀释至第一预设目标浓度。
16、可选的，所述第一预设目标浓度为10mg/ml。
17、可选的，所述配置生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液，包括以下步骤：
18、采用标记缓冲液配置抗体缓冲液；
19、配置生物素母液；
20、将所述抗体缓冲液与所述生物素母液混合标记，加入含稳定剂的缓冲液稀释至第二预设目标浓度，得到生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液。
21、可选的，所述生物素母液的浓度为0.5mg/ml～20mg/ml。
22、可选的，所述第二预设目标浓度为0.5mg/ml。
23、可选的，所述制备碱性磷酸酶标记抗体，包括以下步骤：
24、采用标记缓冲液配置抗原缓冲液；
25、3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯溶液与抗体缓冲液进行反应，后加入还原剂还原，得到含游离巯基的抗原；
26、对碱性磷酸酶进行活化，得到活化的碱性磷酸酶；
27、将所述活化的碱性磷酸酶和所述含游离巯基的抗体按照摩尔比1：1进行反应，后进行封闭反应，再采用含稳定本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体的摩尔比是0.1:1～1:0.1；
2.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中链霉亲和素磁珠和生物素标记抗体的摩尔比是0.05:1～1:0.05。
3.根据权利要求1或2所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中磁珠的尺寸为0.5μm～5μm。
4.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记抗体的质量浓度是0.1μg/mL～10μg/mL。
5.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述壳聚糖季铵盐衍生物包括羟乙基壳聚糖季铵盐、羧甲基壳聚糖季铵盐和羟丙基壳聚糖季铵盐。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述的涎
8.根据权利要求6所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述配置生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠稀释液，包括以下步骤：
9.根据权利要求7所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备碱性磷酸酶标记抗体，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述还原剂为三(2-羧乙基)膦溶液；和/或，
...【技术特征摘要】
1.一种涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠和碱性磷酸酶标记抗体的摩尔比是0.1:1～1:0.1；
2.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中链霉亲和素磁珠和生物素标记抗体的摩尔比是0.05:1～1:0.05。
3.根据权利要求1或2所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述生物素标记抗体-链霉亲和素包被磁珠中磁珠的尺寸为0.5μm～5μm。
4.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原测定试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记抗体的质量浓度是0.1μg/ml～10μg/ml。
5.根据权利要求1所述的涎液化糖链抗原...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄丹，来祥兵，孔亚辉，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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