【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及检测领域，尤其涉及一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法。
技术介绍
1、食用油脂是食品工业的主要原料之一,也是人体所需三大产能物质之一。结构脂质也称结构脂,是一种通过改变甘油骨架上直接相连的脂肪酸的组成和位置分布而具有不同功能的甘油三酯，具有特殊的代谢方式、营养价值和理化性能,可最大化发挥油脂的营养性和功能性,在食品、医药等领域应用潜力巨大。
2、结构脂质最早是通过化学法合成,多采用酯化反应或酯交换反应获得相应的目标产物,再通过物理手段(如结晶、蒸馏)提纯获得高纯度的结构脂质。近年来,随着生物工程技术的发展,酶法合成结构脂质越来越受到关注,与传统的物理、化学方法不同的是,酶法反应条件温和、具有选择性，为结构脂质的合成提供了更有效的手段。酶法合成结构脂质有酯化法、酯交换法、酸解法、二步法，其中酯化法多用于合成单酯和二酯,合成甘油三酯时需采用分子蒸馏、结晶等分离纯化手段，工艺相对复杂。
3、甘油三酯的酶解产物主要有甘油二酯（dag）、甘油一酯(mag)、脂肪酸（ffa）、甘油，从国内外文献报道来看,目前分离甘油三酯水解产物中的单甘酯各组分主要用薄层色谱法完成。薄层色谱法需要采用硅胶g制备薄层板,用一定比例展开剂对水解产物进行分离,分离完成后还需要对薄层板显色,刮取硅胶,用有机溶剂提取单甘酯。这一过程比较复杂,而且操作水平影响分离、提取效果。而固相萃取法具有有机溶剂消耗小、富集倍数高、对环境的污染小、能有效地进行样品纯化和干扰组分的预分离、便于样品的保存、操作简便,便于批量样品处理、速
4、如申请号为cn202011096697.9的中国专利技术专利，公开了一种检测食用植物油中缩水甘油及缩水甘油二酯的快速检测方法，包括通过将样品离心，酸化反应、再次离心和衍生化反应，最后放入gc-ms检测分析，定量。虽然与本专利技术均是检测植物油中的成分，但具体成分缩水甘油二酯和甘油二酯结构及其作用完全不同：该申请中的缩水甘油二酯具有基因毒性，使用后能引发恶性肿瘤的形成，因此是潜在的不安全因素，国际癌症研究机构(iarc)将其定为2a级致癌物，同时其被德国油脂科学学会定义其为2类致癌物，缩水甘油二酯在植物油中存在量比较小，具有一定的热不稳定性；而本申请中的甘油二酯具有特殊的代谢方式、营养价值和理化性能,可最大化发挥油脂的营养性和功能性,在食品、医药等领域应用潜力巨大，具体包括提供热量，帮助人体吸收维生素和氨基酸等，提高营养物质吸收能力，是对人体有益的物质；因此研究对象为两个理化性质完全不同的物质。其次该申请更着重于缩水甘油二酯的定量分析，而本申请更着重于甘油二酯的定性分析，且分离过程也完全不同。
5、目前的市面上对于甘油二酯的具体分离的有效性和快捷性，以及通过三重四级杆对于快速甘油二酯快速精准定性分析的方法少之又少。
6、有鉴于此，确有必要提供一种解决上述技术问题的技术方案。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，所述分离有效且便捷的同时，通过三重四级杆能过对甘油二酯进行快速精准的定性分析。
2、本专利技术解决其技术问题采用以下技术方案：
3、一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
4、s1：取得植物油用正己烷溶解，得到样品备用；用正己烷对填料进行平衡，得到固相萃取小柱；
5、s2：将步骤s1中的样品控制流速，加入固相萃取小柱；并用不同配比的洗脱液淋洗固相萃取柱，得到洗脱物收集洗脱液吹干备用；
6、s3：将步骤s2中的洗脱物加入正己烷复溶，混匀后将洗脱样品点样，置于层析缸中展开剂薄层层析，得到显色结果；将所述洗脱液通过羟基硅烷化进行衍生化处理得到gc分析得到gc色谱图；
7、s4：将步骤s3中分离的洗脱物通过gc-ms进行定性检测，洗脱物在毛细管柱上分离，以氦气为载气，流速为1-3ml/min；设置开始温度为150-300℃，保持时间为1-4min；以5-20℃/min的升温速度上升至250-450℃，保持时间为2-5min；再以5-15℃/min上升至300-350℃，保持时间为15-20min；进样器温度为250-400℃，分流比为（15-30）：（1-2），进样量为0.5-3μl；ms设置包括以70ev的电子冲击电离作为离子源，收集分析200-650m/z范围内的离子，发射电流为60-80μa，分析得出洗脱物组分性质。
8、作为一种优选方案，步骤s1中，称取植物油质量为20-100mg，所述样品用正己烷溶解的质量浓度控制在5mg/ml-50mg/ml。
9、作为一种优选方案，步骤s1中，所述填料包括氧化铝、硅胶和弗罗里硅土中的一种；所述正己烷的体积为填料的3-10倍进行柱子平衡。
10、作为一种优选方案，步骤s2中，所述流速为1-5ml/min，所述样品体积为固相萃取小柱内的填料体积的0.5-1倍。
11、作为一种优选方案，步骤s2中，所述淋洗液淋洗分离包括通过100%正己烷洗脱得到甘油三酯；通过正己烷和乙酸乙酯比值为（25-85）：（15-75）洗脱得到甘油二酯。
12、作为一种优选方案，步骤s2中，所述洗脱物包括甘油二酯洗脱物和甘油三酯洗脱物，所述甘油二酯洗脱物分别通过两根柱子洗脱得到。
13、作为一种优选方案，步骤s3中，所述洗脱物加入正己烷复溶的质量浓度控制在10mg/ml-30mg/ml；所述展开剂为正己烷、无水乙醚和冰醋酸的比值为（40-50）:（50-55）：（1-2）。
14、作为一种优选方案，步骤s3中，所述gc分析仪器包括agilent6890型气相色谱仪，fid检测器；色谱柱选用db-5ht，15m×0.25mm×0.1μm；进样量为1μl；分流比20：1；程序初始温度为120℃，持续1min；以升温速率20℃/min升温至300℃，保持3min；以升温速率10℃/min升温至380℃，保持10min，得到所述gc色谱图。
15、作为一种优选方案，步骤s3中，所述衍生化处理步骤为：
16、s11：将步骤s2中的洗脱物溶与吡啶，振荡1-2s，得到混合物；衍生化试剂包括bstfa、tmcs；
17、s12：将衍生化试剂加入混合物中混匀，置于温度为70℃的恒温箱反应30min，完成衍生化反应。
18、作为一种优选方案，步骤s4中，将步骤s3中分离的洗脱液通过gc-ms进行定性检测，洗脱液在毛细管柱上分离，以氦气为载气，流速为1ml/min；设置开始温度为200℃，保持时间为1min；以20℃/min的升温速度上升至300℃，保持时间为3min；再以10℃/min上升至320℃，保持时间为19min；进样器温度为300℃，分本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S1中，称取植物油质量为20-100 mg，所述样品用正己烷溶解的质量浓度控制在5mg/mL-50mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述填料包括氧化铝、硅胶和弗罗里硅土中的一种；所述正己烷的体积为填料的3-10倍进行柱子平衡。
4.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述流速为1-5 mL/min，所述样品体积为固相萃取小柱内的填料体积的0.5-1倍。
5.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述淋洗液淋洗分离包括通过100%正己烷洗脱得到甘油三酯；通过正己烷和乙酸乙酯比值为（25-85）：（15-75）洗脱得到甘油二酯。
6.根据权利要求1所述的一种分离植物油
7.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述洗脱物加入正己烷复溶的质量浓度控制在10 mg/mL-30 mg/mL；所述展开剂为正己烷、无水乙醚和冰醋酸的比值为（40-50）:（50-55）：（1-2）。
8.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述GC分析仪器包括Agilent6890型气相色谱仪，FID检测器；色谱柱选用DB-5HT，15 m×0.25 mm×0.1μm；进样量为1μL；分流比20：1；程序初始温度为120℃，持续1 min；以升温速率20℃/min升温至300℃，保持3 min；以升温速率10℃/min升温至380℃，保持10 min，得到所述GC色谱图。
9.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述衍生化处理步骤为：
10.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤S4中，将步骤S3中分离的洗脱液通过GC-MS进行定性检测，洗脱液在毛细管柱上分离，以氦气为载气，流速为1 mL/min；设置开始温度为200℃，保持时间为1 min；以20℃/min的升温速度上升至300℃，保持时间为3 min；再以10℃/min上升至320℃，保持时间为19 min；进样器温度为300℃，分流比为20：1，进样量为1μL；MS设置包括以70eV的电子冲击电离作为离子源，收集分析200-650m/z范围内的离子，发射电流为80μA，分析得出洗脱物组分性质。
...【技术特征摘要】
1.一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s1中，称取植物油质量为20-100 mg，所述样品用正己烷溶解的质量浓度控制在5mg/ml-50mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s1中，所述填料包括氧化铝、硅胶和弗罗里硅土中的一种；所述正己烷的体积为填料的3-10倍进行柱子平衡。
4.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s2中，所述流速为1-5 ml/min，所述样品体积为固相萃取小柱内的填料体积的0.5-1倍。
5.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s2中，所述淋洗液淋洗分离包括通过100%正己烷洗脱得到甘油三酯；通过正己烷和乙酸乙酯比值为（25-85）：（15-75）洗脱得到甘油二酯。
6.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s2中，所述洗脱物包括甘油二酯洗脱物和甘油三酯洗脱物，所述甘油二酯洗脱物分别通过两根柱子洗脱得到。
7.根据权利要求1所述的一种分离植物油中的甘油二酯及其定性分析的检测方法，其特征在于，步骤s3中，所述洗脱物加入正己烷复溶的质量浓度控制在...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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