【技术实现步骤摘要】
技术介绍
技术实现思路
1、本公开内容提供基因治疗方法，例如组合基因治疗方法，以提供或调控一种或多种内源蛋白质。本公开内容提供了使用基因疗法治疗或预防年龄相关疾病和病症或衰老表型的方法。本公开内容提供了对基因的鉴定，所述基因与可能与衰老关联的某些疾病和病症相关。本公开内容提供对这些基因的调控，通过增加与基因相关的蛋白质或减少与基因相关的蛋白质来实现。本公开内容提供了通过引入在细胞内表达的功能性蛋白质的编码核酸来增加与基因相关的功能性蛋白质。所述表达导致功能性蛋白质的量增加，所述功能性蛋白质可以是细胞内的或分泌的，从而提供治疗效果或预防效果。本专利技术提供了基因的抑制，从而通过引入编码抑制性rna的核酸来减少与基因相关的功能性蛋白，所述抑制性rna在表达时与基因或信使rna结合以抑制功能性蛋白质的表达。本公开提供了功能性蛋白质的抑制，从而通过引入编码蛋白质抑制剂(例如可溶性受体蛋白质)的核酸来降低功能性蛋白质的活性，所述蛋白质抑制剂在表达时与功能性蛋白质结合。本公开内容提供了使用靶向动物细胞的遗传构建体的基因治疗方法，以及使用载体(例如病毒载体)对此类遗传构建体的递送。本公开内容提供了使用靶向动物细胞的遗传构建体的基因治疗方法，以及使用诸如脂质体、合成或天然存在的聚合物、电穿孔、涂覆或未涂覆的纳米颗粒递送、扩散粒子递送、激光介导转染(光穿孔或光转染)等方法对此类遗传构建体的递送。参见例如kim，t.k.等，(2010)analytical and bioanalytical chemistry
2、调控或提供与年龄相关疾病和病症关联的某些蛋白质提供了预防方法或治疗方法以解决年龄相关疾病和病症。调控或提供与年龄相关疾病和病症关联的某些蛋白质或基因或基因产物或编码该基因的dna或对应于该基因的mrna或对应于该基因的经加工的初-mrna或mirna提供了使包括人和其他哺乳动物在内的生物体恢复活力的方法。本公开提供了基因治疗方法，其中将一个或多个或多种核酸(例如基因)递送至动物中的一种或多种靶细胞。本公开内容使用单一载体向细胞递送多种核酸，所述核酸包括驱动其表达的单一启动子。表达一个或多个或多种核酸以产生一种或多种相应的蛋白质，并且一种或多种蛋白质改变生物体的病症。本公开提供了组合疗法，其中不同细胞类型被动物中的一个或多个或多种核酸靶向。
3、本公开提供了组合疗法，其中细胞内的一种或多种细胞过程被一个或多个或多种核酸靶向。本公开内容提供了使用病毒载体(例如细小病毒的病毒粒子)的基因治疗。本公开内容提供了使用病毒载体(例如腺相关病毒(“aav”))的基因治疗。腺相关病毒将外源基因插入细胞中，并且由外源基因编码的蛋白质将会表达。以这种方式，蛋白质，无论是功能性蛋白质、抑制性rna还是抑制性蛋白质，都会改变细胞和/或携带细胞的生物体。
4、本公开内容提供了与年龄相关疾病或病症的减缓，抑制，预防或逆转。示例性的年龄相关或其他疾病或病症包括心血管疾病，糖尿病，动脉粥样硬化，肥胖症，癌症，感染和神经障碍中的一种或多种。本公开提供了长期基因疗法以治疗和/或预防年龄相关疾病或病症或其他疾病或病症。这些方法包括逆转年龄相关疾病和病症，并纠正这些病理状态，从而提高健康寿命(良好生活质量的年数)和寿命。
5、本公开内容提供了用于鉴定待调控的基因或基因的集的方法，所述基因或基因的集预防或治疗一种或多种疾病或病症，例如与衰老相关的疾病或病症。基因或基因的集被鉴定为与年龄相关疾病或病症有关。确定基因与特定组织类型相关或不相关，从而可以确定使用所需方法对基因的适当调控。另外，与特定组织类型相关的基因可受益于使用特定载体的调控，所述特定载体向特定组织类型细胞递送核酸，抑制性rna或抑制性蛋白质以调控特定组织类型细胞内蛋白质的量或活性。组织特异性启动子可用于表达核酸。
6、编码特定功能蛋白，抑制性rna或抑制性蛋白的示例性核酸在附录a中提供，其序列在附录a中提供或者是文献中容易知道或可获得的。同样，功能性蛋白质，抑制性rna或抑制性蛋白质的序列是本领域技术人员已知的，或者可以源自核酸序列。附录b包括基因的小鼠版本的dna和氨基酸序列以及靶向多种rna种类的初-mirna(pri-mirna)dna构建体。
7、如本文所述的功能性蛋白质可以是全长蛋白质或是与全长蛋白质不同但保留全长蛋白质的全部或部分活性的蛋白质。
8、本专利技术的某些实施方式的其他特征和优势将在权利要求中以及以下附图和实施方式的说明下更为显而易见。
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1.一种病毒载体，包含：
2.如权利要求1所述的病毒载体，其中第一调控序列包括第一启动子，其中第一启动子是组成型启动子或诱导型启动子。
3.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中第一调控序列包括选自以下的第一启动子：heFla启动子、CAGGS(巨细胞病毒、鸡β-肌动蛋白内含子、兔β-珠蛋白基因的剪接受体)、CMV、shEfla(截短的hEfla)、AAT启动子、甲状腺激素结合球蛋白启动子、白蛋白启动子、甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子、肝控制区(HCR)-ApoCII混合启动子、CASI、HCR-hAAT混合启动子和与小鼠白蛋白基因增强子(Ealb)元件和载脂蛋白E启动子组合的AAT启动子。
4.如权利要求1至4中任一项所述的病毒载体，其中所述基因是FGF21、Klotho或sTGFbR2-FC。
5.如权利要求1至4中任一项所述的病毒载体，其中第一核酸序列序列与第一3′非翻译区操作性连接，用于RNA在哺乳动物细胞中的稳定性和表达。
6.如权利要求5所述的病毒载体，其中第一3′非翻译区包含第一组织特异性miRNA结合序
7.如权利要求6所述的病毒载体，其中第一组织特异性miRNA结合序列包含第一mir122a组织特异性miRNA结合序列，以阻止在肝细胞中表达。
8.如权利要求5至7中任一项所述的病毒载体，其中第一3′非翻译区包含选自以下的聚腺苷酸化信号：WPRE，WPRE3，SV40后聚腺苷酸化信号(截短的SEQ ID：114)，HBG聚腺苷酸化信号，兔β珠蛋白聚A，牛bgpA和ETC聚腺苷酸化信号或它们的混合体。
9.如权利要求1-8中任一项所述的病毒载体，其中所述病毒载体是细小病毒载体。
10.如权利要求9所述的病毒载体，其中所述细小病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。
...【技术特征摘要】
1.一种病毒载体，包含：
2.如权利要求1所述的病毒载体，其中第一调控序列包括第一启动子，其中第一启动子是组成型启动子或诱导型启动子。
3.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中第一调控序列包括选自以下的第一启动子：hefla启动子、caggs(巨细胞病毒、鸡β-肌动蛋白内含子、兔β-珠蛋白基因的剪接受体)、cmv、shefla(截短的hefla)、aat启动子、甲状腺激素结合球蛋白启动子、白蛋白启动子、甲状腺素结合球蛋白(tbg)启动子、肝控制区(hcr)-apocii混合启动子、casi、hcr-haat混合启动子和与小鼠白蛋白基因增强子(ealb)元件和载脂蛋白e启动子组合的aat启动子。
4.如权利要求1至4中任一项所述的病毒载体，其中所述基因是fgf21、klotho或stgfbr2-fc。
5.如权利要求1至4中任一项所述的病毒载体，其中第一核酸序列序列与第...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·戴维森，G·M·丘奇，
申请(专利权)人：哈佛学院董事及会员团体，
类型：发明
国别省市：
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