【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及搭载子宫内膜间充质干细胞和上皮类器官脱细胞羊膜支架复合体的制备方法及在修复子宫内膜损伤中的应用。
技术介绍
1、子宫内膜由内膜表面2/3的功能层和底部1/3的基底层组成。功能层可以随性激素变化而发生周期性脱落。基底层由腺体的基底部、致密基质细胞和血管构成，不发生周期性的变化。手术、感染、缺血等原因可以引起子宫内膜损伤，当损伤未达到基底层时，在雌激素作用下，基底层腺体断端处上皮细胞增生形成新的功能层，覆盖子宫体腔达到修复创面的作用。当基底层受到损伤后，内膜的再生能力受到限制，就可能形成宫腔粘连(intrauterine adhesion，iua)或者薄型子宫内膜，临床上可表现为月经减少，闭经，不孕，习惯性流产，早产和胎盘异常等。
2、因此，目前对于子宫内膜基底层损伤引起的宫腔粘连和薄型子宫内膜的治疗是一个有待解决的问题，解决上述问题的关键在于有效防止粘连的同时，还要同时促进受损内膜的再生和修复。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。
2、近年来，随着细胞治疗技术的发展，间充质干细胞已被广泛的研究用于子宫内膜的再生和修复。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，msc)具有多分化、无限增殖和免疫调节能力等特点，根据细胞来源的不同，mscs可分为骨髓源性、脂肪源性、子宫内膜源性和脐带源性。由于与子宫组织同源性高、易获得、安全性更高等原因，子宫内膜
3、类器官是一种3d细胞结构，可以来源于各种器官的多能性(胚胎或诱导)或成体干细胞，在特定培养条件下能够模拟人体内器官的关键结构和功能特征，因此被广泛用于研究发育生物学和组织再生机制。与传统的2d原代干细胞培养不同，类器官表现出更高的扩增能力，可以克服自体组织有限的可用性和可扩展性，重塑受损组织的特征。迄今为止，已经建立了许多组织特异性类器官培养模型，包括子宫内膜上皮类器官模型。然而，目前对子宫内膜上皮类器官潜在的组织修复能力的研究较少。同时子宫内膜上皮类器官的体外培养需要依赖特定的小分子化合物及生长因子的支持，我们研究显示将间充质干细胞及类器官共培养可减少部分生长因子的添加，表明间充质干细胞可以提供一部分的生长因子维持类器官的生长，因此子宫内膜修复时同时给予子宫内膜间充质干细胞及上皮类器官可能起到更好的修复效果。
4、由于间充质干细胞及类器官的移植存在定植及存活率低的问题，生物支架材料的支撑起到重要的作用。支架材料作为种子细胞的人工细胞外基质，担负了种子细胞生长、繁殖及形成新组织的重要责任，理想的支架材料应具有以下优点：①低免疫原性，在体内无排斥反应；②良好的生物相容性，在体内无炎症反应和毒性反应；③分泌细胞生长因子，为种子细胞生长繁殖提供保障；④有三维立体空间结构，表面的微结构有利于细胞的黏附和生长；⑤可塑性，能够适用于不同的周围环境，保持特定的弹性。人脱细胞羊膜支架是经过特定处理后得到的一种具有良好空间结构的天然支架材料。其内含有丰富的胶原蛋白、生长因子和细胞外基质等，具有良好的生物相容性、天然三维结构、低免疫原性、排异反应小及取材容易等优点，目前成为组织工程的研究热点。
5、因此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种复合体。根据本专利技术的实施例，所述复合体包括：羊膜支架、细胞和类器官，所述细胞和类器官设置于所述羊膜支架的上表面。专利技术人经过大量的实验研究，构建了一种搭载细胞和类器官的羊膜支架复合体，其中细胞和类器官可作为治疗中重度宫腔粘连的活性成分，能够补充局部干细胞的数量，并分泌生长因子改善局部微环境及免疫调节，促进受损子宫内膜的生长修复。
6、根据本专利技术的实施例，所述复合体进一步包括如下附加技术特征的至少之一：
7、根据本专利技术的实施例，所述羊膜支架为脱细胞羊膜支架。所述脱细胞羊膜支架含有丰富的胶原蛋白、生长因子和细胞外基质等，具有良好的生物相容性、天然三维结构、低免疫原性、排异反应小及取材容易等优点。
8、根据本专利技术的实施例，所述细胞选自间充质干细胞、骨髓基质细胞、脐带血干细胞、脂肪干细胞或胚胎干细胞的至少之一。
9、根据本专利技术的实施例，所述细胞选自间充质干细胞。因此，能够促进损伤部位生长，并分泌生长因子改善局部微环境及免疫调节，从而保持共培养类器官的干性及其增殖效能，达到修复和再生的作用。
10、根据本专利技术的实施例，所述类器官选自上皮类器官、内皮类器官、神经胶质类器官或卫星类器官的至少之一。
11、根据本专利技术的实施例，所述类器官选自上皮类器官。因此，能够提供损伤部位生长所需干细胞，促进损伤部位再生，从而达到修复和再生的作用。
12、根据本专利技术的实施例，所述上皮类器官是通过从子宫内膜原代组织中提取获得的。
13、根据本专利技术的实施例，所述细胞与类器官的细胞数量比为1:1。在此配比下，细胞和类器官同时作为治疗子宫严重损伤后的重要手段，更好的补充局部干细胞的数量，并分泌生长因子改善局部微环境及免疫调节，促进受损子宫内膜的生长修复。
14、根据本专利技术的实施例，所述细胞和类器官在所述羊膜支架的上表面的密度为1×105～1×106。
15、在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种制备第一方面所述的复合体的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：将细胞和类器官接种在羊膜支架上，以便获得所述复合体。专利技术人经过经过大量的实验研究发现，将子宫内膜间充质干细胞和上皮类器官搭建在脱细胞羊膜支架复合体上能够有效促进子宫内膜受损部位的干细胞生长，可以防止宫腔粘连分离术后的再粘连，促进受损子宫内膜的生长修复。
16、根据本专利技术的实施例，所述方法进一步包括如下附加技术特征的至少之一：
17、根据本专利技术的实施例，将所述细胞和类器官接种在羊膜支架上前进一步包括：将羊膜支架进行紫外照射处理。通过紫外照射处理能有效杀死羊膜支架中存在的细菌、病毒菌等微生物，避免影响其之后接种的细胞和类器官的生长。
18、根据本专利技术的实施例，所述紫外照射处理的时间为20～40min。
19、根据本专利技术的实施例，所述细胞和所述类器官的细胞数量比为1：1。在此配比下，细胞和类器官同时作为治疗子宫严重损伤后的重要手段，更好的补充局部干细胞的数量，并分泌生长因子改善局部微环境及免疫调节，促进受损子宫内膜的生长修复。
20、根据本专利技术的实施例，所述羊膜支架为脱细胞羊膜支架。所述脱细胞羊膜支架含有丰富的胶原蛋白、生长因子和细胞外基质等，具有良好的生物相容性、天然三维结构、低免疫原性、排异反应小及取材容易等优点。
21、根据本专利技术的具体实施例，所述脱细胞羊膜支架是通过如下方法制备得到的：从胎盘中分离羊膜，将所述羊膜进行消化处理，将消化处理本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种复合体，其特征在于，包括：羊膜支架、细胞和类器官，所述细胞和类器官设置于所述羊膜支架的上表面。
2.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述羊膜支架为脱细胞羊膜支架；
3.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述细胞与类器官的细胞数量比为1:1。
4.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述细胞和类器官在所述羊膜支架的上表面的密度为1×105～1×106。
5.一种制备权利要求1～4任一项所述复合体的方法，其特征在于，包括：将细胞和类器官接种在羊膜支架上，以便获得所述复合体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述细胞和类器官接种在羊膜支架上前进一步包括：将羊膜支架进行紫外照射处理；
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述羊膜支架为脱细胞羊膜支架；
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，进一步包括：将接种有所述细胞和类器官的羊膜支架进行培养处理；
9.一种复合体，其特征在于，由权利要求5～7任一项所述方法制备得到。
10.权利要求1
11.权利要求1或7所述复合体在提高妊娠成功率或改善妊娠结局质量中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种复合体，其特征在于，包括：羊膜支架、细胞和类器官，所述细胞和类器官设置于所述羊膜支架的上表面。
2.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述羊膜支架为脱细胞羊膜支架；
3.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述细胞与类器官的细胞数量比为1:1。
4.根据权利要求1所述的复合体，其特征在于，所述细胞和类器官在所述羊膜支架的上表面的密度为1×105～1×106。
5.一种制备权利要求1～4任一项所述复合体的方法，其特征在于，包括：将细胞和类器官接种在羊膜支架上，以便获得所述复合体。
6.根据权利要求5所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡淑嫣，王倩，惠贤瑞，黄柳琪，
申请(专利权)人：伯桢生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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