【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及护肤品，进一步的，涉及一种双液相发酵溶胞产物的制备工艺及其应用。
技术介绍
1、双液相发酵体系是指在发酵液中加入一种新的与水相互不溶作为氧载体的液相，从而提高溶氧效果，减少发酵体系中气液传氧阻力，提高传氧效率或解除产物的抑制作用。双液相发酵工艺可以大大提高生产效率，提高微生物转化能效。
2、目前，双液相在我国多应用于能源、医药和食品领域，氧载体主要有液态烷烃、油酸、甲苯、酯类等；但是由于能源、医药所使用的氧载体例如乙酸乙酯或三氯甲烷在化妆品中应用时都不允许添加，因此双液相工艺在化妆品领域中应用受到了限制。
3、植物油由于安全、环保，作为氧载体已经应用于生物
，例如中国专利cn201310143845公开了一种双液相系统发酵法降解植物甾醇制备雄烯二酮，发酵培养基水相选用无菌蒸馏水，油相可选用米糠油、葵花油、大豆油和花生油，在发酵转化完成后，通过膜分离方法，得到含有雄烯二酮的溶液，经浓缩、脱色、过滤、浓缩、重结晶和真空干燥等操作可得到纯度在99%以上的雄烯二酮。但是目前采用植物油双液相发酵工艺得到的产物用于化妆品仍未见报道。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面提供了一种双液相发酵溶胞产物的制备工艺，包括以下步骤：
2、s1、制备双液相发酵培养基：将植物提取液、油相、乳化剂、水于三角瓶中混合均匀后进行高温灭菌、冷却至室温即得；
3、s2、需氧发酵培养：将发酵菌株接入双液相发酵培养基中在恒温震荡培养器中进行需氧发酵培养，
4、s3、微射流均质：将发酵混合物采用微射流提取器（微孔孔径为800µm）进行处理后即得双液相发酵溶胞产物；
5、所述植物提取液，按重量份计，原料包括：牡丹花20~50份、玫瑰花10~40份、牡丹皮10~40份；
6、所述植物提取液的制备方法，包括以下步骤：
7、s1、按重量份，称取牡丹花、玫瑰花和牡丹皮；
8、s2、将牡丹花、玫瑰花和牡丹皮混合均匀并采用低温微射流提取器进行提取得混合溶液；
9、s3、将混合溶液依次采用卧式螺旋离心机、高速分离机、反渗透膜进行过滤即得；
10、所述油相为植物油；所述植物油选自牡丹籽油、菜籽油、玫瑰果油中的任意一种；
11、所述乳化剂为非离子聚甘油酯类乳化剂、非离子糖基乳化剂、非离子甘油酯类乳化剂中的任意一种；
12、所述聚甘油酯类乳化剂为聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯；
13、所述非离子糖基乳化剂为鲸蜡硬脂基葡糖苷；
14、所述非离子甘油酯类乳化剂选自甘油硬脂酸酯se、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯中的任意一种。
15、优选的，所述植物提取液制备过程中s2采用低温微射流提取器（微孔孔径为800µm）进行提取的条件为：加料速度为12~18l/min、温度为25~30℃、搅拌转速为400~800rpm、搅拌时间为20~40min。
16、优选的，所述卧式螺旋离心机的转速为3000~5000rpm，时间为20~40min。
17、优选的，所述高速分离机的转速为9000~11000rpm，时间为20~40min。
18、优选的，所述反渗透膜的孔径为0.4~0.6nm。
19、牡丹花和玫瑰花中含有维生素、氨基酸、可溶性糖和生物碱等水溶性成分；牡丹皮中含有苯酚及苷类、单萜及其苷类、三萜类等脂溶性成分；若采用传统的提取工艺，例如煎煮法、超声提取法等，会导致提取液中有效成分提取总含量低以及不同提取成分之间的含量相差较大；为了解决这一问题，本申请采用微孔孔径为800μm的微射流提取器进行提取，并且控制提取条件：温度为25~30℃，转速为400~800rpm，加料速度为12~18l/min，搅拌时间为20~40min；在提高提取液中有效成分总含量的同时也可以均衡不同的有效成分之间的含量，本申请人还发现当其进行后续双液相发酵时，更有利于微生物的生长，得到的发酵溶胞产物具有优异的抗氧化效果；本申请人猜测是因为采用微射流提取器进行提取可以对牡丹花、玫瑰花、牡丹皮进一步破壁，解决了菌种无法快速降解植物一些类似木质纤维素的物质，提高了菌种对植物活性成分吸收转化效率，从而更有利于微生物的生长。
20、优选的，所述植物油选自牡丹籽油或菜籽油中的任意一种。
21、优选的，所述植物油为牡丹籽油。
22、理论来说，油相作为一种氧载体，采用溶氧量较高的油相，会有利于双液相发酵体系中微生物生长，但是本请人在探究过程中意外发现，油相为矿油或植物来源合成油时，得到的发酵混合物经稀释过后在平板涂布时几乎没有发现菌种，除此之外本申请人还发现油相的选择还会影响发酵混合物的乳化效果；当油相为矿油时发酵混合物没有乳化作用。而当油相为植物油时，尤其是当植物油选自牡丹籽油、菜籽油、玫瑰果油中的任意一种时，制备得到的发酵混合物中的微生物不仅生长状态良好，而且发酵混合物具有良好的乳化效果，制备得到的发酵溶胞产物具有优异的抗氧化剂性。本申请人猜测一方面是因为矿油和植物来源合成油所存在的物理毒性会对营养物质的传递造成阻碍，导致细胞的生长受到影响；另一方面当油相为植物油，植物油为牡丹籽油、菜籽油、玫瑰果油中的任意一种时，在有利于微生物生长的同时还有利于油-水两液相之间的传质，有利于发酵混合物的乳化。
23、理论来说，乳化剂可以增加植物油的乳化程度，从而提高传氧速率，有利于微生物的生长，但是本申请人在实验探究过程中发现，并不是所有类型的乳化剂都有利于微生物的生长，同时，本申请人还发现，乳化剂的选择也会影响发酵混合物的乳化效果。当乳化剂为非离子聚甘油酯类乳化剂、非离子糖基乳化剂、非离子甘油酯类乳化剂中的任意一种；所述聚甘油酯类乳化剂为聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯；所述非离子糖基乳化剂为鲸蜡硬脂基葡糖苷；所述非离子甘油酯类乳化剂选自甘油硬脂酸酯se、甘油硬脂酸酯柠檬酸酯中的任意一种时，可以在保证微生物生长的同时有利于发酵混合物的乳化效果。
24、优选的，所述植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（40~80）:（5~25）：（4~16）：（11~33）。
25、优选的，所述植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（70~80）:（5~10）：（4~8）：（11~12）。
26、在实验探究过程中，本申请人进一步发现，通过控制植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（40~80）:（5~25）：（4~16）：（11~33），尤其是当植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（70~80）:（5~10）：（4~8）：（11~12）时，既有利于微生物的生长，而且制备得到的发酵混合物具有良好的乳化效果，除此之外，得到的发酵溶胞产物在较低的浓度（0.5%）下具有优异的抗氧化性。
27、优选的，所述高温灭菌温度为100~121℃，时间为10~20min。
28、优选的，所述高温灭菌温度为110℃，时间为25本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（40~80）:（5~25）：（4~16）：（11~33）。
3.根据权利要求2所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述植物提取液制备过程中S2采用低温微射流提取器进行提取的条件为：加料速度为12~18L/min、温度为25~30℃、搅拌转速为400~800rpm、搅拌时间为20~40min。
4.根据权利要求3所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述发酵菌株为清酒酵母或半乳糖酵母样菌。
5.根据权利要求4所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述发酵菌株的接入量以双液相发酵培养基的体积比计为2~20%。
6.根据权利要求5所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述发酵菌株的接入量以双液相发酵培养基的体积比计为8~15%。
7.根据权利要求6所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述需
8.根据权利要求7所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述微射流处理过程中的处理的条件为：加料速度为10~15L/min、搅拌转速600~1000rpm，搅拌时间为20~60min。
9.一种根据权利要求1~8任一项所述的双液相发酵溶胞产物的应用，将制备得到的双液相发酵溶胞产物用于制备护肤品。
10.根据权利要求9所述的双液相发酵溶胞产物的应用，其特征在于，所述双液相发酵溶胞产物在护肤品中的添加量为1~5wt%。
...【技术特征摘要】
1.一种双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述植物提取液、油相、乳化剂、水的重量比为（40~80）:（5~25）：（4~16）：（11~33）。
3.根据权利要求2所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述植物提取液制备过程中s2采用低温微射流提取器进行提取的条件为：加料速度为12~18l/min、温度为25~30℃、搅拌转速为400~800rpm、搅拌时间为20~40min。
4.根据权利要求3所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述发酵菌株为清酒酵母或半乳糖酵母样菌。
5.根据权利要求4所述的双液相发酵溶胞产物的制备工艺，其特征在于，所述发酵菌株的接入量以双液相发酵培养基的体积比计为2~20%。
...【专利技术属性】
技术研发人员：何子龙，吴炜城，彭颖华，汤燕珊，余振北，戴燕红，陈光华，
申请(专利权)人：广州市络捷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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