【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于类器官培养，涉及一种类器官组织消化液。
技术介绍
1、类器官(organoids)是衍生于干细胞或前体细胞的器官特异性细胞集合。类器官培养是将从生物体获得的一部分组织经过处理后，再将其与基质胶混合进行3d培养所得。因此，如何高效、低损伤且具有较大广谱性的将细胞或细胞团完好的从组织中解离出来是类器官培养的重中之重。
2、目前使用较多的消化液多由单一胶原酶、金属盐、苯甲基磺酰氟(phenyl methanesulfonyl fluoride, pmsf)等配制而成。而仅仅使用单一胶原酶，使得可消化组织类型也变得狭窄，且消化力度不够，导致细胞获得率减少；而且在使用过程中胶原酶极易出现活性丧失，降低消化作用，严重的将导致无法实现对肿瘤细胞的消化分离。pmsf为有毒化合物，有较大的安全隐患。现有的消化酶溶液未添加缓冲物质和酶保护剂，使得整个消化酶体系的ph无法保持稳定，这也容易造成消化失败。
技术实现思路
1、针对目前类器官组织消化液中存在的问题，本专利技术提供一种类器官组织消化液，细胞获取率高且细胞具有较高的活性，各组分间协同作用，使得其消化效率高，对细胞损伤较小，污染率低。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
3、一种类器官组织消化液，包括溶解于基础培养基的以下浓度的原料：
4、胶原酶ⅳ 550-1100u/ml；
5、脱氧核糖核酸酶ⅰ 75-225u/ml；
6、中性蛋白酶ii 0.06
7、透明质酸酶 12.375-20.625u/ml；
8、rock抑制剂 10-12.5μm；
9、氢化可的松 450-550ng/ml；
10、抗生素 0.1-1mg/ml；
11、表皮细胞生长因子（egf） 50-60ng/ml；
12、牛血清白蛋白（bsa）1-3% (v/v)；
13、4-羟乙基哌嗪乙磺酸（hepes） 10mm-20mm。
14、在上述组分的浓度范围内，所述类器官组织消化液可以消化多种正常组织和实体肿瘤组织，且消化速度优于现有商业化组织消化液；此外，相对商业化组织消化液，在上述浓度范围内的类器官组织消化液消化后的细胞或细胞团能够减少细胞损伤，提高细胞活率，增加类器官类器官形成几率。
15、在一些实施例中，所述rock（rho相关蛋白激酶）抑制剂为azaindole 1、gsk269962a、at13148、gsk429286a、ripasudil、y27632和hydroxyfasudil中的至少一种。
16、所述基础培养基可以根据消化对象的不同选择本领域已知的培养基。在一些实施例中，基础培养基为dmem/f12、advanced dmem/f12、mem培养基、imdm培养基、ham’s f-12k培养基或rpim1640培养基。
17、在一些实施例中，抗生素为青霉素、链霉素和primocintm抗生素中的至少一种。
18、在一些实施例中，类器官组织消化液，包括溶解于培养基的以下浓度的原料：胶原酶ⅳ 550u/ml，脱氧核糖核酸酶ⅰ 150u/ml，中性蛋白酶ⅱ 0.13u/ml，透明质酸酶20.625u/ml，rock抑制剂10μm，氢化可的松500ng/ml，抗生素100μg/ml，egf 50ng/ml，bsa 1%（v/v），hepes 10mm。
19、上述类器官组织消化液的配制可以采用本领域公知的方法进行配制，如，将各组分以适当溶剂溶解后分别加入到基础培养基，所述适当溶剂为对细胞无毒或低毒的良溶剂、缓冲溶液、培养基或水。在一些实施例中，溶剂为dmso（二甲基亚砜）、pbs缓冲溶液、基础培养基。
20、上述类器官组织消化液，还可以根据具体消化的组织器官调节合适的ph值，在一些实施例中，ph为6.5-8，如，6.5、7.0、7.2、7.4、7.8、8，或者上述ph之间的任何数值。为了多数细胞的正常生长，ph为7.0-7.4。
21、本专利技术的组织消化液成分简单明确，使用bsa替代成分复杂的fbs，并且bsa含多种蛋白质、多肽和激素，促进细胞生长的同时还能稳定其他酶的活性，防止酶的分解和非特异性吸附到管壁上；使用的rock抑制剂可以减少细胞凋亡，可以保证组织在消化过程中依然可以具有较高的活性；egf的加入可以促进细胞增殖和活性并使细胞形态保持较好，并能保证细胞的较高活性；不添加青链霉素双抗或两性霉素，而是采用的primocintm抗生素，在抑制细菌、真菌和支原体生长的同时对细胞无毒性，减少对细胞的损伤；氢化可的松的添加可起到抗氧化，保持组织活性的作用。
22、本专利技术具有以下优点：
23、本专利技术所提供的组织消化液添加多种酶显著地提高了消化效率，减少消化时间；多种组分协同作用，保持组织在消化过程中依然可以具有较高的活性。该组织消化液可应用于多种组织器官的效果过程，消化时间短、消化后活性高。
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1.一种类器官组织消化液，其特征在于，包括溶解于基础培养基的以下浓度的原料：
2.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，ROCK抑制剂为azaindole 1、gsk269962a、at13148、gsk429286a、ripasudil、Y27632和hydroxyfasudil中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，基础培养基为DMEM/F12、Advanced DMEM/F12、MEM培养基、IMDM培养基、Ham’s F-12K培养基或RPIM1640培养基。
4.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，抗生素为青霉素、链霉素和PrimocinTM抗生素中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，包括溶解于基础培养基的以下浓度的原料：
6.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，pH为6.5-8或7.0-7.4。
【技术特征摘要】
1.一种类器官组织消化液，其特征在于，包括溶解于基础培养基的以下浓度的原料：
2.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，rock抑制剂为azaindole 1、gsk269962a、at13148、gsk429286a、ripasudil、y27632和hydroxyfasudil中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的类器官组织消化液，其特征在于，基础培养基为dmem/f12、advanced dm...
【专利技术属性】
技术研发人员：方改华，杨博，许召显，王康妮，牛思琦，康帅，刘庆凯，
申请(专利权)人：济南银丰医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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