【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学，涉及一种检测人微卫星不稳定性的生物标志物及其应用。
技术介绍
1、微卫星(microsatellite)又称短串联重复序列(short tandem repeats,strs)、简单重复序列，由1～6个核苷酸组成，具有高度多态性，广泛存在于原核及真核生物基因组中。由于高度可变性，微卫星在人群中趋于变化，因此被广泛用作分子标记、连锁作图、谱系作图和基因型鉴定的目的。人类基因组中大约3％的区域含有微卫星序列，具有单核苷酸重复序列特征，其中poly(a/t)片段最为丰富。微卫星突变率位点间差别很大，每个位点的变异范围在10-6～10-2之间，同时微卫星变异的倾向随着重复数增加而变大。
2、微卫星不稳定性(microsatellite instability,msi)是指由于复制错误(replication errors,rer)引起的微卫星长度发生改变。其发生主要是参与配对错误修复(mismatch repair,mmr)的基因功能缺陷而产生一种缺陷蛋白质，因而不能正常的校正复制错误，从而引起微卫星的改变，使其不能正常地发挥调控作用，导致细胞增殖及分化异常，促发恶性肿瘤形成。msi现象于1993年被jacobs等人在结直肠癌中首次发现，与癌症发生有关，可用于癌症检测。
3、目前msi标志物检测主要有pcr-毛细管电泳法检测msi标志物，ihc检测错配修复蛋白表达情况和ngs检测msi标志物三种方法。其中，多重荧光pcr-毛细管电泳法检测msi状态是国际公认的金标准，nccn、asco等
4、综上所述，目前检测msi状态的方法均存在较明显的缺陷，因此亟需提供一种检测准确度高、检测平台通用、检测成本低廉、检测周期短的检测方法用于msi状态的确认。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种检测人微卫星不稳定性的生物标志物及其应用，能够精准检测人群的微卫星(ms)状态，无需对照样本，检测成本低，操作简便，检测平台通用性高，灵敏度高，最低检测限可低至1％，显著高于市面常规检测试剂盒。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种检测人微卫星不稳定性的生物标志物，所述生物标志物包括：第一标志物、第二标志物、第三标志物、第四标志物、第五标志物、第六标志物、第七标志物、第八标志物、第九标志物、第十标志物、第十一标志物、第十二标志物、第十三标志物、第十四标志物或第十五标志物中的任意一种；
4、所述第一标志物含有11个连续t的同聚物重复，定位在人sdhc基因，起始位置为chr1:161,309,336；所述第一标志物的核酸序列包括如seq id no.1所示的序列；
5、所述第二标志物含有12个连续a的同聚物重复，定位在人cop1基因，起始位置为chr1:176,105,711；所述第二标志物的核酸序列包括如seq id no.2所示的序列；
6、所述第三标志物含有11个连续a的同聚物重复，定位在人mre11基因，起始位置为chr11:94,212,931；所述第三标志物的核酸序列包括如seq id no.3所示的序列；
7、所述第四标志物含有8个连续a的同聚物重复，定位在人acvr2a基因，起始位置为chr2:148,683,686；所述第四标志物的核酸序列包括如seq id no.4所示的序列；
8、所述第五标志物含有12个连续t的同聚物重复，定位在人blm基因，起始位置为chr15:91,303,326；所述第五标志物的核酸序列包括如seq id no.5所示的序列；
9、所述第六标志物含有14个连续a的同聚物重复，定位在人tgfbr2基因，起始位置为chr3:30,691,872；所述第六标志物的核酸序列包括如seq id no.6所示的序列；
10、所述第七标志物含有12个连续a的同聚物重复，定位在人pbrm1基因，起始位置为chr3:52,676,066；所述第七标志物的核酸序列包括如seq id no.7所示的序列；
11、所述第八标志物含有12个连续t的同聚物重复，定位在人braf基因，起始位置为chr7:140,421,096；所述第八标志物的核酸序列包括如seq id no.8所示的序列；
12、所述第九标志物含有12个连续a的同聚物重复，定位在人ptprd基因，起始位置为chr9:8,341,281；所述第九标志物的核酸序列包括如seq id no.9所示的序列；
13、所述第十标志物含有10个连续t的同聚物重复，定位在人pold1基因，起始位置为chr19:50,911,948；所述第十标志物的核酸序列包括如seq id no.10所示的序列；
14、所述第十一标志物含有13个连续t的同聚物重复，定位在人suz12基因，起始位置为chr17:30,293,150；所述第十一标志物的核酸序列包括如seq id no.11所示的序列；
15、所述第十二标志物含有13个连续a的同聚物重复，定位在人sf3b1基因，起始位置为chr2:198,267,244；所述第十二标志物的核酸序列包括如seq id no.12所示的序列；
16、所述第十三标志物含有11个连续a的同聚物重复，定位在人pbrm1基因，起始位置为chr3:52,696,311；所述第十三标志物的核酸序列包括如seq id no.13所示的序列；
17、所述第十四标志物含有11个连续a的同聚物重复，定位在人sesn1基因，起始位置为chr6:1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测人微卫星不稳定性的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括：第一标志物、第二标志物、第三标志物、第四标志物、第五标志物、第六标志物、第七标志物、第八标志物、第九标志物、第十标志物、第十一标志物、第十二标志物、第十三标志物、第十四标志物或第十五标志物中的任意一种；
2.权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括第一标志物、第二标志物、第三标志物、第四标志物、第五标志物、第六标志物、第七标志物、第八标志物、第八标志物、第九标志物、第十标志物、第十一标志物、第十二标志物、第十三标志物、第十四标志物或第十五标志物中的任意6-9个的组合。
3.权利要求1或2所述的生物标志物及其检测试剂在制备检测人微卫星不稳定性的产品中的应用。
4.一种检测人微卫星不稳定性的方法，其特征在于，所述方法包括：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述引物包括限制性引物和过量引物；
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述扩增包括多重扩增；
7.一种检测人微卫星不稳定性的试剂盒，其特征在于，所述
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括用于扩增权利要求1或2所述的生物标志物的引物和分子信标；所述引物包括限制性引物和过量引物；
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述分子信标的核酸序列包括如SEQID NO.46-SEQ ID NO.60所示的序列；
10.根据权利要求7-9任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述分子信标的5’端标记有荧光发生基团，3’端标记有荧光淬灭基团；
...【技术特征摘要】
1.一种检测人微卫星不稳定性的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括：第一标志物、第二标志物、第三标志物、第四标志物、第五标志物、第六标志物、第七标志物、第八标志物、第九标志物、第十标志物、第十一标志物、第十二标志物、第十三标志物、第十四标志物或第十五标志物中的任意一种；
2.权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括第一标志物、第二标志物、第三标志物、第四标志物、第五标志物、第六标志物、第七标志物、第八标志物、第八标志物、第九标志物、第十标志物、第十一标志物、第十二标志物、第十三标志物、第十四标志物或第十五标志物中的任意6-9个的组合。
3.权利要求1或2所述的生物标志物及其检测试剂在制备检测人微卫星不稳定性的产品中的应用。
4.一种检测人微卫星不稳定性的方法，其特征在于，所述方...
【专利技术属性】
技术研发人员：辛秋红，王洁，张亚飞，王方杰，葛如琴，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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