【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物检测，尤其涉及一种单胺氧化酶的检测试剂及制备方法、试剂盒。
技术介绍
1、单胺氧化酶(mao)临床上主要用于肝纤维化的辅助诊断，其活性的高低能反映肝脏纤维化的程度，而与肝脏纤维化相关的疾病有肝硬化、急性重型肝炎、活动性慢性肝炎、糖尿病和甲亢等。一般肝硬化患者血清mao活性升高的阳性率可达80％以上；虽然各型肝炎急性期患者的血清mao活性多不升高，但急性重型肝炎时因肝细胞坏死，线粒体释放大量mao，可导致血清mao活性升高，并且急性肝炎病程超过3个月后，患者血清中mao活性亦升高；活动性慢性肝炎约半数患者血清mao活性升高；糖尿病可因合并脂肪肝、充血性心力衰竭，或因肝淤血而继发肝硬化时，血清mao的活性会升高；甲亢可因纤维组织分解与合成旺盛、肢端肥大可因纤维组织过度合成等原因，会导致血清mao活性不同程度升高。
2、单胺氧化酶测定试剂盒(速率法)运用的检测原理是血清中的单胺氧化酶(mao)会催化试剂中的苄胺生成氨，并且氨生成的速率与单胺氧化酶的活性呈正相关，而生成的氨在谷氨酸脱氢酶(gldh)的作用下与α-酮戊二酸反应，生成谷氨酸，同时消耗试剂中的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nadh)生成nad+，这表明nadh消耗的速率与氨生成的速率呈正相关，即nadh与单胺氧化酶的活性呈正相关，由于nadh在340nm处具有吸收峰，通过测定340nm波长处吸光度的变化率可以计算出样本中mao的活性。
3、目前市场上的单胺氧化酶测定试剂盒大部分都是单试剂或者双试剂，但大多没有提前将样本中的血氨清除掉，然而在单胺氧
技术实现思路
1、本申请提供了一种单胺氧化酶的检测试剂及制备方法、试剂盒，以解决现有技术中单胺氧化酶测定试剂盒难以兼顾清除氨的干扰和改善试剂盒的线性范围差、稳定性差、精密度差的技术问题。
2、第一方面，本申请提供了一种单胺氧化酶的检测试剂，所述检测试剂包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括血氨清除剂、第一螯合剂、金属盐、第一表面活性剂和保护剂，所述第二试剂包括第二螯合剂、第二表面活性剂和苄胺，其中，
3、所述保护剂包括以下至少一种：
4、葡聚糖10、甘露醇和二磷酸腺苷-钾。
5、可选的，所述血氨清除剂包括谷氨酸脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和α-酮戊二酸。
6、可选的，所述谷氨酸脱氢酶的质量浓度为3.0ku/l～10.0ku/l；和/或，
7、所述α-酮戊二酸的质量浓度为1.0g/l～5.0g/l；和/或，
8、所述烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的质量浓度为0.2g/l～0.5g/l。
9、可选的，所述苄胺的摩尔浓度为10mmol/l～50mmol/l。
10、可选的，所述第一螯合剂和所述第二螯合剂分别包括以下至少一种：
11、n-(2-羟乙基)-亚乙基二氨-三乙酸、乙二胺四乙酸、乙二醇二乙醚二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钾和乙二胺四乙酸二钠。
12、可选的，所述金属盐包括以下至少一种：
13、nacl、kcl和mgcl2。
14、可选的，所述第一表面活性剂和所述第二表面活性剂分别包括以下至少一种：
15、表面活性剂s9、泊洛沙姆月桂酸酰胺丙基甜菜碱和十二烷基羟磺基甜菜碱。
16、可选的，所述第一螯合剂和所述第二螯合剂的质量浓度分别为2.0g/l～4.0g/l；和/或，
17、所述金属盐的质量浓度为5.0g/l～20.0g/l；和/或，
18、所述第一表面活性剂和所述第二表面活性剂的质量浓度分别为2.0g/l～10.0g/l。
19、可选的，所述保护剂包括葡聚糖10、甘露醇和二磷酸腺苷-钾，所述葡聚糖10的质量浓度为5.0g/l～20.0g/l，所述甘露醇的质量浓度为5.0g/l～20.0g/l，所述二磷酸腺苷-钾的质量浓度为0.5g/l～2.0g/l。
20、可选的，所述第一试剂和所述第二试剂还分别包括缓冲液，所述缓冲液的摩尔浓度为25mmol/l～100mmol/l；所述缓冲液包括以下至少一种：
21、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸、n-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙烷磺酸、n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-乙磺酸和哌嗪-1,4-二羟基丙磺酸。
22、第二方面，本申请提供了一种制备第一方面所述的检测试剂的方法，所述方法包括：
23、混合谷氨酸脱氢酶、α-酮戊二酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，得到血氨清除剂；
24、混合缓冲液、螯合剂、表面活性剂、金属盐、保护剂和所述血氨清除剂，得到第一试剂；
25、混合缓冲液、苄胺、螯合剂和表面活性剂，得到第二试剂；
26、分别组装第一试剂和第二试剂，得到检测试剂。
27、第三方面，本申请提供了一种单胺氧化酶的检测试剂盒，所述检测试剂盒包括第一方面所述的检测试剂。
28、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
29、本申请实施例提供的一种单胺氧化酶的检测试剂，通过在传统的单胺氧化酶测定试剂盒中设计双试剂组分，通过在第一试剂中加入血氨清除剂，以此在第一试剂进行反应之前可以通过血氨清除剂提前将氨杂质彻底清除，进而明显提高了检测试剂的抗氨干扰能力，再在第一试剂中加入第一螯合剂和金属盐以及第二试剂中加入第二螯合剂，利用第一螯合剂和第二螯合剂的螯合效果，配合金属盐成分，可以清除样本中杂质，进而提高第一试剂和第二试剂的检测灵敏性，再在第一试剂中加入第一表面活性剂和第二试剂中加入第二表面活性剂，可以通过表面活性剂使得检测试剂的各成分与样本中待测物质分散并混合均匀，进而提高检测试剂的低值精密度和线性范围，再在第一试剂中加入保护剂，可以增强单胺氧化酶检测过程的稳定性，因此可以有效的提高单胺氧化酶测定过程中于37℃的热破稳定性和于42℃的震荡稳定性，因此通过设计包括血氨清除剂、第一螯合剂、金属盐、第一表面活性剂和保护剂的第一试剂，以及包括第二螯合剂、第二表面活性剂和苄胺的第二试剂，可以在消除血氨干扰的同时改善试剂盒的线性范围、稳定性和精密度。
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1.一种单胺氧化酶的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括血氨清除剂、第一螯合剂、金属盐、第一表面活性剂和保护剂，所述第二试剂包括第二螯合剂、第二表面活性剂和苄胺，其中，
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述血氨清除剂包括谷氨酸脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和α-酮戊二酸。
3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶的质量浓度为3.0kU/L～10.0kU/L；和/或，
4.根据权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述苄胺的摩尔浓度为10mmol/L～50mmol/L。
5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一螯合剂和所述第二螯合剂分别包括以下至少一种：
6.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述金属盐包括以下至少一种：
7.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一表面活性剂和所述第二表面活性剂分别包括以下至少一种：
8.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一螯合剂和所述第二螯合剂的质
9.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述保护剂包括葡聚糖10、甘露醇和二磷酸腺苷-钾，所述葡聚糖10的质量浓度为2.0g/L～20.0g/L，所述甘露醇的质量浓度为2.0g/L～20.0g/L，所述二磷酸腺苷-钾的质量浓度为0.5g/L～2.0g/L。
10.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一试剂和所述第二试剂还分别包括缓冲液，所述缓冲液的摩尔浓度为25mmol/L～100mmol/L；所述缓冲液包括以下至少一种：
11.一种制备如权利要求1-10任一项所述的检测试剂的方法，其特征在于，所述方法包括：
12.一种单胺氧化酶的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求1-10任一项所述的检测试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种单胺氧化酶的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂包括血氨清除剂、第一螯合剂、金属盐、第一表面活性剂和保护剂，所述第二试剂包括第二螯合剂、第二表面活性剂和苄胺，其中，
2.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述血氨清除剂包括谷氨酸脱氢酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和α-酮戊二酸。
3.根据权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶的质量浓度为3.0ku/l～10.0ku/l；和/或，
4.根据权利要求3所述的检测试剂，其特征在于，所述苄胺的摩尔浓度为10mmol/l～50mmol/l。
5.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一螯合剂和所述第二螯合剂分别包括以下至少一种：
6.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述金属盐包括以下至少一种：
7.根据权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述第一表面活性剂和所述第...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁艳，华权高，赵畅，龚婷，胡庆娆，彭彬，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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