【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开涉及小分子化学、分子生物学、基因疗法、细胞疗法、免疫学和免疫细胞信号传导领域中的小分子调节的细胞信号传导表达系统。本公开的表达系统使用模块化设计和可变结构域来靶向细胞表面抗原，并且在受体-配体相互作用时引导信号传导级联，由此驱动细胞功能。
技术介绍
1、控制二聚化或蛋白酶活性的小分子药物可以用于控制细胞和基因疗法的活性，以提高功效和安全性。为了开发有效且安全的下一代细胞和基因疗法，包含针对癌症的免疫治疗方法，对利用模块化设计和car的可变结构域的技术的需要日益增加，所述car可以靶向一系列细胞表面抗原，并且在受体-配体相互作用时引导信号传导级联。
技术实现思路
1、本公开提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白包括与二聚化结构域可操作地连接的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包括包含抗原感测结构域的细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且其中所述嵌合多肽在细胞内与所述二聚化结构域可操作地连接。
2、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括t细胞受体(tcr)、嵌合抗原受体(car)或嵌合受体。
3、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测结构域包括以下中的一种或多种：(a)重链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合(cdr)；(b)重链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合和轻链可变区的三个互补决定区(cdr)的集合；(c)基于纤连蛋白的支架；其中抗原感测区与靶抗原特异性结合。在一些实施例中，所述基于纤连蛋白的支架包括centyrin。在一些实施例
4、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测区包括从哺乳动物序列分离的或源自其的一个或多个序列。在一些实施例中，抗原感测区包括从人序列分离的或源自其的一个或多个序列。
5、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述抗原感测区包括人源化或全人抗体。在一些实施例中，所述抗原感测区包括单链可变片段(scfv)。在一些实施例中，所述抗原感测区包括抗体模拟物。在一些实施例中，所述抗原感测区包括单体。
6、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述铰链区包括从cd4(分化簇4)多肽、cd8(分化簇8)多肽或cd28(分化簇28)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述铰链区包括从人序列分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述铰链区和所述间隔子序列是相同的结构域。在一些实施例中，所述铰链区和所述间隔子序列是不同的结构域。
7、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述间隔子序列包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述间隔子序列包括从人序列分离的或源自其的序列。
8、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。在一些实施例中，所述安全开关包括从表皮生长因子受体(egfr)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述安全开关包括截短的egfr(egfrt)多肽。在一些实施例中，当egfrt与利妥昔单抗(rituximab)结合时，组合导致细胞死亡。在一些实施例中，所述egfrt包括序列mlllvtslllcelphpaflliprkvcngigige。在一些实施例中，所述安全开关包括从人序列分离的或源自其的序列。
9、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
10、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述细胞内结构域包括一个或多个共刺激结构域。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从cd3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cd28多肽、4-1bb(分化簇137)多肽、icos(诱导型t细胞共刺激分子)多肽、ox40多肽或cd27(分化簇27)多肽。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括(a)第一共刺激结构域，所述第一共刺激结构域包括从cd28多肽、4-1bb多肽或icos多肽分离的或源自其的序列；以及(b)第二共刺激结构域，所述第二共刺激结构域包括从4-1bb多肽、ox40多肽或cd27多肽分离的或源自其的序列。在一些实施例中，所述一个或多个共刺激结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
11、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括诱导型细胞因子结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，所述诱导型细胞因子结构域包括能够诱导il-12细胞因子的表达的经激活的t细胞的核因子(nfat)多肽。
12、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括细胞因子受体的细胞内结构域的细胞内结构域。在一些实施例中，细胞因子受体的所述细胞内结构域包括il-2受体β(il-2rβ)链片段。在一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括信号转导子和转录激活子(stat3/5)结合基序的细胞内结构域。
13、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述嵌合多肽包括进一步包括至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)序列的细胞内结构域。
14、在本公开的融合蛋白的一些实施例中，所述融合蛋白从氨基到羧基末端包括所述嵌合多肽、接头和所述二聚化结构域。在一些实施例中，所述接头包括以下中的一种或多种：dna序列、rna序列、氨基酸序列和聚合物。在一些实施例中，所述接头包括序列ggggs；或所述接头包括介于2个与20个氨基酸之间的长度；或所述接头包括包含甘氨酸(g)和丝氨酸(s)的序列。在一些实施例中，所述接头包括寡聚化结构域。在一些实施例中，所述寡聚化结构域包括以下序列：
15、seyeirkaleelkastaelkrataslrasteelkknpsedalvennrlivehnaiivennriiaavlelivraik(三聚体)；
16、trteiirelerslreqeelakrlkellrelerlqregssdedvrellreikelveeieklareqkylveelkrqd(二聚体)；
17、trrkqemkrlkkemekireeteevkkeieeskkrpqsesaknlilimqllinqirllalqirmlalqlqe(五聚体)；或
18、tedeirklrklleeaekklkkledktrrseeisktdddpkaqslqliaeslmliaeslliiaislllssrng(六聚体)本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包括与二聚化结构域可操作地连接的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包括包含抗原感测结构域的细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且其中所述嵌合多肽在细胞内与所述二聚化结构域可操作地连接。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括T细胞受体(TCR)、嵌合抗原受体(CAR)或嵌合受体。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述抗原感测结构域包括以下中的一种或多种：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括从哺乳动物序列分离的或源自其的一个或多个序列。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括从人序列分离的或源自其的一个或多个序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括人源化或全人抗体。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括单链可变片段(scFv)。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述铰链区包括从CD4(分化簇4)多肽、CD8(分化簇8)多肽或CD28(分化簇28)多肽分离的或源自其的序列。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述铰链区包括从人序列分离的或源自其的序列。
11.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述间隔子序列包括从CD4多肽、CD8多肽、CD28多肽分离的或源自其的序列。
12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述间隔子序列包括从人序列分离的或源自其的序列。
13.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括从表皮生长因子受体(EGFR)多肽分离的或源自其的序列。
14.根据权利要求13所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括截短的EGFR(EGFRt)多肽。
15.根据权利要求13或14所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括从人序列分离的或源自其的序列。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从CD4多肽、CD8多肽、CD28多肽分离的或源自其的序列。
17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞内结构域包括一个或多个共刺激结构域。
19.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从CD3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。
20.根据权利要求18或19所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：CD28多肽、4-1BB(分化簇137)多肽、ICOS(诱导型T细胞共刺激分子)多肽、OX40多肽或CD27(分化簇27)多肽。
21.根据权利要求18或19所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括：
22.根据权利要求18至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括诱导型细胞因子结构域的细胞内结构域。
24.根据权利要求23所述的融合蛋白，其中所述诱导型细胞因子结构域包括能够诱导IL-12细胞因子的表达的经激活的T细胞的核因子(NFAT)多肽。
25.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括细胞因子受体的细胞内结构域的细胞内结构域。
26.根据权利要求25所述的融合蛋白，其中细胞因子受体的所述细胞内结构域包括IL-2受体β(IL-2Rβ)链片段。
27.根据权利要求25或26所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括信号转导子和转录激活子(STAT3/5)结合基序的细胞内结构域。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)序列的细胞内结构域。
29.根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白从氨基到羧基末端包括所述嵌合多肽、接头和所述二聚化结构域。
30.根据权利要求29所述的融合蛋白，其中所述接头包括以下中的一种或多种：DNA序列、RNA序列、氨基酸序列和聚合物。
31.根据权利要求2...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种融合蛋白，其包括与二聚化结构域可操作地连接的嵌合多肽，其中所述嵌合多肽包括包含抗原感测结构域的细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，并且其中所述嵌合多肽在细胞内与所述二聚化结构域可操作地连接。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括t细胞受体(tcr)、嵌合抗原受体(car)或嵌合受体。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中所述抗原感测结构域包括以下中的一种或多种：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括从哺乳动物序列分离的或源自其的一个或多个序列。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括从人序列分离的或源自其的一个或多个序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括人源化或全人抗体。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白，其中所述抗原感测区包括单链可变片段(scfv)。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞外结构域进一步包括铰链区、间隔子序列或安全开关中的一个或多个。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述铰链区包括从cd4(分化簇4)多肽、cd8(分化簇8)多肽或cd28(分化簇28)多肽分离的或源自其的序列。
10.根据权利要求9所述的融合蛋白，其中所述铰链区包括从人序列分离的或源自其的序列。
11.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述间隔子序列包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。
12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述间隔子序列包括从人序列分离的或源自其的序列。
13.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括从表皮生长因子受体(egfr)多肽分离的或源自其的序列。
14.根据权利要求13所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括截短的egfr(egfrt)多肽。
15.根据权利要求13或14所述的融合蛋白，其中所述安全开关包括从人序列分离的或源自其的序列。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。
17.根据权利要求16所述的融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的融合蛋白，其中所述细胞内结构域包括一个或多个共刺激结构域。
19.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从cd3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。
20.根据权利要求18或19所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cd28多肽、4-1bb(分化簇137)多肽、icos(诱导型t细胞共刺激分子)多肽、ox40多肽或cd27(分化簇27)多肽。
21.根据权利要求18或19所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括：
22.根据权利要求18至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述一个或多个共刺激结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括诱导型细胞因子结构域的细胞内结构域。
24.根据权利要求23所述的融合蛋白，其中所述诱导型细胞因子结构域包括能够诱导il-12细胞因子的表达的经激活的t细胞的核因子(nfat)多肽。
25.根据权利要求1至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括细胞因子受体的细胞内结构域的细胞内结构域。
26.根据权利要求25所述的融合蛋白，其中细胞因子受体的所述细胞内结构域包括il-2受体β(il-2rβ)链片段。
27.根据权利要求25或26所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括信号转导子和转录激活子(stat3/5)结合基序的细胞内结构域。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述嵌合多肽包括进一步包括至少一个基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)序列的细胞内结构域。
29.根据权利要求1至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白从氨基到羧基末端包括所述嵌合多肽、接头和所述二聚化结构域。
30.根据权利要求29所述的融合蛋白，其中所述接头包括以下中的一种或多种：dna序列、rna序列、氨基酸序列和聚合物。
31.根据权利要求29或30所述的融合蛋白，其中：
32.根据权利要求29或30所述的融合蛋白，其中所述接头包括寡聚化结构域。
33.根据权利要求32所述的融合蛋白，其中所述寡聚化结构域包括以下序列：
34.根据权利要求1至33中任一项所述的融合蛋白，其中所述二聚化结构域包括ns3a多肽。
35.根据权利要求34所述的融合蛋白，其中所述ns3a多肽包括以下序列：(a)
36.根据权利要求1至33中任一项所述的融合蛋白，其中所述二聚化结构域包括dncr多肽。
37.根据权利要求36所述的融合蛋白，其中所述dncr多肽包括序列ssdeeearelierakeaaeraqeaaertgdprvrelarelkrlaqeaaeevkrdpsssdvnealkliveaieaavdaleaaertgdpevrelarelvrlaveaaeevqrnpsssdvnealhsivyaieaaifaleaaertgdpevrelarelvrlaveaaeevqrnpssrnvehalmrivlaiylaeenlreaeesgdpekrekarervreaveraeevqrdpsgwlnh.。
38.根据权利要求1至33中任一项所述的融合蛋白，其中所述二聚化结构域包括gncr多肽。
39.根据权利要求38所述的融合蛋白，其中所述gncr多肽包括序列dieklckkaeeeakeaqekadelrqrhpdsqaaedaedlanlavaavltacllaqehpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhpdsqaardaiklasqaaravilaimlaaenpnadiaklcikaaseaaeaaskaaelaqrhpdsqaardaiklasqaaeaveraiwlaaenpnadiakkcikaaseaaeeaskaaeeaqrhpdsqkardeikeasqkaeevkercks.。
40.根据权利要求1至33中任一项所述的融合蛋白，其中所述二聚化结构域包括apons3a阅读子(anr)多肽。
41.根据权利要求40所述的融合蛋白，其中所述anr多肽包括序列geldelvylldgpgydpihsdvvtrggshlfnf。
42.根据权利要求1至41中任一项所述的融合蛋白，其进一步包括杀伤结构域。
43.根据权利要求42所述的融合蛋白，其中所述杀伤结构域包括从以下分离的或源自其的序列：胱天蛋白酶-9(cas9)多肽、胱天蛋白酶-1(cas1多肽)、胱天蛋白酶-4(cas4)多肽、受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶1(ripk1)、受体相互作用丝氨酸/苏氨酸激酶3(ripk3)多肽或其催化结构域。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的融合蛋白，其进一步包括可切割肽。
45.根据权利要求44所述的融合蛋白，其中所述可切割肽包括p2a序列或t2a序列。
46.根据权利要求45所述的融合蛋白，其中所述p2a序列包括序列gsgatnfsllkqagdveenpgp.。
47.根据权利要求45所述的融合蛋白，其中所述t2a序列包括序列gsgegrgslltcgdveenpg.。
48.一种核酸，其编码根据权利要求1至47中任一项所述的融合蛋白。
49.根据权利要求48所述的核酸，其进一步包括内部核糖体进入序列(ires)。
50.根据权利要求49所述的核酸，其中所述ires包括序列cctctccctcccccccccctaacgttactggccgaagccgcttggaataaggccggtgtgcgtttgtctatatgtgattttccaccatattgccgtcttttggcaatgtgagggcccggaaacctggccctgtcttcttgacgagcattcctaggggtctttcccctctcgccaaaggaatgcaaggtctgttgaatgtcgtgaaggaagcagttcctctggaagcttcttgaagacaaacaacgtctgtagcgaccctttgcaggcagcggaaccccccacctggcgacaggtgcctctgcggccaaaagccacgtgtataagatacacctgcaaaggcggcacaaccccagtgccacgttgtgagttggatagttgtggaaagagtcaaatggctctcctcaagcgtattcaacaaggggctgaaggatgcccagaaggtaccccattgtatgggatctgatctggggcctcggtgcacatgctttacatgtgtttagtcgaggttaaaaaaacgtctaggccccccgaaccacggggacgtggttttcctttgaaaaacacgatgataagcttgccacaaccc.。
51.根据权利要求48至50中任一项所述的核酸，其进一步包括以下中的一种或多种：启动子、增强子、内含子、外显子、非翻译区(utr)和翻译后调控元件(pre)。
52.根据权利要求51所述的核酸，其中所述启动子包括诱导型启动子。
53.根据权利要求52所述的核酸，其中所述诱导型启动子包括从以下分离的或源自其的序列：yb_tata启动子、人β珠蛋白启动子(hubg)、minil2启动子、最小cmv(mincmv)启动子和tre3g启动子。
54.根据权利要求51所述的核酸，其中所述启动子包括组成型启动子。
55.根据权利要求54所述的核酸，其中所述组成型启动子包括从以下分离的或源自其的序列：mnd启动子、hpgk启动子、cmv启动子、cag启动子、sffv启动子、ef1α启动子、ubc启动子和cd43启动子。
56.一种载体，其包括根据权利要求48至55中任一项所述的核酸。
57.根据权利要求56所述的载体，其中所述载体包括能够驱动哺乳动物细胞中的核酸的表达的表达载体。
58.根据权利要求57所述的载体，其中所述表达载体包括质粒。
59.根据权利要求56所述的载体，其中所述载体包括能够将所述核酸引入到哺乳动物细胞的递送载体。
60.根据权利要求56所述的载体，其中所述递送载体包括以下中的一种或多种：病毒载体、非病毒载体、脂质体、胶束、聚合物囊泡和纳米颗粒。
61.根据权利要求60所述的载体，其中所述病毒载体包括从病毒基因组分离的或源自其的一个或多个序列。
62.一种细胞，其包括根据权利要求1至47中任一项所述的融合蛋白、根据权利要求48至55中任一项所述的核酸或根据权利要求56至61中任一项所述的载体。
63.根据权利要求62所述的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
64.根据权利要求62所述的细胞，其中所述细胞是人细胞。
65.根据权利要求62至64中任一项所述的细胞，其中所述细胞是体细胞。
66.根据权利要求62至64中任一项所述的细胞，其中所述细胞是干细胞。
67.根据权利要求66所述的细胞，其中所述细胞不是人胚胎干细胞。
68.根据权利要求62至67中任一项所述的细胞，其中所述细胞是离体的或体外的。
69.根据权利要求62至67中任一项所述的细胞，其中所述细胞是体内的。
70.根据权利要求60至67中任一项所述的细胞，其中所述细胞是免疫细胞。
71.根据权利要求70所述的细胞，其中所述细胞是t细胞或其前体。
72.根据权利要求71所述的细胞，其中所述前体是造血干细胞(hsc)。
73.一种组合物，其包括根据权利要求1至47中任一项所述的融合蛋白、根据权利要求48至55中任一项所述的核酸、根据权利要求56至61中任一项所述的载体或根据权利要求62至72中任一项所述的细胞。
74.一种药物组合物，其包括根据权利要求72所述的组合物以及药学上可接受的载体。
75.一种第二融合蛋白，其包括与二聚化结构域可操作地连接的信号传导结构域，其中
76.根据权利要求75所述的第二融合蛋白，其进一步包括衔接子序列、跨膜结构域和共刺激结构域中的一个或多个。
77.根据权利要求76所述的第二融合蛋白，其中所述衔接子序列包括从dap10多肽分离的或源自其的序列。
78.根据权利要求76或77所述的第二融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从cd4多肽、cd8多肽、cd28多肽分离的或源自其的序列。
79.根据权利要求78所述的第二融合蛋白，其中所述跨膜结构域包括从人序列分离的或源自其的序列。
80.根据权利要求75至79中任一项所述的第二融合蛋白，其中所述共刺激结构域包括从cd3ζ(分化簇3ζ)多肽分离的或源自其的序列。
81.根据权利要求75至80中任一项所述的第二融合蛋白，其中所述共刺激结构域包括从以下分离的或源自其的序列：cd28多肽、4-1bb多肽、ico...
【专利技术属性】
技术研发人员：G·福伊特，S·博伊肯，M·拉乔伊，
申请(专利权)人：欧特佩斯生物公司，
类型：发明
国别省市：
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