【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及靶向tslp的vhh纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、近30年来，支气管哮喘和变态反应（过敏症）的发病率呈增高趋势。过敏进程（atopic march）是过敏症的自然现象，表现为幼年罹患特应性皮炎（atopic dermatitis，ad），成年常出现食物过敏、过敏性鼻炎（allergic rhinitis，ar）乃至哮喘。哮喘属于一种异质性疾病，在疾病的严重性、气道炎症的类型以及治疗药物中都表现出很大的变异性，其由多种病理生理机制或内型引起。在严重哮喘中，哮喘的这些特征不仅降低了对标准药物的反应性，而且还需对现有疾病严重程度的原因具有更高特异性的替代疗法由于需要对不同哮喘患者个体发病机制进行个体化治疗，而靶向生物制剂给哮喘患者带来了新的希望。
2、tslp（胸腺间质淋巴生成素，thymic stromal lymphopoietin）是一种归属于短链四α螺旋束ⅰ型il-2家族的多效性细胞因子。越来越多的研究结果表明，tslp可能是启动哮喘和过敏症的关键因子，并介导过敏进程的发生发展。而且，tslp基因多态性与ad（湿疹）、食物过敏、ar和哮喘等过敏症密切相关。大量研究证明约2/3的严重哮喘表现为th2类细胞因子过表达， tslp是引起th2类细胞因子过表达的一个重要因子。tslp-tslpr （thymicstromal lymphopoietin receptor）作用主要是通过jak-stat信号通路完成的。研究认为tslp的上调，会与dc细胞上的tslpr结合引起jak活化
3、哮喘和慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，copd）是最常见的呼吸道疾病之一，全球分别有3亿和2.1亿患者。肺部吸入给药是预防和治疗哮喘、copd等呼吸道疾病的首选给药方式。吸入疗法是治疗呼吸道疾病的古老方法，也是至今认为最有效和最安全的疗法。纳米抗体是驼科动物体内发现天然缺失轻链的重链抗体的可变区，分子量在12-15kda。纳米抗体与传统抗体在结构上有较大差异，分子量小、组织穿透性强、亲和力高、稳定性强等优势。这些优势让纳米抗体可以作为吸入抗体药物进行开发。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种对tslp结合力强的纳米抗体，其可以准确检测tslp并诊断tslp相关疾病，同时所述纳米抗体可以用于干粉吸入给药从而满足临床治疗tslp相关疾病的需求。具体地，本专利技术公开了以下技术方案：
2、第一方面，本专利技术公开了一种抗tslp（胸腺间质淋巴生成素，thymic stromallymphopoietin）的纳米抗体，所述纳米抗体包含seq id no.4所示的vhh链的互补决定区cdr1-3。
3、进一步，所述纳米抗体中的vhh链含有具有seq id no.1所示序列的cdr1、具有seqid no.2所示序列的cdr2、和具有seq id no.3所示序列的cdr3。
4、在本专利技术的具体实施方式中，纳米抗体还包括骨架区，其vhh链的结构为：fr1-cdr1-fr2-cdr2-fr3-cdr3-fr4。
5、进一步，所述纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.4所示。
6、进一步，所述纳米抗体包括对seq id no.4所示序列进行任选地添加、缺失、修饰和/或取代至少1个、2个、3个或更多个氨基酸并能保留与tslp特异性结合能力的衍生序列，尤其，包括保守性氨基酸置换。保守性置换是在与侧链相关的氨基酸家族中发生的置换。
7、进一步，所述纳米抗体包括与seq id no.4具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％序列同一性的抗体。
8、进一步，所述纳米抗体能够有效阻断tslp与tslpr的相互作用，进而阻断pbmc被激活并释放ccl17、ccl22。
9、本专利技术所述术语tslpr即胸腺间质淋巴生成素受体（thymic stromallymphopoietin receptor），也可称为tslp受体。
10、进一步，所述tslp包括人、小鼠、大鼠、或非人灵长类动物（如猴）的tslp。
11、进一步，所述纳米抗体包括人源化抗体。
12、进一步，所述纳米抗体包括单体、二价抗体和/或多价抗体。
13、所述二价抗体或多价抗体之间可以以任意连接肽连接，本专利技术具体的实施例中以(ggggs)3作为连接肽构建了二价抗体。
14、另一方面，本专利技术还公开了一种核酸分子，所述核酸分子编码前述纳米抗体。
15、术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”与“核酸分子”在全文中可交换使用并且包括dna分子（例如cdna或基因组dna）、rna分子（例如mrna）、使用核苷酸类似物（例如肽核酸和非天然存在的核苷酸类似物）生成的dna或rna的类似物、以及其杂合体。核酸分子可为单链或双链。
16、另一方面，本专利技术还公开了一种包含前述核酸分子的重组载体，所述重组载体上包含前述核酸分子，或，所述重组载体表达前述纳米抗体。
17、进一步，所述的重组载体选自下组：dna、rna、病毒载体、质粒、其他基因转移系统、或其组合。
18、进一步，所述病毒表达载体包括慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒表达载体或其他类型病毒载体。
19、在一些实施方案中，所述重组载体可包含多种控制表达的元件，包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件和报告基因。另外，重组载体还可包含复制起点。重组载体还可能可包括有助于其进入细胞的组分，诸如病毒颗粒、脂质体或蛋白质壳，但不仅仅包括这些物质。
20、另一方面，本专利技术还公开了一种宿主细胞，所述宿主细胞中表达前述纳米抗体，或者，含有前述核酸分子或前述重组载体。
21、在一些实施方案中，宿主细胞可为原核生物，例如大肠杆菌（e.coli）；或其可为真核生物，例如单细胞真核生物（例如酵母或其它真菌）、植物细胞（例如烟草或番茄植物细胞）、动物细胞（例如人类细胞、猴细胞、仓鼠细胞、大鼠细胞、小鼠细胞、或昆虫细胞）或杂交瘤。实例性宿主细胞包括cho细胞、293细胞、cho-k1细胞、hek293细胞、caco2细胞、u2-os细胞、nih 3t3细胞、nso细胞、sp2细胞、cho-s细胞、dg44细胞、k-562细胞、u-937细胞、mrc5细胞、imr90细胞、jurkat细胞、hepg2细胞、hela细胞、ht-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗TSLP的纳米抗体，所述纳米抗体中的VHH链含有具有SEQ ID NO.1所示序列的CDR1、具有SEQ ID NO.2所示序列的CDR2、和具有SEQ ID NO.3所示序列的CDR3。
2.如权利要求1所述纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.一种包含权利要求1所述纳米抗体的衍生产品，所述衍生产品选自：
4.如权利要求3所述衍生产品，所述药物组合物中还含有一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。
5.如权利要求3所述衍生产品，所述药物组合物包括喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。
6.一种生产TSLP抗体的方法，所述方法包括培养权利要求3所述宿主细胞；
7.一种检测、富集或纯化TSLP的方法，所述方法中包含将前述纳米抗体与样品接触。
8.权利要求1所述纳米抗体或权利要求3所述衍生产品在制备TSLP相关疾病的药物中的应用。
9.如权利要求8所述应用，所述TSLP相关疾病包括鼻炎、鼻窦炎、结膜炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、特异性皮炎、嗜酸
10.如权利要求8所述应用，所述TSLP相关疾病是哮喘、慢性阻塞性肺疾病、特异性皮炎。
...【技术特征摘要】
1.一种抗tslp的纳米抗体，所述纳米抗体中的vhh链含有具有seq id no.1所示序列的cdr1、具有seq id no.2所示序列的cdr2、和具有seq id no.3所示序列的cdr3。
2.如权利要求1所述纳米抗体，所述纳米抗体的氨基酸序列如seq id no.4所示。
3.一种包含权利要求1所述纳米抗体的衍生产品，所述衍生产品选自：
4.如权利要求3所述衍生产品，所述药物组合物中还含有一种或更多种药学上可接受的载体、稀释剂、缓冲剂或赋形剂。
5.如权利要求3所述衍生产品，所述药物组合物包括喷雾剂、气雾剂或吸入粉雾剂。
6.一种生产tslp抗体的方法，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈晖，路萍萍，王晋，闫条，
申请(专利权)人：杭州畅溪制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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